阿托伐他汀钙片剂制剂及质量控制（可编辑）

阿托伐他汀钙片剂制剂及质量控制（可编辑） ATORVASTATIN CALCIUM PREPARATION AND QUALITY STANDARDSA Dissertation Submitted tothe Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree ofMaster of MedicineBy Shen Jiayong Supervisor: Associate Prof. Zhou Yuxin May, 2013关 于学位 论文独创 和 学术诚信 承诺 本人向 河南 大学 提出 硕士 学位申 请。 本人 郑重 声明 : 所呈 交的 学位 论文 是本 人在导 师的 指导 下独立 完成 的, 对所 研究 的课 有新 的见 解。 据我 所 知, 除文 中特 别加 以说 明、标 注和 致谢 的地 方 外,论 文中 不包 括其 他人 已经发 表或 撰写 过的 研究 成 果, 也不 包括 其他 人为 获得任 何教 育、 科研 机 构的学 位或 证书 而使 用过 的材料 。与 我一 同工 作的 同 事对 本研 究所 做的 任何 贡献均 已在 论文 中作 了 明确的 说明 并表 示了 谢意 。在此本 人郑 重承 诺: 所呈 交的学 位论 文不 存在 舞弊 作伪行 为, 文责 自负 。 学位申 请人 (学 位论 文作 者)签 名: 201 年月日 关 于学位 论文著作 权使用 授权书本人经河南大 学审核 批 准授予硕士学位。作为 学位论文的作者,本人完 全了解并同意河南大学 有关保留、使用学位论文 的要求,即河南大学有权 向国家图书馆、科研信息 机构、数据收集机构和 本校图书馆等提供学 位论 文(纸质文本和电子文本 )以供公众检索、查阅。 本人授权河南大学出于 宣扬、展览学校学术发展 和进行学术交流等目的, 可以采取影印、缩印、扫 描和拷贝等复制手段保 存、汇 编学 位论 文( 纸质 文本和 电子 文本 )。( 涉及 保密 内容 的学 位论文 在解 密后 适用 本授 权书)学位 获得 者( 学位 论文 作 者)签 名:201年月日 学 位论文 指导 教师 签名 :201年月日 摘 要 高胆固醇和高脂蛋白血 症是心血管疾病的主要 危险因素, 降低血浆胆 固醇水平是治 疗动脉粥样硬化疾病的有效方法, 因此, 降血 脂药物的研究与发展越来越受到人们的重 视 。 阿 托 伐 他 汀钙 是 新一 代 他 汀 类 降 血脂 药, 它 不 仅 能 降 低 胆固 醇, 而且也能降低甘油 三酯, 其作用远比辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀和洛伐他汀强。 目前国内生产的厂家较少, 临床上使用的片剂多为 大连辉瑞制药有限公司进口分装 的制剂。 本课题主要采用现代仪器分析方法, 在已颁布的阿托伐他 汀钙片制剂处方工艺 及质量的研究基础上, 对其有关物质进行了系统的研究, 制定出完善的制剂质量标 准草案,从而使本品制剂的安全性、有效性和产品的均一性得到保证。 首先, 本文对阿托伐他汀钙原料药和片剂现有的研究进展, 主要是对已公布的质量 标准进行了对比总结,为新的研究探明方向。 之后, 通过对阿托伐他汀钙片剂的制剂工艺进行摸索, 最终确定了符合国家药品标 准的制剂处方, 并对处方进行了工艺验证, 为本品质量标准的优化和改进提供研究对象。 同时, 总结分析其制剂和原料药中有可能存在的几种有关物质, 分析其研究的必要 性, 选中内酯、 甲 酯和环氧化物这三种最易产生, 对制剂影响最大的有关物质进行重点 分析研究,对其进行了结构测定。 然 后 , 建 立了 更 为合 理的HPLC 法 方 法 研 究。其 中 , 有 关物 质 检查 法高 效 液 相 色 谱 系统: 安捷伦HP1100液相系统; 色谱柱为Phenomene Ultremex C18,(250×4.6mm , 5μ m); 流动相为0.05mol/L 柠檬 酸溶液(用氨水调节pH 值4.0)- 乙腈- 四氢呋喃 (53 :27:20), 进行等度洗脱 ; 检测波 长为244nm ; 柱温为室温; 流速为1.5ml/min 。 经中间体对照和破 坏试验验证, 本品与有关物质中间体及降 解杂质可很好地分离。 测定结果表明, 本方法 专属性良好;耐用性良好,检测限为2.07ng,定量限为10.34ng。 10 小时内测定溶液中 总杂质量小于0.4% , 主 峰面积RSD为0.21% , 小于2% , 基本稳定; 有关物质进样精密度 RSD为0.34% , 小于2% , 精密度良好。 供试品 溶液色谱图中的杂质峰与对照溶液色谱图 中主峰面积相比, 相对主峰保留时间约为0.85的杂质含量不得大于0.4% , 相对主峰保留 时 间 约为1.3 的杂 质含量 不 得大 于0.2% ,相 对主 峰 保留 时 间约 为1.5的 杂 质含 量 不得 大 于 0.3% ,单个未知杂质含量不得大于0.2% ,总杂质含量不得大于1.8% 。I异构体检查法高效液相 色谱系统:安捷伦HP1260 液相系统;色谱柱为AD-H 手性色 谱 柱 , (250×4.6mm ,5 um ) ; 流 动 相 为 正 己 烷- 无 水 乙 醇- 冰 醋 酸 (920 :80 :3 ) , 进 行 等度洗脱 ; 检测波长为244nm ; 柱温:35?; 流速为 1.0ml/min 。 