紫外线诱变侧耳菇担孢子的研究

紫外线诱变侧耳菇担孢子的研究 紫外线诱变侧耳菇担孢子的研究 第3t卷第2期 2002芷6月 内蒙古师范太学自然寻}学(汉文)版vd31No2 DTteFMongoliaNormalUniversity(NaturalScLenceEdition1Jun.2002 紫外线诱变侧耳菇担孢子的研究 张功,王瑞君,峥嵘,牛艳芳 (内蒙古师范太学生抽丰,内蒙古呼和浩特010022) 摘要:对侧耳菇99号担孢子,采用不『可时问的紫外线照射诱变,分离纯化后,得到在遗传 上相对稳定的突变菌株——侧耳菇99号v02涟菌株在综台PDA斜面培养基上生长速度快,菌 件浓密洁白,较对照菌株性状优良 关键词:侧耳菇99号;紫外线;诱变 中国分类号:Q9381文献标识码:A文章编号:1001—8735(2002)02—0150—03 近年来,利用理化方法诱变,原生质体融合及基因工程育种在食用菌和药用菌菌种选育 中得到广泛应用目前,已培育出侧耳菇,黑木耳,香菇,金针菇等一批适于固体栽培的高产 优质新菌株….笔者通过实验对侧耳菇99号担孢子进行了紫外线诱变选育研究.以期培养 出生长速度快,生长活力强,适于栽培的新菌株 1材料和方法 1.1材料 1.11菇源采自呼和浩特市郊区个体农户栽培的菇体. 112培养基配方综台马铃薯培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,磷酸 二氢钾15g,硫酸镁0.5g.水1000mL.pH7. 1.2方法 1.2.1孢子收集将采集来的无病虫害的种菇切去2/3菇柄,用75%的酒精棉球擦拭菌 盖面及菌柄,然后插在预先灭菌的孢子收集器内的支架上,菌褶向下,并正对敞口的培养 皿,皿内预先加1OmL无菌水,在26?下,静置2d取培养皿内液体镜检观察 12.2紫外线诱夏在黑暗的接种箱内预先开紫外灯20rain,使波长稳定.从孢子收集器 内取出培养皿,用涂棒沾取未诱变的孢子液涂布于PDA培养基上作为对照.然后将此培养 皿置于磁力搅拌器上,距紫外灯30c111.边搅拌边照射.控制照射时间分别为1n,3min. 5rain 将经不同时间照射的孢子悬液.分别涂布于PDA培养基上.在25?培养8d,培养期间 记录担孢子萌发数及菌落生长情况ll一 12.3菌种纯t扶培养基中挑选生长迅速,菌丝粗壮,浓密洁白的单菌落转接入试管 收稿目期:20011.121 基金项衰古皇然科学钎助项F4ftJ?(i41, 者筒『r:功l1049)..案^呼和特r^.内挚占岍范'鼬救授 第2期张功等紫外线诱变侧耳菇担孢子的研究.151 PDA斜面培养基上,继续培养,得以纯化保藏菌种. 1.24酯酶同工酶的电泳测定将平菇99号亲本株及其诱变株接入液体PDA培养基【. 置于气浴恒温振荡器中振荡培养,控制温度为28?,振荡速度为120r/min.培养7d.用超声 波破碎器破碎苗丝球.超声波强度为80dB,破碎时间为8min.用821超速离心机离心2次, 离心机转速为1200r/rain,收集上清液于一4?冰箱中保存取上清液,采用垂直板凝 胶电 泳,以使其中的酯酶同工酶分离【3 2结果与分析 2.1经不同时间紫外线照射诱变的担孢子 在PDA平皿培养基上生长情况的比较 将经过1mln,3min,5min紫外线照射诱 变的担孢子分别编号为V01,V02,V03,对照 为CK.比较其在PDA平皿培养基上孢子萌 发速度和苗落生长情况.结果见表1.由表1 可知,担孢子V02的萌发速度快.且菌落数 最多. 2.2对照菌株与不同时间紫外线照射的菌 株在PDA斜面培养基上生长情况比较 将经不同时间紫外线照射诱变处理培养 出的3个菌株与对照株CK分别接种于斜面 培养基上.接种块大小基本相同.每株3管. 置于25?恒温箱内培养9d,在培养期间比 较长满试管的天数,长势及色泽等.结果见 表2.由表2可知,侧耳菇99号V02的菌丝 生长速度最快.且菌丝浓厚,丰满,生长整齐 显优于其他菌株. 表1各种担孢子在PDA平皿 培养基上的生长情况 表2各菌种菌丝在PDA斜面上的生长情况 明 2.3诱变株侧耳菇99号V02继代培养稳定性 将侧耳菇99号V02菌株在综合PDA培养 基上转接2代,其生长速度,长势,色泽等监测指 标相对稳定,未出现退化现象 24平菇99号及其诱变种V02脂酶同功酶的 电泳测定 电泳图谱如图1所示从电泳图谱可以看 出,两份酶样的电泳带均为5条,酶带宽窄,颜色 深浅也相同只有l号和2号酶带的RF值略有 不同,但二者之间共性明显多于个性,说明二者 亲缘关系极近或属于同一种.这是由于样品在后 注+苗丝稀薄,纤细;++苗丝较粗密 +++苗丝生长丰满.粗壮,整齐 2 两苗林脂酶同工酶酶谱比较 强 由 弱 152-内蒙古师范大学自然科学(汉文)版第31卷 天培养过程中,经过紫外线诱变处理,使得脂酶的基因表达基础DNA发生了变异,导致电 泳图谱有一定差异两个样品的酶带数目和酶括力相对稳定,说明它们具有相同的遗传基 础,但由于V02经过紫外线诱变,导致1号和2号酶带的RF值略有不同【. 3结论 咀侧耳菇99号担孢于为材料,采用紫外线连续诱变和分离纯化等过程,以斜面生长速 度,长势,色泽,酯酶同工酶等为监测指标,筛选出1株遗传上相对稳定,适应固体斜面培养 的侧耳菇99号V02新菌株.该菌株在综合PDA培养基上生长速度快,长势旺盛,菌体浓密 洁白.. 之,采用紫外线诱变方法对选育高产优质食用菌和药用菌菌种仍是一种简便,快 速, 有效的途径. 参考文献 [1陈石良深层发酵灰树花菌株的诱变筛选[J]食用菌.2000,(2):7—8 [2]周德庆微生物学教程[M].北京:高等教育出版社.1991.244—250. [3]赖德,范培昌同工酶[M].北京:北京科学出版社.198925—26. [4]党建章.六株草菇同工酶的凝胶电泳测定[J]食用菌.1989,(1):15—16 ASTUDY0NSP0RES0F PLEUROTU_s99MUTATEDBYUVRAYS ZHANGGong,WANGRui?jun,Zhangrang,NIUYan-~ang (DepartmentofBiology.InnerMongoliaNormalUniversity.Huhhot010022.Chind) Abstract:SporesofPleurotus99wereirradiatedwithUVraysfordifferentdurationsoi time.Astrainwasgained,ofwhichgeneticcharacterisstableandgrowingstatesbetterthan Otherstrainscultivatedinthe~ilTxeconditionsonPDAmedia Keywords:Pleurotus99:UVrays:mutate 【责任编辑陈汉忠】