三九胃泰颗粒对大鼠急性胃粘膜损伤的修复作用

三九胃泰颗粒对大鼠急性胃粘膜损伤的修复作用 三九胃泰颗粒对大鼠急性胃粘膜损伤的修 复作用 — 42一现代消化及介入诊疗2001年第6卷第4期MorenDigestion&Intervention2001,Vo1.6.No.4 三九胃泰颗粒对大鼠急性胃粘膜损伤的修复作用 张万岱姚永莉 【摘要】目的观察三九胃泰颗粒对胃粘膜损伤修复和细胞增殖活性调控的影响.方法 采用无水乙醇lmL胃饲诱发急性胃粘膜损伤大鼠模型并用三九胃泰颗粒治疗,免疫组织化学 技术检测胃上皮细胞的增殖改变,早期应答基因c-jun和c.met的达.结果三九胃泰颗 粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘膜损伤指数(UI)均显 着低于无水乙醇模型组及自然恢复组,尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚(P<O.05);免疫 组织化学显示三九胃泰颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘 膜PCNA标记的阳性细胞数量,c-jun和c.met的阳性表达均有高于 无水乙醇模型组及自 然恢复组的趋势,尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚(P<0.05).结论三 九胃泰颗粒能促进急 性胃粘膜损伤的修复. 【关键词】急性胃粘膜损伤;细胞增殖:三九胃泰 EffectofSanJiuWeiTaionacutegastricmucosallesion DaiZWandLiYY [Abstract]0bjectiveToinvestigatetheeffectofSanJiuWeiTai(SJWT)onacutegastric mucosallesionandcellproliferation,MethodsAnimalmodelofacutegastricmucosallesion,as establishedbyintragastricinstillationof1mlethano1.andthismodelWaStreatmentedwithSJ,?The expressionofPCNA.c-junandc—metwereanalyzedbyimmunohistochemi calstudies,Results Gastricmucosallesionindex(W1)weresignificantlydecreasedaftertreatmentwithS删WeiSu (ws),YangWe(Yw)andLiZhuDeLe(LZDL)thanmodelandspontaneousrecoveryrats,andthe effectofSJ,? Twasthemostsignificantamongthosedrugs(P<O.05).Immunohistochcmicalstaining revealedexclusi~’CpositivestainingofPCNA,c-jun andC-metaftertreatmentwithSJWT’WS,YWandLZDLthanmodelrats,andtheeffectofSJWT wasthemostsignificantamongthosedrugs(P<O,05), ConclusionSn,Tcouldacceleratethehealingofacutegastricmucosallesion. [Keywords]Acutegastricmucosallesion;Cellproliferation;SanJiuWeiTai; 三九胃泰颗粒由三桠苦,九里香,白芍等 组成,具有消炎止痛,理气健胃的作用,主治 慢性胃炎,功能性消化不良等上消化道疾病. I994年三九胃泰被列为国家中药保护品种,为 进一步证明其对胃粘膜保护的药理作用及其相 互关系,我们应用三九胃泰颗粒临床治疗剂量 (0.1g,kg”1.d.)的30倍(3g.kg-1.d.),观察其对大 鼠无水乙醇急性胃粘膜损伤模型的影响,并检 测了胃上皮细胞的增殖改变,与细胞增殖密切 相关的早期应答基因c-jun和c-met的表达【1_l. 作者单位:510515广州市第一军医大学南方医 院全军消化内科研究所 ? 论着? 以圳明确三九胃泰颗粒对胃粘膜损伤修复和细 胞增殖活性调控的机理. 和方法 一 ,材料三九胃泰颗粒由深圳南方制药 厂生产,批号20010202;胃舒颗粒由扬子江制 药股份有限公司生产,批号001214;养胃冲剂 由正大青春宝药业有限公司生产,批号 0102006;丽珠得乐由珠海丽珠药厂生产,批号 0103067.免疫组化染色试剂购自武汉博士德公 司.选用56只健康成年雄性SD大鼠,体重200 g?10g,饮食不限,适应性饲养7d后用于 现代消化及介入诊疗2001年第6卷第4期 MorenDigestion&Intervention2001,Vo1.6,No4—43一 实验. 二,动物模型制备及处理实验用大鼠随 机分成7组,每组8只.正常对照组(A):禁 食不禁水24h后,蒸馏水1mL,ig后间隔1h 断颈处死动物.无水乙醇模型组(B)-禁食不 禁水24h,无水乙醇1mL,ig后间隔1h断 颈处死.自然恢复组(C):禁食不禁水24h, 无水乙醇1mL,ig后间隔8h,蒸馏水2mL,bid, 连续5d.三九胃泰颗粒治疗组(D):禁食不 禁水24h,无水乙醇lmL,ig后间隔8h,三 九胃泰颗粒2mL(0.15kg.L),bid,ig,连 续5d.