经中 间体对照和破坏试 验验证, 本品与有关物质中间体及降解杂质可很好地分离。 测定结果表明, 本方法专属 性良好; 耐用性良好, 检测限为3.0ng , 定量限 为7.5ng 。8小时内测定 溶液中异构体含量 变化小于0.1% , 主峰面积RSD为0.16% , 小于2% , 基本稳定; 有关物 质进样精密度RSD 为0.34% ,小于2% ,精 密度良好。 经稳定性研究表明, 本品对 温度、 湿度、 酸和氧化等因素较为敏感。 提示样品包装 时需密封, 防止氧化性物质、 酸性物质和水分等接触样品, 制剂过程中对中间体颗粒应 严格控制水分,储存时需注意环境温度不能过高,以免影响制剂质量和检验结果 。 经过上述一系列试验验 证,提出了制剂生产过 程中的质量控制, 同时参照相关 技术要求, 完善并制定了 阿托伐他汀钙片的 质量标准草案, 为本品的生产工艺、SOP 规 程的制定及产品的质量控制提供了可靠的科学依据。 关键词 :阿托伐他汀钙, 质量标准,有关物质,方法学 ,稳定性 II ABSTRACT High cholesterol and hyperlipoproteinemia is a major risk factor for cardiovascular disease, lower plasma cholesterol level is an effective method for the treatment of atherosclerotic disease, therefore, the research and development of the antilipemic agents has been paid more and more attention. Atorvastatin calcium is anew generation of Statins hypolipidemic drugs, it can not only lower cholesterol, but also lower triglycerides, and its affection is more significant than simvastatin, pravastatin, fluvastatin and lovastatinBesides Atorvastatin Calcium Lipitor which are imported packing sheets, the approved Atorvastatin Calciumpreparation of domestic manufacturers were few and can not meet the clinical needs. The research aim is focused on the related impurity of Atorvastatin Calcium tablets and its quality control by the modern instrumental analysis methods to ensure its efficacy, safety and uniformityFirstly, the published quality standards of Atorvastatin Calcium were summarized to find their Advantages and disadvantages, which were set as the further research. Then, the tablet preparation process was explored and confirmed, its preparation formula was confirmed. On this basis, the new and perfect standards would be subsequently explored and establishedSimultaneously, the impurity spectrum of Active Pharmaceutical Ingredient API and Atorvastatin Calcium tablets, were analyzed completely, the major related impurities, such as Lactone, methyl ester and epoxide of the tablets, which are most likely generated from API, were isolated and identifiedThen, one more reasonable control method of the related substances was established by HPLCMethod: Use Phenomene Ultremex C18 column (4.6m m × 250m m ,5μm )with the mobile phase consisting of 0.05mol/L citric acid solutionadjust the pH to 4.0 with Ammonia - acetonitrile - Tetrahydrofuran (53: 27:20 ), the flow rate was 1.5 mL/min; the detected wavelength was 244nm; the column temperature was room temperature. Result: The specificity and robustness were demonstrated good; within 10 hours the fixed total impurity in the solution was less than 1.0%; peak area RSD was 0.21%, below 2%, relatively stable; related substances in injection RSD was 0.34%, below 2%, precision well. the impurity content in the chromatogram of the test solution was calculated compared the major peak of the control solution, the impurity the relative retention time, RRT 0.85 is not above 0.4%; the impurity tRRT1.3 is not above 0.2%; the impurity RRT 1.5 is not above 0.3%; the single unspecified impurities is not above 0.2%; the total impurities are not above 1.8%. Conclusion: All impurities was isolated perfectly and verified to meet the requirementsThe lsomer test system was established by HPLC. Method: the column was AD-H chiral column , (250 ×4.6mm ,5um ) ; the mobile phase is consisted of N-hexane-Anhydrous ethanol-Glacial acetic acid (920 :80 :3); the detected wavelength is 244nm; the column temperature is 35?; the flow rate is 1.0L/min. Result: The specificity and robustness were demonstrated good; The LOD and LOQ of impurityIIIwere 3.0ngS/N3 and 7.5ngS/N10; the RSD of the lsomer peak area in the test solution in eight hours was 0.16%; the RSD of the injection precision is 0.34%. Conclusion: the atorvastatin calcium major peak can be well separated from the all simpurity peaks, the separated method was verified by the destruction experiment results, the determination results show that the method is accurate and fast The stability test shows that the atorvastatin tablest is sensitive to temperature, humidity, acid and oxygen. Suggesting that preparation packing should be packed by the dual aluminum film materials to prevent degradation; and the prepatation should be stored below room temperature; especially, the water content of the intermediate particles should be strictly controlled during the preparation processFurtherly, Standard operating procedures