抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究
?匿圈(Medicalj.un1al0f?lechiJ】esePe0pl,sAnl】edPollceF0r唧)V01.19N0.Ol2O(}8一O1出版
[14]PennyL,UrsulaH.Vasc~arendothelialgrowthfaetoypro.[15]TakadaK,
Yamadas,蛆IIlotoA.correlati0nbetweentun埘
duetionandregulationinrodentandhumanpituitarytumorvascularityandcli
nicalfindingsinpatientswithpituitary
cellinvitro.Neuroendocrinology,2001,74(6):95adenomas.EndocrPathol,
2004,15(2):131
(2007—10—14收稿,责任编辑张柏林)
抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究
董梅朱蕾匡铁吉雷红杨彩娥佟爱华(解放军总医院第二附属医院检
验科,北京100091)
【摘要】目的调查不同人群血清抗10种分枝杆菌纯蛋自衍生物(PPD)抗体的特征.方法采用ABC—ELLSA法检
测结核患者,健康体检者与0T阴性,强阳性新兵血清抗10种PPD抗
体水平.结果结核患者血清抗BCG和抗胞内分枝杆菌
PPD抗体水平显着高于抗人型结核菌PPD抗体水平(P<0.o1);OT强阳性新兵血清抗非结核分枝杆菌PPD抗体水平显着高
于0r阴性新兵和健康查体者(P<0.01).结论个体环境分枝杆菌接
触史对结核患者体液免疫应答有重要影响.胞内
PPD和BCG—PPD可用于结核病血清学诊断.
【关键词】分枝杆菌PPD新兵【中国图
分类号】R378.91
StudyontheantibodycharacteristictothePPDofmycobacteria
DONGMei,ZHULei,KUANGTieji,LEIHong,YANGCaie,andTONGAihua.LaboratoryofSecondAffiliatedHospitalofPIAGeneral
Hospital,Beijing100091,China?
【Abstracts】
ObjectiveToinvestigatethecharacteristicsofF~ruinantibodytopuhfiedproteinderivative(PPD—lgG)of11strainsof
mycobacteria.MethodTheantibodylevelsto10kindsofPPDintheSel’umfrom邯tswithtubemulosis,healthyadults,0r—negativeand
Crr—strongpositiverecruitsweremeasuredbyABC—ELISA.ResultsThea
ntibodyleveltothePPDfromBCGandMycobacterium.
intracellulareintheSelMinofthepatientswithtuberculosiswassignificantlyhigherthanthattothePPDfromMyeobaeteriumtuberculosisfP
<0.01).Thetiterofserumantibo6tothePPDfromnon—tuberculosismyco
bacteriainOT—strongpositiverecruitswassignflieandyhigher,
thanthatinOT—negativerecruitsorhealthyadults(P<0.01).COl~On$Theexposurehistoryofhosttothenon—tuberculosismy.
cobacteriawillproduceanimportantinfluenceonthehumoralimmuneresponseinpatientswithtuberculosis.
【Keywords】MycobacteriaAntibodyPartfiedproteinderivativeRecruits
结核病迄今仍是全球感染人数最多,年死亡人数
最多的传染病.面对多耐药结核病例的增加和传播,
以及结核病发病率的回升,有关专家认为研发新的结
核疫苗可能是人类战胜结核病的唯一选择L1』.结核
新疫苗的研发关键是获得结核菌保护性抗原2.结
核分枝杆菌是结核病的主要致病菌,但结核病免疫反
应却与各类常见非结核分枝杆菌(NTB)密切相关l3J3.
本研究调查了结核病患者,健康查体者,OT阴性与强
阳性新兵抗10种分枝杆菌PPD抗原的抗体效价与特
征,为结核保护性抗原筛选确定菌种与菌株来源.
1材料和方法
1.1试验菌种人型结核菌有毒株H37Rv,人型结
核菌无毒株H37Ra,牛型结核菌,BCG疫苗株以及胞
作者简介:董梅,女,1963年出生.本科学历,主任医师,科主任.
主要从事临床检验及分枝杆菌致病机制研究.
内,堪萨斯,淋巴,鸟,草,耻垢分枝杆菌标准株均购
于北京结核病研究所.
1.2培养基制备匡氏琼脂培养基与匡氏全合成
培养基的制备详见有关报道L4』.
1.3PPD抗原制备上述标准菌株分别在匡氏琼
脂斜面上划线接种,36?培养.慢生长分枝杆菌2周
生长物,速生长分枝杆菌2d生长物分别接种匡氏全
合成液体培养基,37?培养2周后收获.取滤纸加热
灭菌后,加入三氯乙酸调pH2.0,再加硫酸铵至饱和
浓度,4?放置12h,收集沉淀,溶于PBS,透析后即为
PPD提取物.测定其280Bin消光系数,确定蛋白浓
度,于一40?冻存,详见相关报道L5J.
1.4受检血清标本健康体检者血清150份;OT阴
性新兵血清120份;OT强阳性血清96份;结核病住院
患者血清126份.血清分离与标本采留按常规.
