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力竭性游泳运动对大鼠肾脏功能的损伤

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力竭性游泳运动对大鼠肾脏功能的损伤
中国临床康复 第 !"卷 第 #" 期 !""#$"%$!% 出版 !"#$%&% ’()*$+, (- .,#$#/+, 0%"+1#,#2+2#($3 4+5 67 689: ;(,< =9 >(< ?9 !基础研究! 力竭性游泳运动对大鼠肾脏功能的损伤! 李 娟 &"常 波 ! &沈阳大学体育学院理论教研室"辽宁省沈阳市 &&""’’#!沈阳体育学 院运动生理生化教研室"辽宁省沈阳市 &&""(! 李 娟!"女"&)#’ 年生"辽宁省沈阳市人"汉族"!""’ 年沈阳师范大学 毕业"硕士"副教授"主要从事运动解剖学方面的研究$ 中图分类号%*(()+’ 文献标识码%, 文章编号%&#-&$%)!#.!""#/!"$"&&($"( 收稿日期%!""%$&!$!" 修回日期%!""#$"($&( &"%$%"$)$-00( 1 23!4’ !""#$%& ’" ()*+,&%-.( &/-00-12 ’1 ",13%-’1+4 4(&-’1 ’" 5-61(7 -1 89%& $% &’()!* +,()- ./# &35677 *889 87 :;<8=>? @8AADEF6A GHIF65E8J 87 3;6JB KJEL<=M DE5>? 3;6JB &&""’’? NE68JEJB C=8LEJFDE8A8B> 6JH QE8F;<9ED5=>? 3;6JB C;>DEF6A GHIF65E8J RJD5E5I56JB &&""(!? NE68JEJB C=8LEJF? @8AADEF6A GHIF65E8J 87 3;6JB KJEL<=DE5>? 3;6JB &&""’’? NE68JEJB C=8LEJF; !""#$"($&( H< USV,W 6JH 7=<< DIA7;>H=>A .7=< EJ ]EHJ<> ;898B 87 3F;88A 87 C;>DEF6A GHIF65E8J 6JH X<6A5;? 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" 组!运动后 #$ " 组大鼠在玻璃泳池中进行无负重的力竭游泳$一 般 %&’($&) "& 泳池规格 !&) *+)&’ *+)&’ *$水深 )&$ *$ 水温 %, -& 力竭标准为动物下沉后 !) .不露出水面& 分别于运动后各时相点活杀取材$进行指标测定& 正 常对照组大鼠不进行任何运动$仅常规饲养& 肾脏组织匀浆的制备"各组大鼠断头处死后$立即 取出大鼠左侧肾脏$在冰冷的生理盐水中漂洗$除去血 液$滤纸试干$称重$放入小烧杯内$用移液管量取预冷 的生理盐水$ 生理盐水的体积总量是组织块重量的 / 倍$用移液管取总量 , 0 %的冰生理盐水于烧杯中$用眼 科小剪快速剪碎组织块$再将其倒入玻璃匀浆管中$用 组织捣碎机 1 ))) (! ’)) 2 0 *34 上下研磨制成组织匀 浆$倒入离心管中$再用余下的总量 1 0 %的冰冷生理盐 水冲洗匀浆管$并入离心管内$制成 1)) 5 0 6 的肾组织 匀浆&取出 , *6肾脏匀浆以 ! ))) 2 0 *34$离心 ’ *34$ 吸取上清液用于测定一氧化氮等’余下肾组织匀浆以 % ))) 2 0 *34$离心 !) *34$吸取上清液用于测定各项 指标& 肾组织匀浆丙二醛含量的测定" 采用南京建成 生物研究所丙二醛试剂盒进行测定& 测定原理 是过氧化脂质降解产物中的丙二醛可与硫代巴比妥 酸缩合$形成红色产物$在 ’%, 4* 处有最大吸收峰& 具体方法为旋涡混匀器混匀$ 试管口用保鲜薄膜扎 紧$用针头刺一小孔$/’ -水浴 $) *34$取出后流水 冷却$然后 % ’))($ ))) 2 0 *34 离心 !) *34$取上清 于 ’%, 4* 处$! 