SOP of the atorvastatin calcium preparation was proposed; Reference to the relevant technical requirements, the quality standard of the atorvastatin calcium tablets was improved, especially involved the related impurity control. The above results provide adequate and reasonable support for SOP and the product quality control KEY WORDS: Atorvastatin calcium ,Standard quality, Related substances, Methodology, Stability. IV 目 录 摘 要I ABSTRACT III 前 言1 第 一章 阿 托伐 他汀钙 片制 剂研究 现状. 3 1.1 药理学研究现状 3 1.2 阿托伐他汀钙的研究概况. 3 1.2.1 概述4 1.2.2 质量标准汇总 4 第 二章 阿 托伐 他汀钙 片剂 制剂工 艺研 究7 2.1 剂型及规格研究 7 2.1.1 原料药的理化性质7 2.1.2 处方组成依据 7 2.1.3 市售品分析7 2.2 工艺及工艺流程 7 2.2.1 工艺7 2.2.2 制备工艺. 9 2.2.3 小试样品制备 9 2.3 多介质溶出对比研究9 2.3.1 溶出度试验9 2.3.2 试验方法 10 2.3.3 溶出对比研究10 第 三章 阿 托伐 他汀钙 片杂 质研究. 13 3.1 研究对象的确定 13 3.2 分析手段的确立 13 3.3 阿托伐他汀钙片降解杂质的系统研究 14 3.3.1 原料药中杂质的分析14 3.3.2 制剂中的杂质分析. 16 3.3.3 降解杂质的定性研究21 3.4 有关物 质含量测定的方法学研究 28 3.4.1 色谱条件(流动相及柱温条件)的筛选 28 3.4.2 耐用性试验 34 3.4.3 专属性试验 37 3.4.4 进样精密度 42 3.4.5 溶液稳定性 43 3.4.6 检测限定量限. 43V3.4.7 样品测定43 3.5 阿托伐他汀钙片异构体的研究 44 3.5.1 仪器与试剂. 44 3.5.2 样品溶液的制备45 3.5.3 波长选择 45 3.5.4 色谱条件筛选及系统适用性实验. 46 3.5.5 耐用性试验. 48 3.5.6 专属性试验. 50 3.5.7 溶液稳定性 54 3.5.8 定量限与检测限 55 3.5.9 样品的异构体检查. 55 第 四章 阿 托伐 他汀钙 片稳 定性研 究57 4.1 影响因素试验. 57 4.1.1 高温试验. 57 4.1.2 高湿试验. 57 4.1.3 光照试验. 58 4.1.4 结论60 4.2 加速与长期试验60 第 五章 阿 托伐 他汀钙 片质 量控制 方案 65 5.1 工艺过程质量控制方案 65 5.2 成品质量标准草案. 65 结 论. 69 参 考文 献. 71 致 谢. 73 VI前 言 前 言 临床研究、 流行病学研究 及病理研究显示, 低密度脂蛋白胆固 醇LDL-C 、 总胆固醇 TC 和载脂蛋白B apo B 血浆水平升高可以促 进人 的动脉粥样 硬化形成, 是心血管病发 [1] 生的危险因素 之一,高密度脂蛋白胆固醇水平升高则与降低心 血管疾病风险相关 。 胆酸整合剂 的降血脂 作用是公认的, 但因副作用较多, 患者 难以长期坚持服用。 近 年来, 虽 然通过改善胆酸整合剂的味道, 增强了患者的用药依从性, 也设法克服 了某些 副作用, 但胆酸整合剂仅能阻止肠道 对胆酸及胆固醇吸收, 并不能抑制胆固醇的体内合 成,而 大多数高胆固醇血症 的人群,其血中 TC 主要 来源于自身体内 的合成。由此,胆 酸整合剂 单用时, 并不能达到理想 的治疗效果 。 近年来 , 随着 3- 羟基-3- 甲基戊二酰辅酶 AHMG-CoA ) 还 原 酶 抑 制 剂 的发现 , 其 降 血 脂 作 用 受 到 越 来 越 多 的 关 注 。HMG-CoA 还原酶抑制剂能阻抑 胆固醇的生物合成 , 单用或与胆酸整合剂联用, 对高胆固醇血症 患 者有更明显的 临床疗效。HMG-CoA 还原酶抑 制剂是 新一代的降血脂药, 他汀类药物多 为甲基羟戊二酰辅酶 A (HMG-CoA ) 还原酶 抑制剂, 现有制剂有 洛伐他汀 、 普伐他汀、 [2-5] 氟伐他汀及 阿托伐他汀等 。 阿托伐他汀钙 片 (立普妥) 已在中国生产和进口, 上市规格:10mg ,20mg ,40mg 。 目前阿托伐他汀钙在国内获准生产 的厂家还较少, 远远不能满 足国内 广大高脂血症 患者 的需求 。 临床上使用的片剂多为 大连辉瑞 制药有限公司进口分装的制剂 , 由于进口药物 价格昂贵, 给患者带来 一定的经济压力。 而目前现有的质量标准, 对本品研究的系统性 和深入性参差不齐, 有的品种差距较大。 