消骨增贴质量标准研究

消骨增贴质量研究 [摘要] 目的:探讨消骨增贴的质量标准。方法:用薄层色谱法鉴别消骨增贴中的马钱 子、川黄柏和大黄;检查乌头碱含量;用双波长薄层扫描法对制剂中士的宁进行定量分析。 结果:薄层色谱鉴别专属性强，分离度好。乌头碱限量检查不超过0.4 mg/贴，定量分析中 士的宁点样量线性范围为0.61,3.05 μ(gr=0.998 0，n=5),平均回收率为100.73%，RSD=1.90% (n=6)。结论:所建立的方法可靠、准确、专属性强，可控制该制剂的质量。 [关键词] 薄层色谱;士的宁;消骨增贴 [中图分类号] R283.65 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2011)11(a)-081-02 Study on the quality standards of Xiaoguzeng Patch WANG Suhui, YAN Hui, WANG Rui, SUN Xiaodi, ZHANG Jing, SUN Shiguang* Department of Pharmacy, General Hospital of Beijing Military Command, Beijing 100700, China [Abstract] Objective: To explore the quality standards of Xiaoguzeng Patch. Methods: Semen Strychni, Cortex Phellodendri Chinensis, Rhizoma et Radix Rhei Officinalis in Xiaoguzeng Patch were identified by TLC, the contents of Aconitine were analysed, the contents of Strychnine in Xiaoguzeng Patch were analysed quantitatively by dual wavelength scanning. Results: The TLC had a good specific and separation. The content limit to Aconitine had not more than 0.4 mg/patch. Quantitative analysis of Strychnine in the volume of sample linear range was 0.61-3.05 μg (r=0.998 0, n=5), the average recovery was 100.73%, RSD=1.90% (n=6). Conclusion: The method is reliable, accurate and specific. It can control the quality of the preparation. [Key words] TLC; Strychnine; Xiaoguzeng Patch 消骨增贴是由川柏、肉桂、五加皮、大黄、续断、苏木、马钱子、川附子和白芥子等20 味中药组成的外用制剂，为我院院内制剂，经多年临床使用，效果明显。为准确有效控制药 品质量，笔者采用TLC法对马钱子、川柏和大黄进行定性鉴别，对川附子进行乌头碱限量检 查，采用双波长薄层扫描法对马钱子中士的宁进行含量测定，结果满意。 1 仪器与试药 岛津CS-9301薄层扫描仪;半自动点样仪(LINOMAT5);KQ-250型超声波处理器。 士的宁对照品(批号:110705-200306，供含量测定用)，盐酸小檗碱对照品(批号: 0713-9906)，大黄酚对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号:0796-9404);消骨增 贴(批号:20100819、20100820、20100821，由北京军区总医院制剂中心提供)。所用试剂均 为分析纯。 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别 2.1.1 马钱子 取供试品5贴，除去被、盖衬，剪碎，加浓氨水1 ml，加二氯甲烷100 ml 回流1 h，过滤，滤液置分液漏斗中，用硫酸(3~10倍)萃取3次(二氯甲烷液保留供大黄 鉴别用)，每次15 ml，加浓氨水调pH=9,10，再用二氯甲烷萃取3次，每次10 ml，合并二 氯甲烷液，蒸干，残渣加二氯甲烷1 ml制成供试品溶液，再取士的宁对照品加二氯甲烷制成 每毫升含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法[1](《中国药典》2010年版一部 附录? B)试验，各取上述两溶液10 μl，点于同一硅胶GF 254薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨水(16?12?1?4)上层液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯254 nm下检视。试验中按处方量和工艺制备缺马钱子的空白对照液。经3批样品试验观察，供试品色谱中与士的宁对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，空白对照试验未见干扰。 2.1.2 川柏 取“2.1.1”项下的供试品溶液作为样品溶液，取小檗碱标准品用二氯甲烷制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录? B)试验，取上述二液各5 μl分别点于同一硅胶G板上，以正丁醇-乙酸-水(7?1?2)展开[2-3]，取出，晾干，在紫外灯365 nm下检视。试验中按处方量和工艺制备缺川柏的空白对照液。经3批样品试验观察，供试品色谱中与小檗碱对照品色谱相应位置上，显相同颜色的亮黄色荧光斑点，空白对照试验未见干扰。 