HPLC测定复方甘草片中吗啡含量

HPLC测定复方甘草片中吗啡含量 研究简报 HPL C 测定复方甘草片中吗啡含量 1勇 邹家庆蔡升王 ()南京化工大学应用化学系 ,南京 ,210009 摘 要 对使用 HPL C 测定复方甘草片中吗啡含量提出了一种改进 。从样品的预处理 ,进 样的方法 ,柱温的控制等几个方面入手 ,大大地提高了吗啡测试的稳定性与准确度 。对毒 、麻品 管理更有实际意义 。 关键词 复方甘草片 吗啡 高效液相色谱 中图号 O 65811 复方甘草片是一种复方制剂 ,是镇咳祛痰的良药 。该片中含有阿片粉 ,而阿片粉中含 1 2 有 2 %,9 %的吗啡 。目前吗啡测定法有很多种 ,如石灰法 ,中国药典法,层析柱净化后 3 4 5 6 分光光度法,三柱紫外法,薄层扫描法,高效液相色谱法等。与其他方法相比 ,高 效液相色谱法更具有高效 、快速 、高灵敏度 、选择性好等特点 ,但中国毒品 、麻醉品管理中心 3 () 和卫生部提供的 HPL C 测定吗啡法 以下称部颁在实际应用中存在不少问 。如重 现性差 ,实验结果波动性大等 。本文通过大量的实验 ,有针对性地解决了上述问题 ,并且简 化了最繁琐的样品预处理过程 。在第一步原需要 6 次萃取的 ,本文简化为 3 步 。样品 的洗涤过程由原来的 3 次简化为 2 次 ;为了避免气泡干扰使峰形变坏 ,本文经超声脱气并使 用定样环 5 倍样品体积进样 ;为了使样品的重现性好 ,本文使用了恒温箱 ,并且在样品真空 干燥时 ,严格把握时机 ;改用 5 mL 甲醇溶解提取的样品 ,由于甲醇体积增加了 115 倍 ,最大 限度地减少了甲醇挥发带来的误差 。经反复实验发现用峰高代替峰面积进行计算 ,减小了 样品测试的不稳定性 。这些改进之处对消除干扰 ,提高测定结果准确度 ,加快样品的检测 速度起很大作用 ,因此值得推广 。 1 实验部分 111 仪器 高效液相色谱仪 ;日立 L26200 型智能泵 ;日立 L24200 型紫外检测器 ;日立 D26000 型自 动积分仪 ;日立 655A 型色谱柱恒温箱 ;六通阀加装 01020 mL 定量环 ;011 mL 微量进样器 ; 上海超声仪器厂产超声震荡仪 ;上海器械厂 8022 型离心沉淀器 。 1 现在南京第二制药厂质检科工作 3 国家医药管理局编 ,中华人民共和国卫生部药品标准 ,1991 年版 。 收稿日期 :1996211215 112 试剂 吗啡对照品 :由卫生部药品生物制品检定所提供 。 复方甘草片 :由南京第二制药厂生产 。 甘草粉 :呼和浩特制药厂 ,批号 :930901 。 μ蒸馏水 :电热蒸馏器二次蒸馏水 ,经 0145 无机过滤膜抽滤 。 μ甲醇 :分析纯 ,使用前经 0145 有机膜抽滤 。 μ011 mol/ L 磷酸二氢钠 :使用分析纯磷酸二氢钠配制 ,用前须用 0145 无机膜抽滤 。 其余所用试剂均为分析纯 。 113 分析条件 μ 使用 416 mm ×210 mm 不锈钢柱 ,填入粒度为 5的十八烷基硅烷键合硅胶 ;流动相为 ( ) 011 mol/ L 磷酸二氢钠?甲醇 5?1混合液 ; 流速为 112 mL / min ; 柱温为 35 ?; 检测波长为 254 nm 。理论塔板数按吗啡峰计算应不低于 1000 。 114 实验方法 11411 对照品溶液的制备 取吗啡对照品适量 ,精密称量 ,加甲醇制成 01080 mg/ mL 的溶液 ,作为对照品溶液 。 11412 供试品溶液的制备 取复方甘草片 20 片 ,研细 ,精密称量相当于 1 片的重量 。置于 100 mL 分液漏斗中 ,加 入 10 mL 蒸馏水 ,215 mL 新配制的 10 % NaCO水溶液和 013 g N HCl 固体 。溶解后加入 2 3 4 () 氯仿?异丙醇 3?1的混合物作萃取剂 ,每次各 15 mL ,分 3 次萃取 ,每次充分振摇 15 min ,静 置 5 min 后 ,收集有机层 。合并有机层应不少于 40 mL ,于另一分液漏斗中 ,用含 1 滴氨水 的 10 mL 新鲜蒸馏水洗涤后 ,弃去水层 。有机层再用 15 mL 蒸馏水洗涤 10 min 。静置 1 h ( 后 ,从分液漏斗中放出有机层 ,使之通过适量的无水硫酸钠 吸收有机层中可能含有的水 ) 份,滤入一抽滤瓶中 。用萃取液各 10 mL 洗涤无水硫酸钠 ,洗液并入抽滤瓶中 。将抽滤瓶 塞紧 ,接上真空泵 。于 70 ?恒温水浴中 ,调节真空度约为 016 k Pa ,当抽滤瓶底层浅黄色结 晶形成且溶剂完全气化后 ,立即取出抽滤瓶 ,打开瓶盖 ,在室温下 ,放置 015 min ,使残余溶 剂气体挥发掉 。然后趁温热加入甲醇 5 mL ,密闭抽滤瓶 ,放在超声振荡仪上超声除气 0 . 5 μmin 。再用离心滤管 ,使溶液通过 0145 的有机滤膜 。滤液即为供试品溶液 。 11413 测定法 :量取对照品和供试品溶液 0110 mL ,分别注入高效液相色谱仪 。根据相应 的峰高用外标法计算含量 。 2 结果与讨论 211 甘草对吗啡测定的影响 精密称取甘草粉 20 mg ,研细后 ,在容量瓶中用甲醇制成 0108 mg/ mL 甘草甲醇溶液 。 取甘草甲醇溶液与吗啡标准液各 0110 mL ,分别注入色谱仪 ,得图 1 ,图 2 。 