综合已有质量标准, 在杂质研究中需要注意以 下一些问题: 杂质谱未分析或分析不到位, 杂质研究缺乏针对性; 研究所用方法不合理, 不能有效检出药品中存在的杂质, 有的没有进行充分的方法比较和验证研究, 提供的研 究资料不能证明方法的可行性; 杂质限度的确立缺乏充分的依据, 忽视了杂质的归属和 安全性论证, 不能保证药品的质量和安全性; 仿制药品种需要充分关注与被仿制的参比 制剂的杂质对比研究; 若杂质种类或含量超出预期的限度, 首先要考虑完善原料药制 备 工艺、 制剂处方工艺, 从而降低杂质水平; 充分重视杂质谱图分析, 杂质谱图的定性分 析是杂质全面系统研究的基础。1 阿托伐 他汀 钙片 剂制 剂及 质量控 制 本文主要采用液相色谱法, 质谱法, 核磁共振法及紫外光谱法 等, 通过对比 研究国 内外现有质量标准, 按照相关技术指导原则的要求, 以 自制阿托伐他汀钙片 为研究对象, 并以市售产品 立普妥为参比制剂 进行溶出曲线相似性考察 。 之后对有关物质及异构体检 查进行了系统的方法学研究 , 为杂质检查 制定出最佳的检测方法及色谱条件, 并对样品 进行测定 。 然后对阿托伐他汀钙片中主要的 降解杂质- 光照和氧化产物 (环氧化物 ) 、酸 破坏产物 ( 内酯) 及碱 破坏 产物 (甲酯) 进行 了制备, 并对其进行定性和定量研究。 在 制剂稳定性研究中, 采用质谱法对自制片与对照品进行了对比研究。 这项课题的研究结 果不仅为合成工艺的优化确定方向, 也为新药申报工作的质量标准提供了较为可靠的实 验依据。 2第一章 阿 托伐 他汀 钙片 剂 制剂研 究现 状 第 一章 阿 托伐他 汀钙 片 制 剂研究 现状 1.1 药理学研究现状 他汀类药物是近十几年开发的 3- 羟基-3- 甲基 戊二酰辅酶 A HMG-CoA 还原酶抑 制剂, 是冠心病、高血 压及脑血管病的一、二 级预防药物。目 前国际 上常用的他汀类药 物 可 分 为 三 代, 第 一 代 用 发 酵 的 方 法 得 到, 包 括 辛 伐 他 汀 simvastatin 、 洛 伐 他 汀 lovastatin 和普伐他汀 pravastatin ; 第二代 的氟伐他汀 fluvastatin 为人工合成的消旋 体; 第三代为人工合成的对映体, 主要有匹伐他汀 pitavastatin和罗 伐他汀 rosuvastatin [6,7] 等 。 HMG-CoA 还原酶是合 成胆固醇的限速酶, 他汀类结构与 HMG-CoA 相似, 对酶的 亲和力比 HMG-CoA 高 10000 倍, 因此能在 肝脏中对 HMG-CoA 还 原酶产生竞争抑制作 用, 由于肝脏合成 apoB-100 的水平降低, 从 而减 少了极低密度脂蛋白(Very low density lipoprotein ,VLDL ) 的 合成; 另一方面通过机体自身的调节机制, 还可以代偿性增加低密 度脂蛋白 (Low density lipoprotein ,LDL 与其受 体的亲和力及肝细胞膜上 LDL 受体的数量 和活性, 同时能够摄取血浆中大量的 LDL, 通过 LDL 受体代谢途径最 终代谢为胆汁酸而 排出体外, 进一步降低了血浆中 低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)、 极低 密度脂蛋白 胆固醇 (VLDL-C ) 等 的 水 平 。 此 外, 他 汀 类 药 物 还 能 使 血 管 平 滑 肌 对 扩 血 管 物 质 的 反 应 性 提 高、 使动脉壁泡沫细胞的形成减少, 他汀类药物可以抑制血管平滑肌细胞V SMCs 增殖、 迁移和促进其凋亡、 同时对单核细胞和巨噬细胞的分泌和粘附功能以及血小板的聚集具 [8] 有抑制作用 。 1.2 阿托伐他汀钙的研究概况 阿托伐他汀钙(Atorvastatin Calcium ),结构式为: 3 阿托伐 他汀 钙片 剂制 剂及 质量控 制 化学名称 :[R- (R ′, R ′ )]-2- (4- 氟苯基)-.- 二 羟基-5- (1- 甲基乙基)-3- 苯基-4-[ (苯 胺)羰基]-1- 氢- 吡咯-1- 庚酸钙三水 合物。 1.2.1 概述 阿 托 伐他 汀 钙片是 美国华 纳- 兰伯 特 公司 开 发的 品 种,1997 年上 市后 , 并入 辉 瑞 公 司,我国于 2003 年 6 月批准该公司的 阿托伐他汀钙 片进口注册申请,商品名为立普妥 (lipitor ) , 剂型为片 剂, 国外上市规格为 10mg 、40mg 、80mg (以阿托伐他汀钙 计) , 国内进口的规格有:10mg 、20mg 、40mg (以 阿托伐他汀钙 计) 。 阿 托伐他汀上市之后 迅速成为全 球降血脂的畅销药物, 目前 国内仅大连辉瑞制药、 北京嘉林生物制药和河南 天方药业有销售,商品名分别为 “ 立普妥” 、“ 阿乐 ” 和“ 尤佳” 。 在 阿托伐他汀钙片质量 标准研究中,最容易忽 略的是对产品中非对映 光学异构体和 对映光学异构体的研究。 在大多厂家 提供的有关物质 研究资料中,有关物质检查的色谱 条件并不能 很好的分离他汀类药物的对映光学异构体 (某些色谱条件 仅能分离非对映光 学异构体) , 因此需要采用手性色谱条件进行研究。 在制定质量标准时需要注意 有关物 质、非对映光学异构体和对映光学异构体应单独设定 质控限度。