7* 光径比色杯$蒸馏水调零$测定 吸光度值& 计算公式"组织中丙二醛含量89(测定管 吸光度值:测定空白管吸光度值 ) 0 (标准管吸光度 值:标准空白管吸光度值);+标准品浓度 0蛋白含量$ 单位 !*<= 0 5% 肾组织匀浆游离巯基含量的测定" "将 %/&> *5 二硫代硝基苯甲酸溶解在 !) *6 磷酸盐缓冲液中 (?@8A&))$得溶液 B%#组织匀浆上清液或线粒体悬浮 液适当稀释$取 % *6 稀释液$加入磷酸盐缓冲液(?@ 8C&)), *6$双蒸水 ’ *6 制成溶液 D% $取 B 溶液 % *6$加入 D 溶液 )&)# *6$在 A’#:分光光度计上比 色$%8$1# 4*%&计算样品的浓度(E))8! 0 ’+F$其中 ! 为 $1, 4* 处的吸光度值$’ 为消光系数$F 为稀释 倍数% 肾组织匀浆钠钾泵腺苷三磷酸酶活性的测定"采 用南京建成生物工程研究所三磷酸腺苷酶试剂盒测 定% 计算公式"腺苷三磷酸酶活性8(测定管吸光度值: 对照管吸光度值) 0标准管吸光度值+标准管浓度+反 应体系中样本稀释倍数+> 0蛋白含量% 标准管浓度为 1 **<= 0 6$反应时间为 1) *34$乘以 >为 1 "% 组织蛋白的定量" "称取考马斯亮蓝 1)) *5$溶 于体积分数为 )&/’ 的乙醇 ’) *6 中$ 加入蒸馏水约 C)) *6$加体积分数为 )&C’ 的磷酸 1)) *6$最后补足 水至 1 6$混匀% 避光室温保存% 使用前用滤纸过滤 1 遍$去除试剂中的杂质$室温保存%(取白蛋白标准液$ 按照所标浓度$用含有 ’ *5 0 6 的生理盐水稀释$室温 存放% $液体摇匀后$’ *34 后 = 7* 比色杯*分光光度 计 >)) 4*波长$测定吸光度% 主要观察指标" 力竭游泳后各组大鼠肾脏组织丙 二醛含量* 游离巯基含量及钠钾泵腺苷三磷酸酶活性 的变化% 统计学分析"由第一作者采用 GHGG C&) 软件包进 行统计处理$数据均以 "#$ 表示$组间比较采用独立样 本 %检验进行统计分析% ! 结果 ,&1 实验动物数量分析 实验选取清洁级雄性 GF 大 白鼠 %)只$全部进入结果分析$中途无脱落% ,&, 力竭游泳后各组大鼠肾脏组织丙二醛含量*游离 巯基含量及钠钾泵腺苷三磷酸酶活性的变化 运动后 1$,$ " 组肾脏组织中丙二醛含量均显著高于正常对 照组(& I )&)1$& I )&)’)% 运动后即刻组$运动后 1 "$ ,$ "组巯基含量均显著低于正常对照组 (& I )&)’ 或 )&)1)%运动后 1 "$,$ "组钠钾泵腺苷三磷酸酶活性均 显著低于正常对照组(& I )&)1)% 见表 1% " 讨论 长时间力竭性游泳或跑步引起骨骼肌*心肌*肝脏 线粒体结构和功能变化$ 这些变化可能与运动性内源 性自由基生成增加有关9%:/;% 因运动引起的自由基对肾脏的损伤已有报导$大 鼠力竭游泳后肾组织匀浆中脂质过氧化含量增加$丙 二醛含量明显升高$超微结果发生改变$其中包括基膜 增厚*毛细血管极度充盈肿胀*线粒体减少等% 运动时 由于血液重新分配$肾血流急聚下降$肾脏的这种不完 全缺血状态形成了+运动性肾缺血,$运动停止后$肾血 供应恢复形成了+运动性缺血再灌注,% 由于缺血和再 灌注可引发的脂质过氧化反应可能会攻击细胞膜和亚 表 1 长时间力竭游泳后各组大鼠肾脏组织丙二醛含量*游离巯基含量 及钠钾泵腺苷三磷酸酶活性的变化 J"#$K 组别 ’ 正常对照组 运动后即刻组 运动后 1 "组 运动后 #$ "组 A A C C 1&)$CL)&)/ 1&1$CL)&C) 1&C)’L)&%#$M 1&#%)L)&1/#N >A&>,L%&$> >!&%$L,&!