由图 1 和图 2 可见 ,甘草峰保留时间是吗啡的 115 倍 。甘草出峰在吗啡之后 ,因而甘草 对吗啡测定没有干扰 。 R T AR EA HEI GH T AR EA HEI GH T R T 9144 6176 3096 116 385356 5498 图 2图 1 甘草溶液的色谱图 标准吗啡溶液的图谱 Fig. 1 The chro matograp hy of t he Fig. 2 The chro matograp hy of t he standard glycyrr hiza2met hanol solutio n mo rp hine2met hanol solutio n 212 样品的预处理 取吗啡对 照 品 溶 液 10 mL , 滴 入 氯 仿 , 异 丙 醇 各 0125 mL ,充分振摇后 ,量取 011 mL 注入色谱仪 得图 3 。 ) ( 把图 3 与图 2 相比较可见 , 经 8 次实验验证R T AR EA HEI GH T 6172 394781 6489 混有萃取剂的吗啡谱图的峰高与峰面积均比标准 图 3 混有氯仿和异丙醇的吗啡标准溶液 吗啡图谱有所 增 加 。为 了 尽 可 能 地 减 小 异 丙 醇 和 Fig. 3 The standard mo rp hine2met hanol solutio n 氯仿产 生 的 干 扰 , 在 11412 中 萃 取 剂 一 定 要 被 蒸 wit h lit tle of chlo rofo r m and iso2p ropanol 干 。同时 ,为防止吗啡氧化 , 也不宜在样 品 干 燥 后 再长时间加温 。所以 ,当一看到抽滤瓶底层淡黄色结晶成形完全后 ,即可取出抽滤瓶 ,并打 开瓶盖放置 0 . 5 min ,使瓶内有机气体挥发掉 ,以防止其冷凝后又滴入到供试品中 。 213 回收率实验 分别精密称量同一批次的 20 片复方甘草片 6 份 ,分别用 11412 中的方法制得 6 份供试 品溶液 ,再用 11413 中的方法分别测出它们的吗啡精确含量 ,再于每份样品中分别加入相 当于标示量百分比 10 % 、15 % 、20 % 、25 % 、30 % 、40 %的吗啡对照品 ,均匀混合后 ,用 11412 、 11413 中的方法测出回收率结果 。每次测量重复 6 次 ,取平均结果 ,如表 1 所示 。 表 1 甘草片中吗啡含量测试的回收率 ( )Table 1 The recycle rate of mo rp hine assay in co mpo und liquo rice test n = 6 序号 甘草片中吗啡含量 添加吗啡的量 添加后的测定值 添加量的测定值 回收率 1 98 . 24 % 10 . 98 % 109 . 75 % 11 . 51 % 104 . 83 % 2 97 . 10 % 15 . 11 % 112 . 73 % 15 . 63 % 103 . 44 % 3 99 . 18 % 19 . 68 % 118 . 38 % 19 . 20 % 97 . 57 % 4 96 . 98 % 23 . 80 % 120 . 40 % 23 . 42 % 98 . 40 % 5 98 . 33 % 30 . 77 % 127 . 96 % 29 . 63 % 96 . 30 % 6 96 . 16 % 40 . 74 % 137 . 12 % 40 . 96 % 100 . 54 % 3 表中的百分数均为标示量百分数 由表 1 可见 ,回收率的数值从 96130 %到 104183 % ,其平均值为 100118 % ,并可以算出 其标准偏差 S = 3 . 39 % ,说明该方法较为可靠 。 214 进样方式和柱温对测试的影响 21411 进样方式 :本实验采用 01020 mL 定量环进样 ,具有量样精密 ,快速便捷等特点 。但 在使用微量进样器向定样环中加样时 ,易混入空气 。所以本文采用 5 倍于定样环的量进 7,这样能最大限度地减少气泡的混入 。样 21412 柱温的影响 :温度的稳定性直接影响到色谱峰的质量 。在气温较低时 ,由于使用空 调器 ,室内温度难于均匀 ,往往由于空气的对流而导致柱温变化 ,使样品的重现性不好 。并 且在 10 ?以下时 ,色谱柱的压力较高 。经多次实验测得 ,在使用此类型 C柱时 ,温度每降 18 5 低 1 ?,压力就升高 1 . 96 ×10Pa 。长期增压使用不仅使柱效降低 ,而且对高压泵也有很大 损伤 。因此 ,我们加装了一台色谱柱恒温器 ,把温度控制在 35 ?,比较完满地解决了上述问 题 。 215 准确度实验 表 2 不同方法测定不同批号复方甘草片的结果 Table 2 Different effect of mo rp hine test in different batches of co mpo und liquo rice tablet s deter mined by different met ho ds 批 号 本文方法 部颁标准 投料量 930911 98 . 71 % 101 . 77 % 99 . 84 % 930912 98 . 