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酵母菌观察

2017-10-17 5页 doc 29KB 71阅读

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酵母菌观察酵母菌观察 酵母菌子囊孢子观察及死活细胞鉴别 摘要:以酿酒酵母(S.cerevisiae)为菌种, 采用美蓝浸片法和孔雀绿-番红复染法对酿酒酵母进行染色,然后制片,进行显微观察。结果显示,酵母菌进行无性生殖(出芽生殖)和有性生殖(产生子囊孢子);死细胞呈蓝色或淡蓝色,活细胞呈无色;菌体及子囊呈红色,子囊孢子呈绿色。 关键词:酿酒酵母; 美蓝浸片; 孔雀绿-番红复染; 显微观察 前言:酵母菌是不运动的单核真核微脂。 生物,有有性生殖和无性生殖两种生1.1.4仪器 殖方式。有性生殖是通过结合产生的 显微镜,载玻片,盖玻...
酵母菌观察
酵母菌观察 酵母菌子囊孢子观察及死活细胞鉴别 摘要:以酿酒酵母(S.cerevisiae)为菌种, 采用美蓝浸片法和孔雀绿-番红复染法对酿酒酵母进行染色,然后制片,进行显微观察。结果显示,酵母菌进行无性生殖(出芽生殖)和有性生殖(产生子囊孢子);死细胞呈蓝色或淡蓝色,活细胞呈无色;菌体及子囊呈红色,子囊孢子呈绿色。 关键词:酿酒酵母; 美蓝浸片; 孔雀绿-番红复染; 显微观察 前言:酵母菌是不运动的单核真核微脂。 生物,有有性生殖和无性生殖两种生1.1.4仪器 殖方式。有性生殖是通过结合产生的 显微镜,载玻片,盖玻片,双子囊孢子,无性生殖主要以出芽生殖层瓶,酒精灯。 的方式。可以通过美蓝浸片法观察酵1.2方法 母菌形态和出芽生殖方式。美蓝无毒1.2.1 液体培养基制备 性,酵母活细胞能使美蓝由蓝色的氧1.2.1.1 取蛋白胨4g,酵母膏2g,化型变为无色的还原型。因此,染色葡萄糖4g放入约200ml水中,加热融时具有还原能力的酵母活细胞是无色化,待混合均匀后(呈深棕色)将水的,而死细胞或衰老细胞为蓝色或淡补充至200ml,然后将其分装到两个锥蓝色。子囊孢子是子囊类真菌的有性形瓶中,每个三角瓶中100ml。 生殖产生的有性孢子,能否形成子囊1.2.1.2 113?灭菌30min,取出,冷孢子及其形态是酵母菌分类鉴别的重却,备用。 要依据之一。酵母菌要形成子囊孢子1.2.2麦氏培养基制备 需要一定条件,麦氏培养基(葡萄糖-1.2.2(1 取葡萄糖0.1g,氯化钾0.18 醋酸钠培养基)有利于酿酒酵母子囊g,酵母浸膏0.25 g,醋酸钠0.82 g,孢子的形成。通过孔雀绿-番红复染法2 g,琼脂2 g,蒸馏水100 ml。 对酵母染色,使菌体和子囊孢子呈不1.2.2(2 按常规方法制备培养基后,同颜色,制片及显微观察,可以看到装入10支试管,每支5mL左右。 子囊孢子的形态和位置。 1.2.2(3 将装好的试管与上步中液 体培养基一起113?灭菌30min。取出,1材料与方法 静置,摆斜面。 1.1材料 1.2.3接种和培养 1.1.1菌种 1.2.3.1 液体培养基 将接种环用 酿酒酵母(S.cerevisiae)。 酒精灯灭菌,在酿酒酵母斜面培养基1.1.2培养基 试管内冷却后,轻轻刮取适量酿酒酵 麦芽汁液体培养基;麦氏母孢子。