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抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究

2017-11-11 8页 doc 24KB 25阅读

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抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究 ?匿圈(Medicalj.un1al0f?lechiJ】esePe0pl,sAnl】edPollceF0r唧)V01.19N0.Ol2O(}8一O1出版 [14]PennyL,UrsulaH.Vasc~arendothelialgrowthfaetoypro.[15]TakadaK, Yamadas,蛆IIlotoA.correlati0nbetweentun埘 duetionandregulationinrodentandhumanpituitarytumorvascularity...
抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究
抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究 ?匿圈(Medicalj.un1al0f?lechiJ】esePe0pl,sAnl】edPollceF0r唧)V01.19N0.Ol2O(}8一O1出版 [14]PennyL,UrsulaH.Vasc~arendothelialgrowthfaetoypro.[15]TakadaK, Yamadas,蛆IIlotoA.correlati0nbetweentun埘 duetionandregulationinrodentandhumanpituitarytumorvascularityandcli nicalfindingsinpatientswithpituitary cellinvitro.Neuroendocrinology,2001,74(6):95adenomas.EndocrPathol, 2004,15(2):131 (2007—10—14收稿,责任编辑张柏林) 抗分枝杆菌纯蛋白衍生物抗体特征的研究 董梅朱蕾匡铁吉雷红杨彩娥佟爱华(解放军总医院第二附属医院检 验科,北京100091) 【摘要】目的调查不同人群血清抗10种分枝杆菌纯蛋自衍生物(PPD)抗体的特征.方法采用ABC—ELLSA法检 测结核患者,健康体检者与0T阴性,强阳性新兵血清抗10种PPD抗 体水平.结果结核患者血清抗BCG和抗胞内分枝杆菌 PPD抗体水平显着高于抗人型结核菌PPD抗体水平(P<0.o1);OT强阳性新兵血清抗非结核分枝杆菌PPD抗体水平显着高 于0r阴性新兵和健康查体者(P<0.01).结论个体环境分枝杆菌接 触史对结核患者体液免疫应答有重要影响.胞内 PPD和BCG—PPD可用于结核病血清学诊断. 【关键词】分枝杆菌PPD新兵【中国图分类号】R378.91 StudyontheantibodycharacteristictothePPDofmycobacteria DONGMei,ZHULei,KUANGTieji,LEIHong,YANGCaie,andTONGAihua.LaboratoryofSecondAffiliatedHospitalofPIAGeneral Hospital,Beijing100091,China? 【Abstracts】 ObjectiveToinvestigatethecharacteristicsofF~ruinantibodytopuhfiedproteinderivative(PPD—lgG)of11strainsof mycobacteria.MethodTheantibodylevelsto10kindsofPPDintheSel’umfrom邯tswithtubemulosis,healthyadults,0r—negativeand Crr—strongpositiverecruitsweremeasuredbyABC—ELISA.ResultsThea