95 % 106 . 10 % 99 . 73 % 930913 100 . 01 % 107 . 56 % 99 . 83 % 930914 99 . 14 % 103 . 33 % 99 . 62 % 930915 99 . 15 % 101 . 47 % 99 . 49 % 930916 99 . 06 % 102 . 12 % 99 . 57 % 930917 99 . 47 % 102 . 12 % 99 . 88 % 930918 99 . 00 % 107 . 22 % 99 . 96 % 3 注 :本表中所示的含量均为标示量百分数 3 结论 本法所测甘草片中吗啡含量明显比用部颁标准法所测的值更为接近 。 本法所测定的结果比部颁标准方法所测的结果准确 ,重现性好 。这就解决了在生产实 践中 ,投料量与成品含量偏差甚大的现象 。既可节约原材料 ,又可大大地提高复方甘草片 的成品率 ,给企业直接带来效益 。因此本法可在各复方甘草片生产厂家加以推广 。 参 考 文 献 1 中华人民共和国卫生部药典委员会编 1 中国药典 ,二部 1 北京 :化学工业出版社 ,19771243 中华人民共和国卫生部药典委员会编 1 中国药典 ,二部 1 北京 :化学工业出版社 ,198512042 The U nited States Phar macopeial Co nvdentio n , 7nd 12601 Twinbroo k Par kway , Rockville , MD. 20852 . U . S. P. ××. 3 Published by t he Board of Trustees. 1980 . 565 ,5882589 4 The U nited States Phar macopeial Co nventio n , 7nd 12601 Twinbroo k Par kway , Rockville , MD 20852 . U . S. P. ××?. Published by t he Board of Trustees. 1990 . 976 ( ) 5 顾明振 ,李玲玲 ,刘开兰等 1 薄层色谱法测定阿片中吗啡含量 1 药物分析杂志 ,1993 ,13 4:236 ( ) 方典谨 ,方谨 ,孙曾培等 1 高效液相色谱法测定阿片及吗啡的含量 1 药物分析杂志 ,1986 ,6 2:73,766 袁倚盛编著 1 HPL C 系统的故障排除 1 南京 :南京大学出版社 ,199111757 STUDY OF THE MO RP HI NE ASSAY I N COMPO UND L IQUO RICE TABL ETS D ETERM I NED BY HPL C Zou J i aqi n g Cai S hen g W a n g Y on g Depart ment of Applied Chemist ry , Nanjing U nivercity of Chemical Technology , 把柱 恒温 度 Nanjing , China , 210009 Abstract So me of imp rovement has been described in t his article fo r deter mining t he assay of mo rp hine in co mpo und liquo rice tablet s by HPL C. By means of imp roving t he p rep rocessio n , t he met ho d of sampling , t he co nt rolling of t he column temperat ure and etc , we have greatly imp roved t he stabilit y and accuracy of t he mo rp hine test . And it is also impo rtant to t he admin2 ist ratio n of t he drugs and narcotics. ( Key words co mpo und liquo rice tablet s mo rp hine HPL C High Perfo r manced Liquid Chro2 )matograp hy 简 讯 博士生导师涂善东教授受表彰 1997 年 4 月 28 日 ,涂善东教授参加了江苏省留学回国人员服务工作会议 ,并受到表 彰 。涂善东教授被国家人事部 、国家教委评为全国优秀留学回国人员 ,他是化工部院校中 唯一获此殊荣的人 。 1990 年 10 月涂善东教授作为客座科学家来到瑞典皇家理工学院 ,他在破坏力学领域 研究成绩斐然 ,引起世界各国广泛关注 ,曾先后到德国 、法国 、英国 、奥地利等多个国家讲 学 。1993 年 9 月我校博士点用人迫在眉睫 ,他提前终止聘用合同毅然回到母校 ,怀着极大 的热情投入到化工事业中来 。回国后 ,他多次谢绝国外同行的邀请 ,在自己的教学 、科研 、 管理岗位上 ,艰苦创业 ,无私奉献 ,承担国家“八五”、“九五”攻关项目 ,成为我校新的学科带 头人 。 ()沈 旋