>N ’A&%/L%&’)M ’>&>>L%&,/N 与正常对照组比较$N& I )&)’$M& I )&)! ,&))L)&!! !&CCL)&!! !&’>L)&!,M !&!%L)&!$M 丙二醛 O!*<= 0 5P 游离巯基 J!*<= 0 5P 钠钾泵腺苷三磷酸酶J4QNR 0 5P SGGT 1>A1:’/#> ET #1:1$A) 0 U ((()*+,-./0-12 ./344567548$9’:0-12 李 娟$等!力竭性游泳运动对大鼠肾脏功能的损伤!!" !""# $%&$’()*% +# *$’$,&- ./ ! !!!"#$%&’()*+, 中国临床康复 *--%年 (月 *(日 第 $-卷 第 *-期 细胞膜!使其液态性"流动性以及通透性发生改变!进 而造成膜功能的障碍! 并影响整个器官的生理功能# 目前! 许多学者都用缺血’再灌注的自由基损伤理论 解释急性运动一自由基产生及由此引发的脂质过氧 化反应的关系!认为组织缺血$缺氧%0$-1或氧化代谢增 强与组织过氧化有关02!%!)!$$!$*3# 许多研究表明!自由基是引起许多疾病$运动蛋白 尿%和损伤$运动性损伤%等病理过程的重要因素 0$24$,1# 长时间剧烈运动时!肾脏受危害严重!常发生肾功能 异常! 运动引起肾脏自由基产生增加及自由基引起 的损伤研究屡有报道# 大鼠进行大运动量后肾脏脂 质过氧化水平升高!肾小球&肾小管超微结构发生改 变#预先缺血的心肌&肾脏再灌注时产生的损伤远大 于单纯的缺血性损伤! 被认为由于再灌时产生更多 自由基所致#肾组织含黄嘌呤氧化酶!缺血时黄嘌呤 氧化酶底物’’’次黄嘌呤的水平比正常升高 $-5 2-- 倍# 氧自由基攻击膜上的多不饱和脂肪酸引起 细胞的损害 6$(1# 脂质过氧化导致细胞!线粒体和溶酶 体膜通透性增加# 肾小管细胞膜通透性增大可导致 转运功能丧失! 线粒体膜通透性增加经损害氧化磷 酸化!而溶酶体通透性增加可导致水解酶泄漏!加速 细胞分解# 运动时由于氧化应激各组织中脂质过氧化水平 升高!尤其是长时间力竭运动6$%7$&3#国内一些学者8,3研究 发现!力竭运动后红细胞膜上!心肌线粒体膜以及胃& 肠&胰组织游离巯基含量下降!自由基使一些含巯基 的酶失活! 其原理是自由基攻击酶分子活性部位的’ "9!使谷胱甘肽失活# 生物膜上广泛存在钠钾泵腺苷 三磷酸酶$一种含’"9 的酶%!自由基及其代谢可直接 攻击它而使该酶活性下降# 此外!如 :;<9 细胞色素 还原酶 +!=’%’>酶等也通过这种方式被修饰!使其失 去活性# 另外!氧自由基还可使蛋白质聚合和断裂!导 致细胞和亚细胞器损伤# 本实验结果表明!长时间力竭运动后!与空白对 照组比较!运动后即刻组&运动后 $!*, ? 组肾组织 匀浆丙二醛含量升高$- @ -A-$ 或 -A-(%(游离巯基 显著下降$- @ -A-(%(钠钾泵腺苷三磷酸酶活性下降 $- @ -A-$%! 提示力竭运动时! 自由基生成增多!影 响膜的功能! 可能由于自由基与膜上的酶或受体蛋 白共价结合!改变膜成分的活性(巯基氧化!不饱和 脂肪酸与蛋白质比例失常!造成膜运输过程紊乱(不 饱和脂肪酸脂质过氧化直接影响膜的结构和功能! 使膜流动性下降!膜脆性增加!酶活性下降和组织结 构损伤 8$B’*-3# 由此可见! 力竭运动或过度训练对肾功能损害严 重!运动时肾脏脂质过氧化增强!对生物膜产生毒害作 用!导致巯基氧化&交联!激活磷脂酶(直接或间接损害 膜的通透性(破坏细胞骨架!改变细胞膜极化状态!干 扰氧化磷酸化偶联!进而引起肾脏功能异常!可能是造 成运动性疲劳和运动性蛋白尿发生的原因之一# ! 参考文献 王东辉! 熊若虹! 