将带有菌种的接种环伸入液 (Meclary)琼脂斜面。 体培养基内,轻轻搅拌。将接种后的1.1.3溶液或试剂 三角瓶至于恒温25-28?箱中培养。 0.1% 吕氏碱性美蓝染液,5%孔1.2.3.2 麦氏琼脂斜面 按常规方雀绿染液,0.5%番红水溶液,95%乙醇,法接种,培养(即产孢培养)。 葡萄糖,氯化钾,酵母浸膏,醋酸钠,1.2.4美兰浸片观察 KHPO,蒸馏水,蛋白胨,酵母膏,琼1.2.4(1 滴加一滴0.1% 吕氏碱性美24 蓝染液于载玻片中央,无菌操作用接转接到麦氏琼脂斜面上,25-28?培养种环从液体培养基上去一环菌液置于约一周。 染液中,混合均匀。 1.2.5(3 制片 取经过产孢培养的1.2.4(2 用镊子取一块盖玻片,先酵母斜面培养物,在洁净载玻片上按 常规方法涂片、干燥、固定。 将一边与菌液接触,然后慢慢将盖玻 1.2.5(4 染色 滴加孔雀绿染液染片放下使其盖在菌液上。 3 色1min。 1.2.4( 将制片放置约三分钟后镜检,先用低1.2.5(5 脱色 有无菌水冲洗,直倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和至流出水为无色。 出芽情况,并根据颜色区别死活细胞。 1.2.5(6 复染 用番红染液复染1.2.5 子囊孢子观察 30s,水洗,用吸水纸吸干。 1.2.5(1 菌种活化 将酿酒酵母接1.2.5(7 镜检 干后用油镜观察。种至新鲜的麦氏琼脂斜面上,25-28? 培养24h左右,然后再转接2-3次。 1.2.5(2 产孢培养 将活化的菌种 2结果与 2.1结果 图1 死活细菌显微观察(×400) 图2 子囊孢子显微观察(×1000) 显微观察酿酒酵母形态及其子囊孢子结果如下: 表1 酿酒酵母生殖方式 无性生殖 出芽生殖 有性生殖 产生子囊孢子 表2 死或细胞鉴别 死活细胞 颜色 死细胞 蓝色 活细胞 无色 观察子囊孢子:子囊孢子位于酵母菌内,经过孔雀绿-番红复染,子囊 孢子呈绿色,菌体、子囊均呈红色。 2.2分析 通过美蓝染液染色,显微观察,通过实验结果可以看出,能否产可以观察到死细胞呈蓝色,活细胞呈生子囊孢子,是否进行出芽生殖以及无色,我们可以由此鉴别死活细胞。 酵母菌形态特征是鉴别不同酵母菌的 通过比较图1、2,得知酿酒酵母重要手段。 有两种生殖方式:有性生殖(产生子 3小结 囊孢子)和无性生殖(出芽生殖)。 实验中应注意以下注意事项。美观察图2,酿酒酵母经过孔雀绿-番红蓝浸片染色时染液不宜过多或过少,复染后子囊孢子呈绿色,包裹在子囊否则盖上盖玻片时菌液会溢出或出现内,菌体和子囊呈红色,每个菌体子大量气泡而影响观察;盖玻片不能平囊孢子数为3-4个。由于子囊孢子在着放下,以免产生气泡;接种环将菌子囊中以三维结构排列,故在二维视体与染液混合时不要剧烈涂抹,以免野下多观察到两个孢子的联合体以及破坏细菌。菌种菌龄也很重要,子囊 孢子是否形成,影响实验观察。部分三孢子的联合体,少见同时能够 看到四个孢子的联合体。 4参考文献 [1]沈萍~陈向东. 微生物学实验 [M]. 4版.北京,高等教育出版社~2007 [2]沈萍~范秀容~李广武~微生物学实验 [M]. 3版.北京,高等教育出版社~ 1999
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