2.1.3 大黄 取“2.1.1”项中的二氯甲烷液，蒸干，加二氯甲烷2 ml作为供试品溶液。取大黄酚对照品用无水乙醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录? B)试验，各取供试品液10 μl和对照品液5 μl，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸(10?1?0.1)展开[4]，取出，晾干，在紫外365 nm下检视。试验中按处方量和工艺制备缺大黄的空白对照液。经3批样品试验观察，供试品色谱中与大黄酚[5]对照品色谱相应位置上，显相同颜色橙黄色荧光的斑点，空白对照试验未见干扰。 2.1.4 乌头碱限量检查 取“2.1.1”中的样品溶液作为供试品液，另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录? B)试验，各取上述供试品溶液5 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-醋酸乙酯(1?1)为展开剂，层析缸内放一小杯氨水，展开，取出，晾干，用同一展开剂重复展开1次，取出晾干，喷以碘化铋钾试液显色。供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上出现的橘红色斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件 以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨水(16?12?1?4)的上层液为展开剂，在波长λs=254 nm，λR,325 nm[6]处测定。分别吸取供试品溶液5 μl，对照品溶液1 μl与2 μl，分别交叉点于同一硅胶GF 254薄层板上。 2.2.2 对照品溶液制备 取士的宁对照品加二氯甲烷制成每毫升含0.4 mg的溶液，作为对照品溶液。 2.2.3 供试品溶液制备 取本品5贴，除去被、盖衬，剪碎，精密称定，精密加浓氨水1 ml，加二氯甲烷100 ml回流1 h，过滤，滤液置分液漏斗中，精密量取续滤液10 ml用硫酸(3~10倍)萃取3次，每次15 ml，加浓氨水调pH=9,10，再用二氯甲烷萃取3次，每次10 ml，合并二氯甲烷液，蒸干，放冷，残渣中精密加入三氯甲烷5 ml使溶解，作为供试品。 2.2.4 样品溶液稳定性试验 将待测样品溶液，定时测定含量，测定结果表明，RSD=0.15%，样品溶液在8 h内基本稳定。 2.2.5 精密度试验 分别精密吸取士的宁对照品溶液1 μl，按照“2.2.1”项下色谱条件，分别进样5次，测量峰面积，RSD=1.04%，精密度符合要求。 2.2.6 线性关系的考察 分别精密吸取不同浓度士的宁对照品溶液点于同一硅胶GF 254薄层板上，按上述展开条件展开，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，点样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为Y=212.97X-1.531 1(r=0.998 0，n=5)。结果表明，士的宁在0.61,3.05 μg范围内呈良好的线性关系。 2.2.7 重复性试验 取同一批次的样品，提取方法等同，按前述薄层色谱法重复测定样品5次，士的宁的平均含量为0.092,(RSD=2.63%，n=5)，结果表明此法重现性良好。 2.2.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批次消骨增贴样品3.45 g，精密称定。精确加入士的宁对照品，按样品溶液的制备方法操作，测定其含量并计算回收率。结果显示，平均回收率为100.73%，RSD=1.90%。见表1。 2.2.9 样品含量测定 取本品三批，按正文所述方法测定，计算士的宁含量。见表2。 由于测定样品的批次有限，根据测定结果，暂定本品含马钱子以士的宁(C21H22N2O2)计，每贴含士的宁应为0.073,,0.109,。 3 讨论 消骨增贴处方中附子含有毒性极强的乌头碱[7]，乌头碱为酯型生物碱，口服0.2 mg就会中毒，3,4 mg即可致死，尽管在炮制过程中乌头碱的毒性有所降低，但仍不可忽视。本品虽为外用制剂，但为确保使用消骨增贴的安全有效性，笔者对其中的酯型生物碱乌头碱限量检查，结果显示，其含量在安全用药范围内。 消骨增贴中马钱子含有士的宁成分，既是活性成分，又是毒性成分，在制剂中必须检出，但含量不能超过安全剂量，因此必须制定含量限度的上下限，以保证制剂的安全有效。根据《中国药典》2010年版一部马钱子粉中士的宁的含量及马钱子粉在处方中所占比例[8]，本品含士的宁应为0.091%，又根据限量范围应为该含量的80%,120%，故含士的宁应为0.073%,0.109%。 [参考文献] [1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:35. [2] 张克,毛媛,王艳玲,等.妇科止带片中椿皮和黄柏的薄层色谱鉴别[J].陕西中医,2009,30(5):607-608. [3] 王志军.锁阳固精丸中牡丹皮与黄柏的鉴别研究[J].内蒙古医学杂志,2004,36(3):219-220. [4] 汤新兰.牛黄解毒片中大黄鉴别方法的探讨[J].海峡药学,2008,20(3):86-87. [5] 孔淑琴,孔广英.复方大青叶合剂和新复方大青叶片中大黄的薄层鉴别[J].济宁医学院学报,1999,22(2):39. [6] 翟遵兰,田永庆.薄层扫描法测定骨筋丸胶囊中士的宁的含量[J].中国现代应用药学杂志,2003,20(6):499-501. [7] 程丽梅.骨刺消痛胶囊中酯型生物碱含量限度研究[J].中国医药指南,2010,8(29):216-217. [8] 罗晋萍,张中苏,连云岚,等.薄层扫描法测定金龙祛痹丸中士的宁的含量[J].药物分析杂志,1999,19(3):179-181. (收稿日期:2011-06-01)