郑兵7 等A 大鼠力竭运动后不同时相心肌和血清 "C<7 ="9D>E7 F<;和 +G*H的变化6I1A 沈阳体育学院学报7*--,7*2$2%)22* 商品A 肾脏脂质过氧化反应与运动性蛋白尿关系的实验研究6I1A体育科学7 $))27$2$$%)(2’& 胡红梅A运动性内源自由基对大鼠心肌线粒体功能的影响6I1A中国运动医学 杂志7$))B7$&$$%)*2’( 丁树哲A运动性内源自由基对大鼠心肌线粒体膜的影响6I1A生物化学与生物 物理学报7$))$7*2$,%)2-(’$- FJ+KLMGJN I=4 COPGQRSOTKU #IA V?S WOS KX T?S +G*YHZDOSUO[T[\S [UTLGM[TKD J?KURL[GQ RS?]RLK^SUGOSO GUR SUTLG__SR XWLGD* TK OTWR] "L* H GUR ‘G* H TLGUO_KLT GJLKOO T?S [UUSL MSMPLGUS KX MGMMGQ[GU M[TKJ?KURL[GA ./0 1 23+*45, $))-a$)*Y$Zb*2)’,, ]NS "7 fW[UTGU[Q?G ;A +?GU^SO [U T?S ^QWTGT?[KUS OTGTWO KX _QGOMG7 Q[\SL GUR MWOJQS XKQQKd[U^ SE?GWOT[\S SESLJ[OS [U LGTOA =.>? @677 $)B(a$B( Y*Zb*%*’% gLSThOJ?MGL i7 iWQQSL <7 9WPOJ?SL I7 67 8%A jUXQWSUJS KX G^[U^7 TLG[U[U^ GUR GJWTS _?]O[JGQ SESLJ[OS KU _QGOMG ^QWTGT?[KUS GUR Q[_[R _SLKE[RSO [U MGUA AB7 1 ?:+07< C6D $))$ a$*Y*Zb*$B’** 9GLL[O kI7 ‘KKT? /7 +KK_SL F‘A V?S SXXSJT KX OW_SLKE[RS ^SUSLGT[KU KU T?S GP[Q[T] KX M[TKJ?KURL[G TK TGNS W_ GUR LSTG[U +G*HA =.>? @677 $)B*a$,%Y*Zb *%&’&* eWNGJO =e7 gG_WO ;A FSGOWLSMSUT KX T?S MGTL[E XLSS +G*H JKUJSUTLGT[KU [U ?SGLT M[TKJ?KURL[G P] SUTLG__SR XWLGD* GUR lW[U*A >3+*46, 1 $)B&a*,BY*Zb %-)’$2 3+*46, >3+:4;< E6< F+,,/B $)B*a$-&Y,Zb$$)B’ *-( ‘LGRXKLR iiA ; LG_[R GUR OSUO[T[\S MST?KR XKL T?S lWGUT[TGT[KU KX M[JLK^LGM lWGUT[T[SO KX _LKTS[U WT[Q[h[U^ T?S _L[UJ[_QS KX _LKTS[UDR]S P[UR[U^A 9BG% 23+*46, $)&%a&*b*,B’(, =WUTSL Vk7 >XS[XXSL T $Zb+&((’B% ISUN[UO //A mLSS LGR[JGQ J?SM[OTL]A /SQGT[KUO?[_ TK SESLJ[OSA J:+07< C6D $)BB a(Y2Zb$(%’&- 丁树哲A运动性内源自由基对大鼠心肌线粒体膜的影响6I1A生物化学与生物 物理学报7$))$7*2$,%)2-(’$- gLSThOJ?MGL i7 iWQQSL <7 9WPOJ?SL I7 67 G%A jUXQWSUJS KX G^[U^7 TLG[U[U^ GUR GJWTS _?]O[JGQ SESLJ[OS KU _QGOMG ^QWTGT?[KUS GUR Q[_[R _SLKE[RSO [U MGUA AB7 1 J:+07< C6D $))$a$*Y*Zb*$B’** iJ[SLJS =:7 gWTL]N iI7
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