1.5抗体检测采用ABC—ELISA检测血清结核
抗体.(1)PPD抗原以4/ml包被微板,每孔0.2
l誉署雷盈
(Medialj.urIaloft}lChi.sePeopj,.AedPollF0rcesJv0J.19N0.ol2008一ol出
版49
ml,4~C过夜后,空干,洗涤5次;(2)血清标本按1:
100稀释,每孔加0.2ml,37~C反应1h,空干,洗3
次;(3)生物学标记sPA(H—SPA)稀释成4/ml,
每孔0.2ml,37?作用20min,空干,洗3次;(4)加
ABC试剂(现配),每孔0.2ml,37~C作用20min,同
上洗涤;(5)~Ju2mol/LHzS0450终止反应,450nm
测定OD值.
1.6统计学处理采用SAS6.12统计软件处理数
据.计量资料采用方差分析,计数资料采用.)(检
验.
2结果
2,1结核病患者抗PPD抗体特征结核病患者血
清抗BCGPPD和抗胞内PPD抗体效价最高,且显着
高于另外8种分枝杆菌PPD抗体水平(P<0.05);
结核病患者血清抗结核菌PPD抗体效价最低,与血
清抗BCGPPD和抗胞内PPD抗体效价相比,差异非
常显着(尸<0.0l,表1).
2.2新兵抗PPD抗体特征OT强阳性新兵组血
清抗人型和牛型结核菌PPD抗体水平高于OT阴性
新兵组,但差异无统计学意义(P>0.05).OT强阳
性新兵血清抗BCGPPD抗体水平则显着高于OT阴
性组(P<0.01).表1资料还表明:OT强阳性新兵
组血清抗非结核分枝杆菌PPD抗体水平显着高于抗
结核菌群PPD抗体水平(P<0.01),而且也显着高
于健康体检者相应抗体水平(P<0.01).此外,统
计资料表明:菌阳结核患者血清抗PPD抗体效价总体
上高于菌阴结核患者.并发现:菌阳结核病患者血清
抗人型有毒株PPD,抗堪萨斯PPD和抗淋巴PPD抗
体,均极显着高于菌阴结核患者(P<0.01).
2,3PPD抗体阳性检出率比较l0种PPD用于结
核病患者血清学诊断的阳性率为28.6%75.4%,
其中胞内PPD和BCGPPD抗体阳性检出率最高,而
人型结核分枝杆菌强毒株H37RvPPD和无毒株
H37RaPPD抗体阳性检出率最低(表2).作为结核
病血清学诊断试剂,结核病患者血清抗胞内PPD抗
体和抗BCGPPD抗体阳性检出率均高于70%,并显
着高于其他PPD抗体阳性检出率(P<0.05).胞
内PPD和BCGPPD抗体联合检测,结核病阳性率达
86%
表1各组人群1O种PPD抗体检测血清结核抗体结果比较(x)
5o_蘧圜(MedicalJoumal
《thechesePe0ple,sPolicees)v01.19N0.012008—01出版
3讨论
近年来,结核菌外分泌蛋白一直是学者们研究
的热点,其重要原因在于外分泌蛋白容易制备和纯
化,便于分析鉴定.但结核菌分泌蛋白抗原种类繁
多,最新报道,常规液体培养可获得的结核菌分泌蛋
白有100余种6_6.人们早已推测:由于个体免疫特
性不同,加上个体早先的环境分枝杆菌接触史相异,
同样感染结核菌的患者,其对结核抗原应答的种类
和性质各不相同.这种个体免疫质量和水平的差
异,同样也显示在对不同分枝杆菌抗原应答水平上.
本研究发现,结核病患者血清抗BCG疫苗菌
PPD抗体和抗胞内分枝杆菌PPD抗体的效价最高.
由于BCG疫苗接种,几十年来已在全国大量人群中
广泛使用.卡介苗接种者中有2/3的个体会产生体
液免疫应答,结核患者血清抗BCG疫苗菌PPD抗体
效价高,应是可预料的.结核患者血清中抗胞内分
枝杆菌PPD抗体水平最高,推测其原因可能在于:
(1)环境中的胞内分枝杆菌与BCG疫苗株具有某些
免疫原性很强的共同抗原或抗原表位;(2)胞内分支
杆菌在环境中分布最广泛,且易感染青少年.虽然
上述推测均有待证实,但OT强阳性新兵组胞内PPD
抗体阳性检出率高达9.4%的结果,提示第一种推
测的正确性.
本研究比较了OT试验阴性和强阳性新兵与健
康体检者血清PPD抗体谱,发现OT强阳性新兵组
血清抗非结核分枝杆菌PPD抗体效价高于OT阴性
新兵组,差异非常显着(P<0.01),而且也显着高
于健康人体检组(P<0.01).OT强阳性新兵组血
清抗非结核分枝杆菌PPD抗体水平远高于其抗结
核菌PPD抗体水平(P<0.01).上述结果提示,青
年人最早产生的结核免疫应答反应主要因接触非结
核分枝杆菌所致.
综上所述,本研究结果支持将胞内分枝杆菌作
为获得结核保护性抗原的起始株;本研究结果还证
明:BCG和胞内分枝杆菌PPD可用于结核病血清学
诊断.
参考文献
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