抗核小体抗体的检测与临床应用进展

抗核小体抗体的检测与临床应用进展 抗核小体抗体的检测与临床应用进展 卖用医技杂志2OO7年2月第14卷第4期(旬刊)JPMT,Febmary.2007.'Co1.14.No.4(I翳uedEveryTenD?521? 神偷伤害,提高我国出生人口素质. 参考文献:' 【1]喻唯民.积极开展新生儿筛童工作【J].中华检验医学杂志, 2001,24(6):325-32"7. ,胡小波,曹小英,等.苯丙酮尿症的新生儿筛查及方法 [2】蔡宗友 比较[J].中国优生与遗传杂志,2OO2,lO(4):95-96. 【3]顾学范.遗传性代谢痛的新生儿筛童【J].中国实用儿科杂志, 2OO4,l9(1O):586-589. (收藕日期:2006-10-07l 抗核小体抗体的检测与临床应用进展 韦俐 (镇江市第一人民医院,江苏镇江212002) 【摘要]核小体是染色体的功能亚单位,是DNA与组蛋白形成的复合体,存在于细胞核中.在系统性红斑狼疮 (SLE)发生中,核小体是主要的自身抗原,抗核小体抗体是SLE的早期的指标之一.许多文献认为抗核小体抗体是诊 断SLE很好的标志.它优于抗dsDNA,敏感度高,且有很高的特异度.抗核小体抗体主要应用ELISA法检测,由于核 小体抗原纯化制备方法的不同,抗核小体抗体的检测方法也由第一代发展到第二代.随着抗原纯化技术的提高,极大 提高了抗核小体抗体对SLE的特异性,已开始应用于临床常规检测. 【关键词】核小体;自身抗体;系统性红斑狼疮 [中图分类号]RM9【文献标识码]B【文章编号】1671-.~88(2007}04-0b'21-03 核小体是染色体的功能亚单位,是DNA与组蛋白形成的 复合体,存在于细胞核中.传统的观点认为,dsDNA,抗【l8D— NA抗体复合物在狼疮肾炎发病机制中起主要作用,但是游 离,裸露的DNA在血液循环中并不存在….有人从系统性红 斑狼疮(SLE)患者外周血中检测到核小体,证实DNA是以核 小体的形式存在于外周循环中【2J,确定了外周血中游离的核 小体是细胞凋亡所产生的寡聚核小体,并认为在SLE发生 中,核小体是主要的自身抗原,并且这种核小体的免疫原性很 强,驱动辅助T细胞进行自身免疫应答,诱导产生抗核小体抗 体(anti.nucleosomeantibodies,AnuA)o有实验明,AnuA仅 对天然的核小体以及核小体亚结构(H2A?H2B)DNA起作用, 而并不与其中的DNA或组蛋白起反应,且AnuA的形成又先 于抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体的产生,因而AnuA可能是 SLE的比较早期的指标.近年来,虽然国内对AnuA研究尚 少,但其对SLE的诊断价值在国际上已成为一个热门话题, 认为AnuA是诊断SLE很好的标志,它优于抗dsDNA,敏感度 高,且有很高的特异度,AnuA主要应用跚sA法检测.近 年由于抗原纯化技术的提高,极大提高了'AnuA对SLE的特 异性,已开始应用于临床常规检测.本文将针对核小体及其 自身抗体的检测方法,分离纯化技术,临床特异性以及近期新 的研究进展进行一综述和讨论. l核小体的结构 核小体(nucleosome)是真核细胞染色质基本重复结构的 亚单位,对于细胞核中DNA的组成非常重要.在电子显微镜 下,核小体呈"串珠"状,染色质原纤维就象一条串珠,由紧密 排列的核小体组成.