膀胱移行细胞癌中P-gp170平均光密度值的
达
膀胱移行细胞癌中P-gp170平均光密度值的
表达
四川医学2010年4月第3l卷(第4期)S~huanMedwalJournal,2010,Vo1.31,No.4?509? 膀胱移行细胞癌中P—gpl70平均光密度值的表达
胡克强
(故城县人民医院,河北故城253800)
论着
【摘要】目的探讨P?gpl70在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义.
运用免疫组织化学S-P法检测9例正
常膀胱粘膜组织和4o例膀胱移行细胞癌组织中P-gpl70的表达水平,利用图像分析技术测量阳性细胞的平均光密度
值.结果膀胱移行细胞癌P—gpl70的平均光密度值高于正常膀胱粘膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后复发
的移行细胞癌P-gpl70的平均光密度值明显高于初发膀胱移行细胞(P<0.05).膀胱移行细胞癌组织中P—gpl70的平均
光密度值与病理分级有关(P<0.05),与TNM分期无关(P>0.05).结论P—gpl70在膀胱移行细胞癌组织,特别在复发
性移行细胞癌组织中高表达,可能与移行细胞癌化疗耐药性,发生及发展有关联,具有一定的临床意义.
【关键词】膀胱移行细胞癌;P—gpl70;平均光密度
【中图分类号】R730.23【文献标识码】A【文章编号】1004-0501(2010)04-0509-02 TheexpressionofmeanopticaldensityofP-gpl70inbladdertransitionalcellcarcinoma.HU
Ke—qiang.ThePeople5
HospitalofGucheng,Gucheng,Hebei253800,China 【Abstract】0bjectiyeToexploretheexpressionandsignificanceofP—gpl70inbladdertransitionalcellcarcinoma.
MethodsTheexpressionlevelsofP—
gpl70innormalbladdermucosa(n=9)andbladdertransitionalcellcarcinoma(n=40) weredetectedbytheimmunohistochemistryS-Pmothod,andmeanopticaldensityofpositivecellsweremeasuredbyimageanaly—
sistechnology.ResultsThemeanopticaldensityofP-gpl70washigherinbladdertransitionalcellcarcinomathanthatinnor—
malbladdermucosa,thereWasstatisticalsignficanceinP?gpl70expressionbetweengroups(P<0.05).Recurrentbladdertran—
sitionalcellcarcinomatreatedbychemotherapywasmorelikelyexpressionthanprimarybladdertumor(P<0.05).Themeanop—
ticaldensityofP—
gpl70Waspositivelycorrelatedwithpathologicalgradeinbladdertransitionalcellcarcinoma(P<0.05),and
hasnocorrelationwithTNMstage(P>O.05).ConclusionP—
gpl70ishighlyexpressedinbladdertransitionalcellcarcinoma
tissue,especiallyinrecurrentbladdertransitionalcellcarcinoma.P—
gpl70isprobablyrelatedwithdrugresistance,occurrence
anddevelopmentofbladdercarcinoma.TheexpressionofP?gpl70hasclinicalsignificanceinbladdertransitionalcellcarcinoma.
【Keywords】bladdertransitionalcellcarcinoma;P-gpl70;meanopticaldensity 多药耐药性(MDR)是肿瘤化疗失败的重要原因,
肿瘤细胞多药耐药基因(MDR一1)的扩增及其编码产
物P—gpl70的高表达是介导肿瘤MDR的主要机制?.
大量研究表明,P—gpl70是一种能量依赖的药物外排
泵,即将药物由细胞内泵到细胞外,使细胞内药物浓度
减少,于是作用到药物靶位一细胞核上的药物浓度相应
减少,使胞内药物减少而无法构成对肿瘤细胞的有效
的抑制及杀伤J.本研究应用免疫组织化学S-P法对
膀胱移行细胞癌组织进行检测,利用图像分析技术测
量阳性细胞的平均光密度值,了解P.gpl70在膀胱移 行细胞癌中的表达情况,探讨P—gpl70在膀胱移行细 胞癌中发生,发展中的作用.
1资料与方法
1.1一般资料:标本来源于我院2006年1月一2008 年12月期间收治患者的手术切除的膀胱组织标本. 分组如下:?正常膀胱粘膜组(9例),其中男6例,女 3例;年龄32,79岁,平均45.6岁,经病理证实无肿 瘤的浸润.?膀胱移行细胞癌组(40例),其中原发性 膀胱移行细胞癌26例,男l7例,女9例;年龄35,75 岁,平均43.8岁;化疗后复发性移行细胞癌14例,男 9例,女5例;年龄34—72岁,平均41.3岁.按照 WHO膀胱肿瘤组织学分类标准(1999)分级:G10 例,G217例,G313例;TNM分期:T,Tl期25例,T2, T期15例;所有标本取材后经甲醛缓冲液固定,常规 脱水,石蜡包埋,切取5m厚石蜡切片,放置58~C烤箱 里溶腊.