ntibodyleveltothePPDfromBCGandMycobacterium. intracellulareintheSelMinofthepatientswithtuberculosiswassignificantlyhigherthanthattothePPDfromMyeobaeteriumtuberculosisfP <0.01).Thetiterofserumantibo6tothePPDfromnon—tuberculosismyco bacteriainOT—strongpositiverecruitswassignflieandyhigher, thanthatinOT—negativerecruitsorhealthyadults(P<0.01).COl~On$Theexposurehistoryofhosttothenon—tuberculosismy. cobacteriawillproduceanimportantinfluenceonthehumoralimmuneresponseinpatientswithtuberculosis. 【Keywords】MycobacteriaAntibodyPartfiedproteinderivativeRecruits 结核病迄今仍是全球感染人数最多,年死亡人数 最多的传染病.面对多耐药结核病例的增加和传播, 以及结核病发病率的回升,有关专家认为研发新的结 核疫苗可能是人类战胜结核病的唯一选择L1』.结核 新疫苗的研发关键是获得结核菌保护性抗原2.结 核分枝杆菌是结核病的主要致病菌,但结核病免疫反 应却与各类常见非结核分枝杆菌(NTB)密切相关l3J3. 本研究调查了结核病患者,健康查体者,OT阴性与强 阳性新兵抗10种分枝杆菌PPD抗原的抗体效价与特 征,为结核保护性抗原筛选确定菌种与菌株来源. 1材料和方法 1.1试验菌种人型结核菌有毒株H37Rv,人型结 核菌无毒株H37Ra,牛型结核菌,BCG疫苗株以及胞 作者简介:董梅,女,1963年出生.本科学历,主任医师,科主任. 主要从事临床检验及分枝杆菌致病机制研究. 内,堪萨斯,淋巴,鸟,草,耻垢分枝杆菌标准株均购 于北京结核病研究所. 1.2培养基制备匡氏琼脂培养基与匡氏全合成 培养基的制备详见有关报道L4』. 1.3PPD抗原制备上述标准菌株分别在匡氏琼 脂斜面上划线接种,36?培养.慢生长分枝杆菌2周 生长物,速生长分枝杆菌2d生长物分别接种匡氏全 合成液体培养基,37?培养2周后收获.取滤纸加热 灭菌后,加入三氯乙酸调pH2.0,再加硫酸铵至饱和 浓度,4?放置12h,收集沉淀,溶于PBS,透析后即为 PPD提取物.测定其280Bin消光系数,确定蛋白浓 度,于一40?冻存,详见相关报道L5J. 1.4受检血清标本健康体检者血清150份;OT阴 性新兵血清120份;OT强阳性血清96份;结核病住院 患者血清126份.血清分离与标本采留按常规. 1.5抗体检测采用ABC—ELISA检测血清结核 抗体.(1)PPD抗原以4/ml包被微板,每孔0.2 l誉署雷盈 (Medialj.urIaloft}lChi.sePeopj,.AedPollF0rcesJv0J.19N0.ol2008一ol出 版49 ml,4~C过夜后,空干,洗涤5次;(2)血清标本按1: 100稀释,每孔加0.2ml,37~C反应1h,空干,洗3 次;(3)生物学标记sPA(H—SPA)稀释成4/ml, 每孔0.2ml,37?作用20min,空干,洗3次;(4)加 ABC试剂(现配),每孔0.2ml,37~C作用20min,同 上洗涤;(5)~Ju2mol/LHzS0450终止反应,450nm 测定OD值. 1.6统计学处理采用SAS6.12统计软件处理数 据.计量资料采用方差分析,计数资料采用.)(检 验. 2结果 2,1结核病患者抗PPD抗体特征结核病患者血 清抗BCGPPD和抗胞内PPD抗体效价最高,且显着 高于另外8种分枝杆菌PPD抗体水平(P<0.05); 结核病患者血清抗结核菌PPD抗体效价最低,与血 清抗BCGPPD和抗胞内PPD抗体效价相比,差异非 常显着(尸<0.0l,表1). 2.2新兵抗PPD抗体特征OT强阳性新兵组血 清抗人型和牛型结核菌PPD抗体水平高于OT阴性 新兵组,但差异无统计学意义(P>0.05).OT强阳 性新兵血清抗BCGPPD抗体水平则显着高于OT阴 性组(P<0.01).