因为 β,δ -二羟基戊 酸结构中 两个手性中心的结构是他汀类药物起效的关键, 在稳定性考察中不设与之相关 的考察指标是不合理的。 因此只有包含异构体考察项的稳定性试验数据, 才能全面真实 的反应产品的质量变化 。 在 现有的质量标准中 , 大多没有对阿托伐他汀钙 片的降解杂 质进行深入细致的研究 , 对有关物质的种类及限量 也未作严格要求。 因此, 我们结合制 剂工艺研究, 以 自制样品 为研究对象,对阿托伐他汀钙的 鉴别、有关物质和异构体的检查 及杂质限量进行研究, 最终起草并 制定了更为严格 的质量标准。 1.2.2 质量标 准汇总 4 第一章 阿 托伐 他汀 钙片 剂 制剂研 究现 状 表 1-1 阿 托伐 他汀 钙各 质 量标准 汇总 表 Tab.1-1 The list of Atorvastatin Calcium quality standard 原料药 制剂标 准 本品质 量标 准 进口注 册标 准 进口注 册标 准 WS1-X-127-2003Z EP 7.5 USP 35 JX20000048 JX20070073 Phenomene Ultremex C18 Phenomene Ultremex 色谱柱 C18 柱,250×4.6mm ,5μm C18 柱 柱,250×4.6mm ,5 μm C18 柱, 250×4.6mm , 5 μm 缓冲液 :3.9g/L 乙酸铵溶 液(pH 5.0 ) 0.05mol/L 枸? 酸铵 0.05mol/L 柠檬酸溶 液 ( 用 0.05mol/L 柠檬酸溶 液( 用 氨水调 节 pH 值 4.0 ) 流动 相 A :乙 腈- 四氢 呋 喃-缓 冲液 溶液 (用 氨水 调节 pH 氨水调 节 pH 值 4.0 )- 乙 流动相 21:12:67 - 乙腈- 四氢呋喃 值 4.0 )- 乙腈- 四氢呋 腈- 四氢呋喃 流动 相 B :乙 腈- 四氢 呋 喃-缓 冲液 (53:27:20) 喃(50 :30 :20 ) (53:27:20) 61:12:27 - 1.5mL/min 1.5mL/min 1.5mL/min 流速 - 244nm 244nm 检测波 长 柱温 - 35? - - 室温 理论板 数按 阿托 理论板 数按 阿托 伐他 汀峰 伐他汀 峰和 和 PD130694 峰应 分别 不 PD130694 峰 应分 低于 5000 和 7000 , 两 峰的 理论塔 板 数 按阿 托伐 他 别不低 于 5000 和 拖尾因 子分 别不 过 1.2 和 汀钙计 应 不 低 于 5000,主 理论板 数按 阿托 伐他 杂质 B 与 阿托 伐他 汀的 分 离度不 低于 系统适 用性 汀峰应 分别 不低 于 7000, 两峰 的拖 尾 1.5, 两峰 之间 的分 离度 应 峰的拖 尾因 子应 不大 于 1.5 3500 因子分 别不 过 1.2 不小 于 5 ; 阿 托伐 他汀 峰和 1.2, 主峰 与杂 质峰 的分 离 和 1.5 ,两 峰之 间 PD130694 峰 的峰 面积 相对 度应不 小 于 5。 的分离 度应 不小 标准偏 差应 分别 不得 过 于 5 1.0% 和 2.0% 。 记录色 谱图 至主 记录色 谱图 至主 成分 记录色 谱图 至主 峰保 留时 记录色 谱图 至主 峰保 留 记录时 间 85 分钟 70 分钟 峰保留 时间 的 2.5 保留时 间 的 3 倍 间的 3 倍 时间 的 3 倍 倍5 阿托伐 他汀 钙片 剂制 剂及 质量控 制 目 前 常 见 的 参 考 标 准 主 要 有 : 阿 托 伐 他 汀 钙 片 进 口 药 品 注 册 标 准JX20000048 、 JX20070073 、国家药品标准WS1-X-106-2003Z 、USP 及EP 原料药等 标准。 各质量标准 [9-13] 中有关物质测定法汇总如表1-1 。 参考 阿 托 伐 他 汀 钙 片 进 口 药 品 注 册 标准JX20000048 和JX20070073 中 阿 托 伐 他 汀 钙 项下 有 关 物 质 方 法 进 行 。 阿 托 伐 他 汀 钙 片 进 口 药 品 注 册 标准JX20000048 和JX20070073 标准中, 有关物质检查 方法采用与含量测定均采用相同的方法, 为高 效液相色谱法, 供 试 品 溶 液 为0.1mg/mL , 流 动 相 为 等 度 洗 脱 , 自 身 对 照 法 控 制 杂 质 含 量 , 其 中 相 对 保 留 时间为0.9 、1.3 、1.7 、2.3 的 杂 质 含 量 不 得 过0.5% , 任 一 单 个 杂 质 含 量 不 得 过0.2% ,杂 质总和不得过2.0% 。与JX20000048 标准不同的是 ,JX20070073 标准中规定了色谱柱 Phenomene Ultremex C-18 ,250mm ×4.6mm ,5μm ,流速为1.5mL/min ;系统适用性试 验溶液重复进样5次, 阿托伐他汀钙和PD130694 峰的峰面积相对标准偏差应分别不得过 1.0% 和2.0% 。 阿托 伐 他汀 钙 原料 进 口注 册 标准和 欧 洲标 准7.1中, 以相 对 保留 时 间确 定 已 知 杂 质 , 按 自 身 对 照 法 控 制 杂 质 含 量 , 已 知 杂 质 不 得 过0.3% , 其 它 任 一 单 杂 不 得 过 0.1% ,总杂不得过1.5% 。 