核小体的核心含有成对出现的四种核心 组蛋白(histone)H2A,H2B,H3和I"I4,8个带正电荷的组蛋白 分子(H2A,H2B,H3和I-I4各2个分子)形成组蛋白八聚体, 146个双螺旋DNA碱基对环绕其两周,呈扁圆形,分别由2 个H3和H4分子组成的四聚体复合物,构成核小体核心颗粒 的内部(如图1左).H2A.H2B二聚体位于核小体的表面,此 结构m占据核小体顶部位置,通过50bp一60bp的DNA链 与相邻核小体连接,Hl参与螺旋DNA的聚合和解离(如图 1B). 图1A圈1日 圈l核小体的基本结构f圈IA为核小体核心囊粒} 近年研究表明,核小体是SLE的主要自身抗原,可能与 SLE发病及病理变化直接相关.SLE患者细胞凋亡异常导致 的核小体过度释放,可能是本病免疫异常的主要诱发环节之 一 .核小体及其特异性自身抗体除了在致病机制方面成为近 年来SLE研究的最活跃的领域,抗核小体抗体在临床中对 SLE诊断和治疗的作用也得到重视.临床研究提示,抗核小 体抗体与SLE疾病活动性及狼疮性肾炎的发生明显相关,可 能是SLE的特异性抗体之一. 2A哪AI抗核小体抗体.以下简称A哪A)的临床意义 2.1AnuA的定义与回顾AnuA被定义为与组织蛋白暴露 在染色质的部分发生反应的抗体,在染色质内找到的DNA结 构,或者一个由天然组织蛋白?DNA复合物构成的表位,特别 要排除的是抗体与非组织蛋白的反应和隐藏在染色质内的组 织蛋白表位的反应,以及与DNA结构如-A,C以及z构型的 反应.这些在染色质中均不存在,因此,并不是所有组织蛋白 和DNA活性的抗体都具有抗.染色质活性.染色质作为 ELISA中的抗原最有用的构型是脱?H1染色质和核小体核心 粒子.在这两种情况下,天然染色质通过微球菌核酸酶消化 溶解.HI和非组织蛋白被除去.再用0.5M牛理盐水在中性 ? 522?2007年2月第l4卷第4期(旬 刊)JPMT.February.2007,Vo1.14,No.4(IssuedEveryTen pH条件下而得染色质.核小体核心粒子由包裹在天然组织 蛋白(H2A,H2B,H3,H4)八聚体DNA组成.多元核小体核 心粒子,DNA链未被核酸酶切断时,叫做Hl?修饰染色质.在 过去的几年里已经开始重新关注AnuA.A删A是首批被发现 的自身抗体之一,因为它们是组成引起红斑狼疮的细胞排列 构造的大多数抗体.许多研究资料表明了这种抗体辅助 诊断系统性红斑狼疮和药物引起的狼疮(DIL)的临床应用, 并且从某种意义上来说,A肌A的定量曾是在临床实验室所进 行的最普遍的免疫学实验之一.AnuA在过去的IO年里曾有 过许多的名字:红斑狼疮因子,抗核小体,抗DNP以及抗一 (H2A.H2B.DNA),这些自身抗体可在近乎75%的系统性红 斑狼疮患者身上找到,并且有达100%的患者是由药物引起 的,它们也可在20%,50%的I型自身免疫型肝炎患者身上 找到. 2.2An?A的临床意义在80%的MRL/IprDIL小鼠中可产 生核小体特异性抗体,该自身抗体产生早,先于其他抗核抗 体,与肾小球肾炎有关.SLE患者多克隆核小体特异性自身 抗体的抗原反应与鼠类SLE模型表现相似,核小体在SLE中 作为主要自身抗原近年已得到证实.靶器官中免疫复合物的 沉积和炎性介质(包括补体)的大量活化是引起SLE全身性 组织炎症损伤的基本机制之一.核小体会成为多克隆B细 胞活化剂,这可能与SLE疾病的起始阶段有关;但更重要的 是,核小体是SLE中致病性T辅助细胞识别的自身抗原,不 仅引起同源B细胞产生核小体特异性自身抗体,而且引起抗 DNA抗体和抗组蛋白抗体的形成.文献报道,AnllA在抗ds- DNA碉性的sl童患者中有很高的阳性率(达60%, 65%)',因lIl}们对SLE患者更具有诊断价值.最近有 涯据表明,除了传统的致病性抗双链DNA抗体及其抗原抗体 复合物外,核小体和组蛋白成分的自身抗体及其抗原抗体复 合物,在SLE钧发病机制中起关键作用,尤其是在DIL肾炎 致病机制上意义重大L.