【doc】母源性铅接触对子代习肝微粒体药酶活性的影响

【doc】母源性铅接触对子代习肝微粒体药酶活性的影响 母源性铅接触对子代习肝微粒体药酶活性 的影响 .一 第21卷第4期 200O年1O月 湖北医科大学 ActaAcademaeMedidnseI-lubei Vol21,No.4 Oct,200O 母源性铅接触对子代鼠肝微粒体药酶活性的影响 — T— 苎 基础医学院药理学教研室,武汉430071 摘要目的:观察给母鼠孕期及哺乳期恢用不同剂量的铅水后,其子代鼠肝微粒体药酶活性的变化.结果:给 母鼠饮用小剂量铅水(50o,L,超过WHO规定的恢用水5倍),其子代4周龄鼠肝铅含量明显增加,氨基比林 脱甲基酶(AMD),谷胱甘肽.s_转移酶(Gsr)活性明显降低,P450含量及细胞色素c还原酶(NADPH-C),苯胺羟化酶 (ANH)无明显变化,子代8周龄鼠(既铅负荷排除4周后)与正常子代鼠相比各药酶活性均无显着差异;给母鼠饮用 大剂量铅球(50.0?L,超过WHO规定的饮用水标准500倍),其于代鼠出生4周后各药酶活性显着低于正常于代 鼠,P450含量及NADPH-C,ANH,A,GSY活性分别为正常4周龄鼠的58.O%,52.8%,81.O%,27.9%,50.2%.其中 对A加D活性的影响最大;8周后,肝铅含量可恢复正常,但与正常8周龄鼠相比, 肝药酶活性仍显着低于正常.结 论:在大剂量母源性铅接触情况下,即使在铅负荷排除较长时间后,肝铅古量恢复 正常时,肝药酶活性仍不能恢复 至正常水平,表明母源性铅接触对子代生物转化功能有长期而棵远的影响. 主题词量主亨,遗传学;墨!墨曼;塑些鱼塞!;动物,实验月f{狂仟 中盈分类号R345.99;R-332Pr宁【,,) 人类铅摄人量及铅负荷不断升高,而儿童铅中 毒流行比率远远大于成人,20世纪60年代起我国就 有关于儿童铅中毒的系列报道,主要是由于怀孕女 工接触铅导致婴儿体内铅负荷升高所致,既母源性 铅中毒.1943年?和Lord首次报道了铅对儿童 神经行为和智力发育的远期危害之后,众多的研 究表明,铅对人体的影响是全身性的,对神经,血液, 消化,泌尿,生殖,心血管,免疫等系统均有毒性作 用,但母源性铅中毒对幼儿肝药酶活性的影响尚未 见系统报道,本文拟观察孕鼠接触不同剂量铅后对 其子代鼠肝药酶活性的影响,以进一步研究铅对儿 童健康及发育的作用. 1材料和 1.1药品和试剂NADP,NADPH,细胞色素c还原 酶,异柠檬酸,异柠檬酸脱氢酶,谷胱甘肽(GSH),1一 氯_2,4一二硝基荤(CDNB)为Sigma产品,苯胺,氨基比 林为西安化学试剂厂产品,醋酸铅及其余试剂均为 国产分析纯. 1.2动物及处理6月龄雌性Wistar大鼠,体重 ?期北省自然科学基金资助项目96J071 (263.0?9.9)g,由同济医科大学动物室提供.动物 房洁净无尘,室温15,26?,相对湿度55%,光照12 h,不锈笼具喂养,饮用双蒸水,饲料中含铅量低于 (9O.8?1.97)鸺,ks,动物适应1周后,与健康雄性大 鼠以2:1配比合笼.以观察到阴栓为孕期第1d,孕 鼠分为3组:正常孕鼠组,饮用双蒸水;小剂量铅孕 鼠组,饮用500『L铅水(为WHO规定的饮用水标 准5倍);大剂量铅孕鼠组,饮用50mg/L铅水,至 分娩,母鼠分娩后4周内(哺乳期)继续给予相应浓 度的铅水,于幼鼠出生后第4周末各取幼鼠12—15 只,断颈处死,每3只幼鼠肝合一个标本,制各微粒 体,幼鼠于第4周末断乳,各组幼鼠均饮用双蒸水, 至第8周末断头处死,取肝脏制备肝微粒体,一80? 保存. 1.3生化分析在岛津UV-3000双光束双波长分 光光度计上测定细胞色素P450含量和细胞色素c 还原酶(NADPH-C),按文献测定苯胺羟化酶 (ANH),氨基比林脱甲基酶(ADM)活性,以CDNB为 底物测定谷胱甘肽一s.转移酶(CST)活性,用wry 法测定蛋白含量,用双硫腙法测定铅的含量J. ?ll 第4期丁虹.等.母椿性铅接触对于代鼠肝擞粒体药酶活性的影响28l 1.4统计分析数据以4-s表示,组问整异采用f 检验进行统计处理. 