异构体检查法: 照高效液相色谱法 (中国药典 2010 年版二部附录 V D ) , 用 AD-H 手 性色谱柱,250×4.6mm ,5um ;以正己烷- 无水乙醇- 冰醋酸(920?80?3 )为流动相, 检测波长为 244nm ,设定柱温为 35?。精密量取对照溶液 10μl ,调节检测灵敏度, 使 对照溶液主峰的高度在满量程的 10% 左右。分别精密量取样品溶液和对照品溶液各 10 μl , 注入高效液相色谱仪, 记录液相色谱图至主峰保留时间的 2 倍左右, 样品溶液色谱 图中在杂质 E (相对保留时间约为 0.7)位置如有杂质峰,其峰面积应小于对照溶液峰 面积(0.3% ) ;主成分峰后如有杂质峰(杂质 B 的相对保留时间约 为 1.5) ,其峰面积应 小于对 照溶液峰面积的 2/3 (0.2%)。 在现有的质量标准中, 有的仅按照国家标准进 行有关物质检查,有的 在此基础上增 加了对映异构体的检查 , 并未对具体有关物质进行定 量和定性研究, 也没有与上市产品 进行质量对比研究, 色谱条件等也有待进一步改善。 为了进一步完善阿托伐他汀钙片制 剂质量标准,我们对其进行了处方工艺研究, 之后对其进行了处方工艺验证。 6 第二章 阿 托伐 他汀 钙片 剂 制剂工 艺研 究 第 二章 阿 托伐他 汀钙片 剂制剂 工艺研究 2.1 剂型及规格研究 本品由美国 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 于 1997 年首次在美国上市, 阿托伐他汀钙 片(立普妥)于 2003 年在我国批准上市;本品为薄膜衣片,规格为 10mg/ 片,用常用 的起始剂量为 10mg 每 日一次。 剂量调整时间间隔为 4 周或更长。 本品最大剂量为 80mg 每日一次。 每日用量可在一天内的任何时间一次服用, 并不受进餐影响。 规格为 10mg 。 2.1.1 原料药 的理化 性质 本品为白色或类白色结晶性粉末;无臭,味苦。本品在甲醇中易溶,在乙醇或丙酮 中微溶,在水中极微溶解,在氯仿、乙醚中几乎不溶或不溶。 2.1.2 处方组 成依据 阿托伐他汀钙原研厂家(美国辉瑞)的说明书显示对照药品使用的辅料有碳酸钙、 微 晶 纤 维 素 、 一 水 乳 糖 、 交 联 羧 甲 基 纤 维 素 钠 、 吐 温-80 、 羟 丙 基 纤 维 素 、 硬 脂 酸 镁 , 参照对照药品的处方并结合自身的处方工艺研究, 我公司最终确定的处方中所使用的辅 料 : 碳 酸 钙 、 微 晶 纤 维 素 、 乳 糖 、 交 联 羧 甲 基 纤 维 素 钠 、 吐 温-80 、 羟 丙 基 纤 维 素 、 硬 脂酸镁,辅料与原研厂家一致 。 2.1.3 市售品 分析 处方中各辅料作用分析见表 2-1。 美国专利 (US5686104A) 公布了阿托伐他汀钙片 的片芯处方组成及制法, 专利中 特别指出了阿托伐他汀钙如采用湿造粒法制备 主成分含 量迅速下降 , 专利中通过加入碳酸钙, 使用 本品固体制剂可通过湿法造粒法制备 而不影 响主药 的稳定性,专利中未对 包衣处方进行描述。 2.2 工艺及工艺流程 2.2.1 工艺 参照阿托伐他汀钙市售品处方,确定其工艺如下:7 阿托伐 他汀 钙片 剂制 剂及 质量控 制 (1) 原辅料准备: 阿托伐他汀钙过 120 目筛备用; 碳酸钙、 微晶纤维素、 一水乳糖、 交联羧甲基纤维素钠,过 80 目筛备用。 (2)混料:称取处方量的阿托伐他汀钙、碳酸钙、微晶纤维素、一水乳糖 及 1/2 处 方量的交联羧甲基纤维素钠,混匀。 (3)粘合剂制备:称取处方量 的吐温-80,加入到 60mL 水中,50 ? 加热溶解后将 加入处方量的 羟丙基纤维素, 搅拌混合后放置 4 小时左右,制成含羟丙基纤维素 5% 的 水溶液 。 (4)制粒:用上述溶 液制软材,过 24 目筛制粒。 (5)干燥:将湿颗粒置 60?干燥 2 小时。 (6)整粒:干燥后颗粒,过 24 目筛整粒。 (7) 总混: 取剩余 1/2 处方量的交联羧甲基纤维素钠和处方量硬脂酸镁加入颗粒中, 混合均匀。 (8)压片:测定颗粒中主药的含量,确定片重, Φ8.0mm 圆形冲压片。 (9) 包衣: 取处方量的 包衣粉, 用 70% 乙醇制 成 7% 的包衣液, 将片 芯置包衣锅内 , 控制进风口温度 80?, 包衣液在搅拌下喷入包衣锅内进行包衣 ( 衣膜厚度以片芯增重为 2% ~3% ) 。 (10)包装:检验合格后,包装 。 表2-1 专 利中 辅料 组成 比分析 结果 表 Tab.2-1 the inactive ingredients 成分 用量(g) 处方比 例(% ) 作用 103.65* 6.91 阿托伐 他汀 钙 活性成 分 330.0 22.00 碳酸钙 填充剂 、稳 定剂 600.0 40.00 微晶纤 维素 填充剂 332.85 22.19 一水乳 糖 填充剂 90.0 6.00 交联羧 甲基 纤维 素钠 崩解剂 30.0 2.00 羟丙基 纤维 素 粘合剂 6.0 0.40 吐温-80 增溶剂 7.50 0.50 硬脂酸 镁 润滑剂 15000 100.00制成(10000 素 片) 备注: 专利 中阿托伐他汀钙的投料为不含 结晶 水或不含水的 阿托伐他汀钙量, 相当 于阿托伐他汀 100g 。 