核小体的组蛋白成分(氨基末端带 强阳性电荷)可促进免疫复合物与肾小球基底膜阴离子位点 的结合,包括既作为植入抗原使原位免疫复合物得以形成,也 可使含有核小体一核小体特异性抗体的循环免疫复合物得以 沉积.在以上两种情况下,均可使肾小球基底膜的通透性增 加,且产生炎性免疫应答反应.钟清等0研究表明,LN组患 者AnuA阳性率明显高于无肾炎组,AnuA对LN的诊断和监 测具有重要意义.此外,苏茵等也发现AnuA与患者的皮 疹,脱发,ESR增快,CRP增高,补体降低呈显着相关性,其滴 度高低也与SLE疾病活动指数评分呈明显正相关. 2.3AnuA的临床特异性和敏感性有两项关于AnuA重要 评论表明这种抗体对SLE和DIL具有敏感性和特异性,并且 AnuA的存在通常在SLE与肾小球肾炎患者中相联系AnuA 较抗DNA具有更高的敏感性.统计资料表明如果阴阳性分 割点升高,能使抗核小体对狼疮更加敏感.近年来,由于核小 体抗原纯化技术的改进,提高了AnuA对SLE患者的诊断特 异性.研究结果表明,应用ELISA方法检测AnuA在SLE患 者中具有很高的敏感性和特异性.国外报道'J,对sLE患 者进行AnllA检测,起敏感性和特异性分别为56.O%,64. 2%和97.O%,98.8%,国内苏茵等提出,AnuA可出现于 SLE疾病进程的各个时期,对SLE的敏感性高(69.9%),特 异性强(97.9%),可能是SLE的标记抗体之一,但许苛等DI] 报道测定敏感性偏低(55.8%),特异性偏低(95.3%).考虑 与A删A的来源不同,检测人群和疾病活动度不同以及所用 实际不同有关,但是与ds-DNA抗体,抗Sm抗体比较,敏感性 均有了较大的提高,且有良好的特异性,可用于SLE的诊 断],同时,多种商品化检测试剂盒的出现,使该自身抗体应 用于临床SLE等结缔组织病的诊断和鉴别诊断成为可能. 2.4AnuA的检测技术 2.4.1检测AnuA的技术许多不同的技术已被用于检测 An,除了LE细胞试验以外,还有染色质包被的串珠乳胶凝 集试验?,以及免疫沉淀?(用天然组织蛋白重组酸萃取的 组织部分?)和ELISA法都已被使用.早期的研究用"脱氧 核苷蛋白"作抗原【l研制出一种孵育在1M生理盐水中的 染色质中的预备品,但未得到明确鉴定.后期报道已有更好 的方法来鉴定该预备品,并能分析凝胶电泳后的蛋白质和 DNA的组成?.染色质的类型分析以及阴,阳性判断对于 辅助诊断SLE患者而获取高敏感性和特异性是非常重要的. 第一种研究用于以变性的H2A和H2B作为抗原进行DNA再 造,由血清结合上组织蛋白的变性区域,即天然染色质非暴露 部分?;第二种研究用于整条染色质作为抗原,剩余的Scl一 7O蛋白引起抗Scl-70,血清在此情况下产生弱阳性;第三 种研究用于一个阴,阳性的弱的(低的)判断(硬皮患者血清 呈现弱阳性). 2.4.2第一代与第二代核小体检测技术的比较通过对 SLE组(96例),患者对照组(73例),正常对照组(47例)进 行AnuA和抗dsDNA抗体的检测,采用由德国EUROIMMUN 公司生产的试剂盒和美国Coda公司生产的全自动酶标分析 仪检测[1.