表1资料还表明:OT强阳性新兵 组血清抗非结核分枝杆菌PPD抗体水平显着高于抗 结核菌群PPD抗体水平(P<0.01),而且也显着高 于健康体检者相应抗体水平(P<0.01).此外,统 计资料表明:菌阳结核患者血清抗PPD抗体效价总体 上高于菌阴结核患者.并发现:菌阳结核病患者血清 抗人型有毒株PPD,抗堪萨斯PPD和抗淋巴PPD抗 体,均极显着高于菌阴结核患者(P<0.01). 2,3PPD抗体阳性检出率比较l0种PPD用于结 核病患者血清学诊断的阳性率为28.6%75.4%, 其中胞内PPD和BCGPPD抗体阳性检出率最高,而 人型结核分枝杆菌强毒株H37RvPPD和无毒株 H37RaPPD抗体阳性检出率最低(表2).作为结核 病血清学诊断试剂,结核病患者血清抗胞内PPD抗 体和抗BCGPPD抗体阳性检出率均高于70%,并显 着高于其他PPD抗体阳性检出率(P<0.05).胞 内PPD和BCGPPD抗体联合检测,结核病阳性率达 86% 表1各组人群1O种PPD抗体检测血清结核抗体结果比较(x) 5o_蘧圜(MedicalJoumal 《thechesePe0ple,sPolicees)v01.19N0.012008—01出版 3讨论 近年来,结核菌外分泌蛋白一直是学者们研究 的热点,其重要原因在于外分泌蛋白容易制备和纯 化,便于分析鉴定.但结核菌分泌蛋白抗原种类繁 多,最新报道,常规液体培养可获得的结核菌分泌蛋 白有100余种6_6.人们早已推测:由于个体免疫特 性不同,加上个体早先的环境分枝杆菌接触史相异, 同样感染结核菌的患者,其对结核抗原应答的种类 和性质各不相同.这种个体免疫质量和水平的差 异,同样也显示在对不同分枝杆菌抗原应答水平上. 本研究发现,结核病患者血清抗BCG疫苗菌 PPD抗体和抗胞内分枝杆菌PPD抗体的效价最高. 由于BCG疫苗接种,几十年来已在全国大量人群中 广泛使用.卡介苗接种者中有2/3的个体会产生体 液免疫应答,结核患者血清抗BCG疫苗菌PPD抗体 效价高,应是可预料的.结核患者血清中抗胞内分 枝杆菌PPD抗体水平最高,推测其原因可能在于: (1)环境中的胞内分枝杆菌与BCG疫苗株具有某些 免疫原性很强的共同抗原或抗原表位;(2)胞内分支 杆菌在环境中分布最广泛,且易感染青少年.虽然 上述推测均有待证实,但OT强阳性新兵组胞内PPD 抗体阳性检出率高达9.4%的结果,提示第一种推 测的正确性. 本研究比较了OT试验阴性和强阳性新兵与健 康体检者血清PPD抗体谱,发现OT强阳性新兵组 血清抗非结核分枝杆菌PPD抗体效价高于OT阴性 新兵组,差异非常显着(P<0.01),而且也显着高 于健康人体检组(P<0.01).OT强阳性新兵组血 清抗非结核分枝杆菌PPD抗体水平远高于其抗结 核菌PPD抗体水平(P<0.01).上述结果提示,青 年人最早产生的结核免疫应答反应主要因接触非结 核分枝杆菌所致. 综上所述,本研究结果支持将胞内分枝杆菌作 为获得结核保护性抗原的起始株;本研究结果还证 明:BCG和胞内分枝杆菌PPD可用于结核病血清学 诊断. 参考文献 [1]谢建平,乐军,王洪海.后基因时代的结核新疫苗研 究.生命科学,2002,14(1):30 [2]李素华.结核杆菌保护性抗原研究现状.国外医学预防 诊断治疗用生物制品分册,2005,28(2):54 [3]Gaxr~eJM.Advancesintuberculosisresearch21volLllne. Lonndon,1984.2 [4]匡铁吉,董梅,宋萍等.结核杆菌单药敏感试验和 多要敏感试验比较研究.解放军医学杂志,2002,27 (11):1009 [5]YoungD,KentL,ReesAeto1.ImmunologicalActivetyofa 38kilodaltonproteinpurifiedfromMycobacteriumtuberculo- sis.InflectImlnun,1986,54(1):177 [6]高源,万康林.结核分支杆菌蛋白抗原研究进展.中 国媒介生物学及控制杂志,2005,16(1):74 (2007—06—24收稿,责任编辑张柏林)
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