8 第二章 阿 托伐 他汀 钙片 剂 制剂工 艺研 究 2.2.2 制备工 艺 根据正交实验初步确定的包衣工艺, 进行一批验证性实验 , 制 备如下: 阿托伐他汀 钙过 120 目筛备用,碳 酸钙、微晶纤维素、一水乳糖、交联羧 甲基纤维素钠,过 80 目 筛备用;称取处方量的阿托伐他汀钙、碳酸钙、微晶纤维素、一水乳糖、1/2 处方量的 交联羧甲基纤维素钠, 混匀; 另称取处方量 的吐温-80, 加入到 60mL 水中,50?加热溶 解后将加入处方量的 羟丙基纤维素, 搅拌混合后放置 4 小时左右, 制成含 羟丙基纤维素 5% 的水溶液; 用上述溶液制软材, 过 24 目筛制粒; 湿颗粒置 60?干燥 1 小时; 干燥后 颗粒, 过 24 目筛整粒; 取剩余 1/2 处方量的交联羧甲基纤维素钠和处方量硬脂酸镁加入 颗粒中, 混合 均匀; 压 片 ;取包 衣粉 适量, 用*% 乙醇 制成*% 的包 衣 液, 将片 芯置包衣 锅内, 控制进风口温度 80 ?, 包衣液在搅拌下喷入包衣锅内进行包衣, 衣膜厚度以片芯 增重为 2% ~3% 。 按照 相关的技术指导原则的要求 , 对其进行考察, 与对照药品进行对比。 结果显示, 按照正交实验初步确定的包衣工艺制备的样品, 包衣后崩解、 溶出几乎未改变, 包衣后 有效的掩盖药 品本身的苦味, 并能有效的起到防潮作用, 样品各项检测结果均符合规定, 且与对照药品基本一致。 故阿托伐他汀钙片的包衣工艺参数: 包衣锅与水平角度 为 40? , 喷枪与片床距离为 20cm~25cm , 稀释液为*% 乙醇, 包衣锅转速 保持在 10~15rpm , 包衣 液固含量为*% ,进风温度 控制在 70~80?。 2.2.3 小试样 品制备 按照 上述确定的制剂 处方工艺制备小试样品, 数量:1000 片, 批号:110108。 按照 相关的 技术指导原则的要求,对 小试样品的各项指标 进行测定和。 结果显示, 采用湿法制粒压片再包胃溶性薄膜衣工艺制备的小试样 品, 各项检测结 果均符合规定。 2.3 多介质溶出对比研究 2.3.1 溶出度 试验 照阿托伐他汀钙片 ( 立普妥) 进口注册标准 JX20000048 中, 选择水 作为 溶出介质, 同时, 选择 pH 值为 1.0 盐酸溶液、pH 值为 2.88 醋酸溶液、pH4.5 值为醋酸- 醋酸钠缓冲 [14] 液、pH 值为 6.8 磷酸盐缓冲 溶液各 900mL 为 溶出介质,进行溶解度试验 。9 阿托伐 他汀 钙片 剂制 剂及 质量控 制 试验结果表明, 阿托伐他汀钙 原料药在 pH 值为 1.0 盐酸溶 液、pH 值为 2.88 醋酸溶 液、pH4.5 值为醋酸- 醋 酸钠缓冲液、pH 值为 6.8 磷酸盐缓冲溶液中溶解,在 水中易溶。 2.3.2 试验方 法 [15] 取本品, 按照药典中 溶 出度 的测定方法(药典 二部附录?C 第二法)测定 ,以水 900mL 作为溶出介质, 转速为每分钟 50 转,依法操作,分别在 5、15、30 、45、60 分 钟取样 10mL , 滤过, 取续滤液作为 供试品溶液; 另取阿托伐他汀钙对照品约 11mg,精 密称定, 置 20mL 容量 瓶中, 用混合溶剂[0.05mol/L 枸橼酸铵溶 液 (0.05mol/L 枸橼酸用 氨水调节 pH 值 7.4) - 乙腈 (50: 50) ] 稀释并定容至刻度, 混匀。 精 密量取 1mL,置 50mL 容量瓶中, 加水稀释 并定容 至刻度, 混匀, 制 得每 1mL 约含阿托伐 他汀 10μg 的对照溶 液。 精密量取 供试品溶液和 对照溶液各 20μ l,照药典规定的 高效液相色谱法测定, 按外 标法以峰面积 计算出每个点的溶出量, 结合取样时间点 绘制溶出曲线; 并 计算本品在各 [16] 取样时间点的 累计溶出量 。 2.3.3 溶出对 比研究 取市售品( 立普妥)138709K 批及自制 110108 批样品各 6 片, 按照上述 实验方法 操作,计算 溶出相似度 f 值。 2 (1)水作为溶出介质: 样品(批号:110108) 和对照药品,在 30 分钟时累计 溶出 量分别为 :93.1% ,89.9% ,均达 到溶出 度限 度 85% 要 求; ; 自制 品 与市售品 二者 溶出行 为基本相 同(f 值为 67)。 2 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 20 40 60 80 溶出时间 溶出曲线相似性f 2 因子法评价(水作为溶出介质)图 2-1 水为 介质 的溶 出对 比图 Fig. 2-1 Comparison of dissolution profile water as the medium 10平均累积溶出度(%)第二章 阿 托伐 他汀 钙片 剂 制剂工 艺研 究 (2)pH 值为 1.0 的盐酸溶液作为溶出介质: 样品 (批号:110108) 和 对照药品, 在 30 分钟时累计 溶出量分别为:32.7% ,32.4% ,均 未达到溶出度限度 85% 要求;自制品 与市售品二者溶出行为基本相同(f 值为 87)。 2 45 40 35 30