结果表明,.EUROIMMUN推出的第二代抗核小体 抗体EIASA检测试剂与第一代比较敏感度差异不大,但特异 性却有了明显提高早期因核小体抗原纯化制备方法存在技 术上的问题,纯化的核小体抗原常含有Hl,Scl-70(DNA拓扑 异构酶I,一种DNA结合蛋白),残留的染色质DNA和其他非 组蛋白等蛋白成分,导致多种结缔组织病患者血清与核小体 抗原交叉反应,尤其是在10%,68%的硬皮病患者中也可检 测出AnuA,使得该抗体作为SLE特异性抗体的临床应用价 值得到了很大的限制;而第二代AnuAELISA试剂在抗原的 制备上有了很大的改进,抗原分离纯化技术提高,纯化的核小 体抗原制品只含核小体单体,不含以上提到的DNA和组蛋白 等杂质成分,可排除硬皮病患者血清假阳性反应,这样就使得 AnuA对SLE的诊断价值得到了充分的发挥,极大提高了An— uA对SLE的特异性.目前已开始应用于临床常规检测. 3Anna的研究新进展以及注意' 目前,国内已有少数医院开展了AnuA的检测,也已发表 了数篇相关报道.有文献报道,以核小体多肽特异性抗原治 疗鼠狼疮模型的研究发现,核小体多肽特异性抗原可以抑制 TH细胞和B细胞的激活,从而为研究SLE的发病机制治疗 带来了新的曙光J.但需要指出的是:AnuA的检测对SLE 的诊断有重要意义,不同的核小体来源,不同的检测人群和疾 病活动度,以及检测试剂,方法等均会带来结果差异.该抗体 与抗Sm抗体不同,并非是SLE标记抗体.虽然已发现AnuA 对诊断SLE的敏感性和特异性比抗dsDNA抗体高,但仍有不 完全一致的结果.我国的情况如何还应进行大样本,多中心 检测从而得到更合理,更准确的结论.SLE的诊断不能仅凭 实用医技杂志2007年2月第14卷第4期(旬刊)JPMT.February.2007,Vo1.14:N0.4(IssuedEveryTenDays)?523? 某一种抗体阳性与否加以肯定或否定,在建立该抗体检测前 首先要明确其临床意义,其次,要避免假阳性或假阴性结果, 如同其他自身抗体的检测一样,临床医师在诊治工作中必须 密切结合患者的临床资料,正确看待检测结果,切勿以实验室 检查代替一切. 参考文献: [1]VanBmggenMC,I(d"snleI~C,BerdenJH.Autoinununityagainstand lupusnephritis[J].AnnalMedIntemem,1996,147(7):485. 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[关键词】医院图书馆;医务人员;服务 [中图分类号】砒97.32[文献标识码】B【文章编号】,1671-f,098{2007)04-0523.02 我院是广东省江门市建设规模最大的集医疗,急救,教 学,科研,预防,保健,康复于一体的三级甲等中医教学医院, 拥有一批临床经验丰富的技术骨干和学科带头人.院图书馆 针对各种读者对象和医疗,教学,科研任务,采取了多项服务 措施,在引导和促进临床科研工作等方面进行了有益的尝试. 1转变服务方式.实行主动服务 我国医院图书馆的工作长期以来一直以被动服务为主, 足不出户地坐等读者.我馆过去也只提供借还图书,代读者 检索等被动单一的服务.随着时代的迅猛发展和科技的进 步,在信息量越来越庞大,信息发布形式越来越趋于多元化的 今天,图书馆的这种被动服务显然已不能满足读者的需求,因 而更谈不上给一线医务人员的优良服务.因此要求新时期的 医院图书馆转变服务方式,变被动服务为主动服务,我馆近年 来通过馆员的主动服务,提高了信息服务水平,密切了与医, 教,研的联系. 2医院图书馆为医疗,教学和科研服务的方法 2.1做好信息收集整理和传递工作国内外最新医疗信息 资料对提高医务人员的医疗水平,科研人员的科研水平和更 新教学人员的知识结构,将起到非常重要的作用.因此,做好 信息收集整理和传递工作,是医院图书馆的重要职责.我院 图书馆的工作人员深入到临床,教学和科研一线,在订购期 刊,书籍和有关其他文献资料时,充分了解各类读者的信息需