右美沙芬对激活的小胶质细胞的抑制作用[Word文档]

右美沙芬对激活的小胶质细胞的抑制作用[Word文档] 右美沙芬对激活的小胶质细胞的抑制作用 关键字: 右美沙芬对激活的小胶质细胞的抑制作用 本文为Word文档，感谢你的关注, (1.宁夏颅脑疾病重点实验室，宁夏医科大学，宁夏 银川 750004;2.银川市第一人民医院，宁夏 银川 750004) 摘要:目的:研究右美沙芬(DM)对激活的小胶质细胞的作用及热休克蛋白60(HSP60)在DM神经保护中的作用机制。方法:培养BV2小胶质细胞株，分为对照组，细菌脂多糖组，(LPS)，实验组(DM)。Western-blot检测DM对LPS激活的BV2细胞HSP60和Caspase 3的影响，ELISA检测DM对HSP60释放的作用。结果:LPS组中HSP60和Caspase 3的表达及释放都比对照组显著增加，加入DM后，这些因子的水平都明显降低。结论:DM可能通过HSP60信号通路途径阻止小胶质细胞的凋亡而发挥神经保护作用。 关键词:热休克蛋白60;右美沙芬;Caspase 3;小胶质细胞 G642.423 文献标志码:A 1674-9324(2017)18-0277-02 热休克蛋白是机体的一类应激蛋白，在生理状态下对机体起着保护功能。但是有研究发现，在病理情况下，很多细胞会大量表达热休克蛋白60(HSP60)，并将其释放到胞外，引起细胞凋亡[1]。右美沙芬(Dextromethorphan，DM)是一种右旋吗啡喃化合物[2]，对动物因低血糖或脑缺血引起的神经损伤具有保护作用，DM被证明能有效抑制小胶质细胞活化，并且可抑制细胞炎症因子如TNF-α、IL-6，NO和超氧化自由基等[3]，但是右美沙芬的作用机制目前尚不清楚。 一、材料与方法 (一)材料 右美沙芬和LPS购自Sigma公司;HSP60抗体购自ENZO公司;Caspase 3及β-actin抗体购自Cell Signaling 公司;蛋白定量BCA试剂盒购自Thermo公司;ELISA试剂盒购自欣博盛公司。 (二)方法 1.小胶质细胞BV2的培,B。BV2细胞培养在DEME培养基中，含10%胎牛血清。利用1μg/ml LPS处理30min后，在细胞培养液中加入DM溶液(10μM)，作用24小时后收集细胞及上清。 2.Western blot检测蛋白含量。药物处理完毕，提取各实验组的蛋白并收集上清液，10% SDS-PAGE分离后转至PVDF膜上，5%脱脂牛奶封闭膜2小时。然后加入一抗，置于4?过夜。利用TBST洗涤膜三次，洗去未结合的一抗。最后用二抗室温孵育1 h，利用ECL试剂显色成像。 3.ELISA试剂盒检测HSP60的释放。按照HSP60 ELISA试剂盒操作说明进行实验，最后酶标板置于酶标仪上，450nm处测定各孔光密度值(OD)。 4.统计学。采用SPSS11.11进行统计学分析。实验数据用x?s表示，组间比较用方差分析，进一步比较两两间差异采用Student-Neuman-Keuls Test方法。 二、结果 (一)DM显著抑制LPS激活的小胶质细胞HSP60的表达及释放 LPS激活后的小胶质细胞中HSP60的表达明显高于对照组，差异具有显著性。加入DM可显著抑制LPS引起的HSP60的升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。对上清液进行ELISA实验，结果显示DM处理后，LPS引起的小胶质细胞HSP60的胞外释放量明显地被抑制了。 (二)DM抑制Caspase 3的表达 Western blot结果表明，LPS激活的小胶质细胞中 Caspase 3的表达明显高于对照组，在DM处理的实验组中，Caspase 3的表达显著下降，差别有统计学意义(P<0.05)。 三、讨论 热休克蛋白是一类应激蛋白，对机体主要起着保护作用。但是HSP60对细胞凋亡具有双重作用。我们先前的研究发现心肌细胞中HSP60的表达和定位都发生了改变，导致心肌细胞的损伤或凋亡[4]。但是关于HSP60在神经系统中的作用的报道还很少见。 小胶质细胞的激活参与了多种神经系统退行性病变如老年痴呆症、帕金森症等的发生发展[5]。本研究假设HSP60在激活的小胶质细胞中高度表达，并被释放至胞外。