2结果 2.1母源性铅接触对子代4周龄鼠肝铅含量及肝 微粒体药酶活性的影响 结果可见,母鼠在怀孕期及哺乳期接触铅能明 显增加其子代4周龄鼠的肝铅含量,且随接触量的 增加而增加,母鼠饮用小剂量的铅水除能抑制?, G活性外,对其它药酶活性无明显影响;母鼠饮用 大剂量铅水则能明显抑制子代4周龄鼠肝药酶活 性,相关性分析可见,4周龄鼠肝铅含量与微粒体 P450含量(r=一0.991),NA?,H_C(,=一0.991), ANH(,=一0.930),AMD(,=一0.997),Gsr(,= 一 0.999)活性均呈良好的负相关,结果觅表1. 衷1母豫性铅接触对子代4周龄鼠肝铅含量夏肝微粒体辅活性的影响{?) 与正常组相出'P<005,一P<0..1.c?:正常子代4周蔚鼠;sL:小炯量铅撮人组;u:大剂量谘罐入组 2.2母源性铅接触对子代8周龄鼠肝铅古量及肝常,但当母鼠饮用大剂量铅水时,铅负荷排除4周 微粒体药酶活性的影响后,其子代鼠药醇活性仍明显低于正常子代鼠,相关 结果可见,在母源性铅负荷排除4周后,其子代性分析可见,8周龄子代鼠肝铅含量与药酶活性无相 鼠肝铅含量均可恢复正常.当母鼠饮用小剂量铅水关性,结果见表2. 时,铅负荷排除4周后,其子代鼠药酶活性可恢复正 寰2母源性铅接触对子代8周龄鼠肝钳音量夏肝茵物代黼活性的影响{?5) 3讨论 与正常氲相比P<O.05.一,<0.O1,c?;正常子代4周瓣鼠;吼W;小莉量铅摄^组;LLW:大荆量铅摄^组 有文献报道,铅对儿童的作用大多是长期,持续 潜在的作用,母源性铅中毒是儿童接触铅和铅负荷 的途径之一.本实验显示,母源性铅接触在铅负 荷排除后,受小剂量铅影响的幼鼠肝药酶活性可随 肝铅含量的恢复而恢复,但受大剂量铅影响的幼鼠 在肝铅含量恢复正常后,药酶活性仍显着低于正常 同龄鼠,其中对?,CHI"活性影响塌大,表明铅对 282湖北医科大学 幼鼠肝药酶活性的影响存在着底物选择性,提示了 母源性铅接触对儿童长期的影响. 参考文献 1袁宝山,吴宜群.环境铅荇染与儿童健康.国外医学卫生 学分册,199g,25(4):193 2BIvi啊皿曲l085:hlead.Gineva, WHO,1995 3OmmaT,‰R.The?m%bi啦pi删0fbv目 山r嘲哪凹I.Evidencefarhd啪cnn砒uIe.JBidChean. 1964,239:2370 4YgCS,Stzle.khartFS,KiehaIX:.Intetac~tmNADPH- cj怕chI锄eP-450工e阻8einmaerosom~.Bi~chem ?opArea,195'8,509:326 5PengRx,TuYY,Y衄g.Thema?demape6fi~蛐一 第21卷 0fahiaE=atymiemsm~舶聃由叫曲他dE. 1鼬byethar.o1.G|r|面舶球B,1982,3(12):1457 6NashT.ThecolorJiileti~estimationQf??kI竹deby?IB0f thelhnt~2sreaction.BiochemJ,1953,55:416 7HablgWH,Pa/~tNJ,J岫WB.qS-tranderase:the first?dcstepi?m??acidfonmti~m.JBidcb咖, 1974,249:7130 8工yOH,Ic0lJ曲M,FarrAL,eta1.Pwtein畦绷?e嘲n withthefdinpbeldreagent.JBid,1951,193:265 9中华人民共和国国家标准.食品卫生检验方法.理化部分. 北京:中国标准出版社,1986.942 ?nan-o~apa- 10SAHC.h??din0fthe~onal州丑g tidal.0gl】tolead.Adela/de:SmithAustralianHealthCam- n?,1993,56一? (I999-06415收稿) lnflueneeofLeadCausedbytheMotherRatsoHtheHepaticMicrosomal Drug-MetabolizlngE1]zymeActivitiesintheDescendantRats rangH叨g,胁gRlM血 DepammatofPhanmcofogy,BasicMedicalCollege,HubeiMedicalUnivexsity,Wuhan430071,China