1.2试剂及方法:兔抗人P—gpl70单克隆抗体,通用 型S—P免疫组织化学试剂盒和DAB显色试剂盒,以上 试剂均购于福建迈新生物科技开发公司.P—gpl70表 达情况检测用免疫组织化学S-P法.主要步骤:组织 切片常规脱蜡至水,P.gpl70采用微波修复抗原.3% ?
5l0?四川医学2010年4月第3l卷(第4期)SichuanMedicalJournal,2010,
Vo1.31,No.4
过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性, 正常羊血清封闭10min以减少非特异性着色.一抗 37c【=孵4?育过夜.生物素标记的二抗处理15min,链 霉抗生物蛋白一过氧化物酶复合物处理15min.DAB显
色,苏木精复染,脱水,透明,封片.用PBS代替一抗 作阴性对照,人膀胱移行细胞癌标本作为P-gpl70阳 性对照.显微镜下观察细胞染色情况,胞浆和胞膜染 成黄色,含有粗细不一的棕黄色颗粒即为阳性细胞. 采用image—proplus图像分析软件对P.gpl70的表达 进行定量测量.每张切片随机选取5个高倍镜视野 (x400),测量每个视野下阳性细胞的平均光密度值. 1.3统计学方法:采用SPSS13.0统计软件进行统计 学分析处理,所有测定数据均采用(露?s)表示,对测量 结果采用四格表检验和RxC表单向有序)c2检验, P<0.05为差异有统计学意义.
2结果
2.1P—gpl70的表达情况:镜下观察P—gpl70的表达 情况,细胞浆或细胞膜内出现棕黄色颗粒为判断为阳 性细胞.由表1可知,膀胱移行细胞癌P.gpl70的平 均光密度值(0.299?0.158)高于正常膀胱粘膜组织 (O.185+0.095),差异有统计学意义(P<0.05). 2.2原发性和复发性移行细胞癌组织中P.gpl70的表达 情况:化疗后复发的膀胱移行细胞癌P-gpl70的平均光密 度值(0.368~0.177)高于原发(0.261?0.136)的膀胱移行 细胞癌组织,差异有统计学意义(P<0.o5). 2.3不同病理分级癌组织中P—gpl70的表达情况:由 表1可知,各病理分级间移行细胞癌组织P—gpl70的 平均光密度值差异有统计学意义(P<0.05),G期P. gpl70的平均光密度值最高.
表1不同病理分级膀胱移行细胞癌组织
P-gpl70的平均光密度值(?s)
注:F=3.932.P=0.028
2.4TNM分期癌组织中P—gplT0的表达情况:TNM
分期中T:,T4期移行细胞癌组织P-gpl70的平均光密 度值(0.358?0.175)和T,T1期移行细胞癌组织 (0.263?0.139)的差异无统计学意义(P>0.05). 3讨论
肿瘤的发生发展是一个复杂的多阶段过程,与多 种基因的表达和多种蛋白分子存在水平的变化有关. 肿瘤的多药耐药的特性也是一个多种基因,多种机制 参与,特别和细胞凋亡的相关基因或蛋白相互关联的 复杂现象.P—gpl70和多药耐药相关蛋白(multidrug resistanceassociatedprotein,MRP)均属于ATP结合盒 式超家族,有药物外排泵的作用,它们的过表达与多种 肿瘤的多药耐药密切相关.P—gpl70作为MDR基 因的表达产物,除了排出泵功能外还可能存在抗凋亡 作用,有些学者认为P—gp抗凋亡在于对半胱肽酶依赖 的凋亡的途径具有保护作用,而使凋亡刺激物难以诱 发凋亡引.
本研究显示膀胱移行细胞癌P—gpl70的平均光密 度值高于正常膀胱粘膜组织,差异有统计学意义(P< 0.05).化疗后复发的膀胱移行细胞癌P—gpl70的平 均光密度值高于原发的膀胱移行细胞癌组织,差异有 统计学意义(P<0.05).各病理分级间移行细胞癌组 织P—gpl70的平均光密度值差异有统计学意义(P< 0.05),G,期P—gpl70的平均光密度值最高.TNM分 期中T2一T,期移行细胞癌组织P—gpl70的平均光密度 值和T一T期移行细胞癌组织的差异无统计学意义 (P>0.05).以上结果和袁建林等的研究相一致. 综上结果表明,P.gpl70基因在膀胱移行细胞癌组织 中表达上调,特别在化疗后复发性移行细胞癌组织中 高表达,提示P—gpl70基因对移行细胞癌的发生与化
疗耐药性起重要作用;并且与移行细胞癌的病理学分
级有关系,在膀胱移行细胞癌的发展与侵袭过程中起
到一定的作用,具有一定的临床意义.
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(收稿日期:2009-09-21)