胞外的HSP60激活凋亡因子Caspase 3，导致周围其他神经细胞的损伤或凋亡。本实验证实了在LPS激活的小胶质细胞内HSP60的表达显著增高，胞外也检测到HSP60，并增强了Caspase 3的表达。这些结果与心肌细胞中关于HSP60的研究结果的报道一致，说明小胶质细胞活化后释放至胞外的HSP60可进一步激活自身导致自身的凋亡。 右美沙芬可能是一种潜在的治疗神经系统炎性疾病的药物[6]。本实验中，我们证实了DM能有效抑制小胶质细胞的激活，为一些神经退行性疾病的防治提供了潜在的药物治疗靶点。 参考文献: [1]Gupta S，Knowlton A A. HSP60，Bax，apoptosis and the heart [R].J Cell Mol Med. 2005，9(1):51. [2]Craviso GL and Musacchio JM:High-affinity dextromethorphan binding sites in guinea pig brain. I. Initial characterization [J].Mol Pharmacol. 1983a;23:619,C628. [3]Prince DA and Feeser HR:Dextromethorphan protects against cerebral infarction in a rat model of hypoxia-ischemia [J].Neurosci Lett 1988;85:291-296. [4]Kim SC，Stice JP，Chen L，Knowlton A A. Extracellular heat shock protein 60，cardiac myocytes，and apoptosis [J].Circ Res，2009;105:1186-1195. [5]Gonzalez-Scarano F，Baltuch G. Microglia as mediators of inflammatory and degenerative diseases[J].Annu Rev Neurosci，1999;22:219-40. [6]Mousavi SA，Saadatnia M，Khorvash F，et al:Evaluation of the neuroprotective effect of dextromethorphan in the acute phase of ischaemic stroke [J].Arch Med Sci. 2011;7:465-469. 收稿日期:2016-11-30 基金项目:2016年国家级大学生创新创业训练项目(201610752010) 作者简介:王俊燕(1992-)，女(汉族)，宁夏银川人，宁夏医科大学生物技术专业本科生;李玲(1973-)，女(汉族)，宁夏银川人，专科，主治医师，银川市第一人民医院高压氧科，主要从事高压氧神经科学研究;张燕(1992-)，女，宁夏银川人，宁夏医科大学生物技术专业本科生; 李云鸿(1972-)，男(汉族)，副教授，硕士，宁夏医科大学，主要从事神经生物学研究。 通讯作者:王银(1973-)，女(汉族)，教授，博士，硕士生导师，宁夏医科大学，主要从事神经生物学研究。 文档资料:右美沙芬对激活的小胶质细胞的抑制作用 完整下载 完整阅读 下载 全文阅读 免费阅读及下载 阅读相关文档:以人为本理念在高校教务管理领域中的实践 基于网络传媒对大学体育课堂教学的有效性研究 浅谈大学生如何开展科学研究 基于战略的高校创新 团队绩效评价体系构建研究 浅谈临床技能培训中心一次性医疗用品的使用管理 高校学风建设的现状及对策 基于舆情引导的高校突发事件应急机制探究 高校社团健康发展的思考 高校学生工作精细化管理体系框架构建与实践 浅谈非985、211高校学术水平提升的困境及对策 如何做好昆虫学实验教学准备工作 加强环保意识搞好化学实验中“三废”的治理 民办本科机械类专业电工与电子技术基础教学思考 提升高职院校校内实训资源利用率的实践研究 高一学生地理课后书面作业规 感谢你的阅读和下载 *资源、信息来源于网络。本文若侵犯了您的权益，请留言或者发站内信息。我将尽快删除。*