Tkpresentpaperinvestigatedthealterationsofhepaticmierosomaldn学 mel0lienzymeactivitiesind.ede. Bc衄d日I止 ratsafterthemotherratstookindkffexentconcentrationsofleadwater.TbeIeBId乜showed 鹊follows:1.m. paredWitllthenomud4.w? k-oldralsnochangesofP450content,NADPH-C,ANI-IactivitieswerefoundandtheA肋, GSTactivitieswereobviouslylowerinthe4.w自ek-0Idratsw】? semothertookinsmall-doseleadwater(5OOL)inthe pre1 日]ntst8gemadbreast-feedsmge.Butwhentheir/no~ertookinlarge-doseleadwator(50~g/L)inthepregnantstage andbreast-feedstage,allofthedn哥 metab0l1genyrneactivitiesdecreasedsignificmfly.Tbeinfluenceofleado/1GST activitywasfire? tserious;itsactivitywonly27.9%thatofthenormal4-w~k-olddescendantrats.2.Allofthe dItg-metal】 ohzingenactivitiesinfire8-week-olddescendantratawhoseHlotherhadtakeninsmall-doseleadwaterin thepregtantstageandbmast-feekstagecouldre,toretonormallevel.butwhentheirlllothertookinlarge-doseleadwater inthestageandbreast-feekstage,thedrugn1etab0li血唱en巧m曙 ofthedescendantratacouldn0tre蜘tonor- reallevel,andtheP450content,NADPH-C,ANH,AMD,GSractivities?ere78.6%,76. 6%,89.2%,57.5%,64.8% thatofthe11oi"~1al8-week-olddescendantratsrespectively.WhenHlotherratawentOiltah EinsInall-(10leadwater,no influenceollthedIt血既aboIi吐】genzymesofthedescendantratsw丑 sfound.Butwhenlllo~ermrstookinlazge-doselead water,themetab0l.genoymesofthedescendantratsweIeseriouslyinhibitedandcouldnotber estored8weeksaf- terbitch.Amengthe5dn学m豳b0lizingenz~aes,tlle'删‰cnceofloadonA 佃,GSTactivityofthedeacendantrataw? seriousandl舳乎lBDg.Fmmtheseresultswec蛐 seethattheinfluenceofleedOilthehepaticdn血et日bdenzyme ac~vitiesinvolve~thechoiceof吼lb吕na慨,andtheil1】?Il? ceofleadmmsedbym.tl1eren吐ledesc衄d日I止i8l册乎la苣曲嚷. 嘲leBdpoisoning/GE;mammalexposure;cytcchmr~P450;animals.1aboratory