胃舒颗粒治疗组(E):禁食不禁水24h, 无水乙醇1mL,ig后间隔8h,胃舒颗粒2mL (0.9kg.L).bid,ig,连续5d.养胃冲 剂治疗组(F):禁食不禁水24h,无水乙醇1mL, ig后间隔8h,养胃冲剂2mL(0.9kg.L),bid, ig,连续5d.丽珠得乐治疗组(G):禁食不 禁水24h,无水乙醇1mL,ig后间隔8h,丽 珠得乐2mL(0.O15kg.L),bid,ig,连续 5d.C,D,E,F,G组处理结束后禁食不禁水 24h,断颈处死大鼠.全部实验大鼠均正中开 腹取出全胃,结扎食管及幽门,向胃内注入 40rag.L多聚甲醛溶液2mL,并将全胃浸入 40mg.L多聚甲醛溶液中固定30min后,沿胃 大弯切开,平展在玻璃板上,肉眼观察胃粘膜 改变;用微卡尺测定溃疡灶大小并按Guth法计 算粘膜损伤指数:全胃各病灶长度之和为损伤 指数(UI),以mm表示,损伤?lmm(包括 糜烂点)为1分,>lmm而?2mm为2分, 依此类推,损伤宽度>2mm者指数加倍(.胃 组织40mg,L.多聚甲醛溶液固定6h,石蜡包 埋,制成3m,4岬的连续切片,HE染色观 察组织病理学改变. 三,免疫组织化学采用武汉博士德公司 的SABC免疫组化染色试剂盒,按说明书操 作. (一)1PCNA免疫组织化学染色结果分析 阳性细胞的核被染成棕黄色或深棕色,计数方 法:每个标本的连续切片在高倍镜(10X0) 下随机取5个视野,每个视野计数200个以上 胃小凹有核细胞中PCNA阳性的细胞数,换算 成PCNA标记指数(PCNALabelingIndice, PCNALI),PCNALI=阳性细胞数/计数细 胞数XlO0%. (二).2C—jun,c—met免疫组织化学染色 结果分析c-jun阳性细胞的核或胞浆可被染成 棕黄色或深棕色,而c—met阳性细胞的胞浆可 被染成棕黄色或深棕色.染色结果分级参照 Shimizueta1[评分方法.每张切片均观察胃窦 部粘膜染色情况,从中选择5个有代表性的区 域,每区计算200个细胞.阳性细胞数计分: 阳性数?5%0,阳性数>5%但?35%为1,阳 性数>35%但?70%为2,阳性数>70%为3.阳 性强度记分:不着色为0,弱着色为1,强着色 为2.阳性分级:以上两项相加,?2为(.), 3=(+),4=(++),5=(+++).以阳性分级(+) 以上为阳性. 四,统计学分析用SPSS统计软件进行 数据处理,率的比较用Chi.Square检验,等级 资料用非参数检验:计量资料数据用均数? 差表示,满足正态分布时行方差分析, 不满足正态分布时用非参数检验,/KO.05认为 有显着性差异. 结果 一 ,三九胃泰颗粒对无水乙醇所致急性胃 粘膜损伤修复的影响:大体观察发现正常对照 组大鼠胃粘谟红润,光泽,未见糜烂,水肿及 充血等病理改变.无水乙醇模型大鼠胃粘膜表 面见条状出血病灶,少数呈斑片状及点状,粘 膜表面明显水肿(图l,2).经三九胃泰颗粒治 疗大鼠胃粘膜的色泽及光润度与正常相似,偶 见点状糜烂:经胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得 乐治疗火鼠胃粘膜的色泽及光润度也与正常相 似,可见点状糜烂及出血点改变;自然恢复大 鼠胃粘膜的色泽浅淡,光润度稍差,仍可见糜 烂,水肿及充血等改变,但较无水乙醇模型大 鼠程度明显减轻.各组间胃粘膜表面损伤程度 比较以UI为标准,三九胃泰颗粒,胃苏颗粒, 养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘膜UI值均 显着低于无水乙醇模型组及自然恢复组;三九 胃泰颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治 疗组大鼠胃粘膜UI值之间虽无显着差异,但三 九胃泰颗粒治疗组大鼠胃粘膜UI值低于其它三 个治疗组(表1) 现代消化及介入诊疗2001年第6卷第4期MorenDigestion&Intcrvmltion2001.Vo1.6.No.4 表1胃粘膜表面损伤程度及胃上皮细胞增殖情况比较(x?s,n=8) 0玢AP<0.05,wBP<0.05,VSCP<0.05 二,三九胃泰颗粒对无水乙醇急性胃粘膜 损伤后细胞增殖的影响PCNA标记的阳性细 胞均呈核着色,在正常胃粘膜,PCNA标记的 呈深棕色或棕黄色的阳性细胞主要分布于粘膜 固有层胃小凹区域的腺管上皮中,呈带状分布, 形成细胞增殖带,表层上皮几乎不存在PCNA 标记的阳性细胞:无水乙醇所致急性胃粘膜损 伤时,固有层胃小凹区域的腺管上皮中PCNA 标记的阳性细胞数量显着减少;而经三九胃泰 颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗后, 固有层胃小凹区域的腺管上皮中显着增多,比 正常粘膜也明显增多,尤以三九胃泰颗粒治疗 后PCNA标记的阳性细胞数量增加显着:自然 恢复大鼠胃粘膜PCNA标记的阳性细胞,较无 水乙醇急性胃粘膜损伤时明显增加,接近正常 (表l,图3). 三,三九胃泰颗粒对无水乙醇所致急性 胃粘膜损伤后相关基因表达的影响即刻早期 应答基因c-jun及c-met参与细胞增殖的调控, 与胃粘膜损伤修复的关系密切.c-jun阳性细胞 的核或胞浆可被染成棕黄色或深棕色,c-met 阳性细胞的胞浆可被染成棕黄色或深棕色.C. un核阳性细胞多位于粘膜固有层胃小凹区域 的腺管上皮中,呈带状分布,c-jun胞质阳性细 胞多位于胃粘膜,散在分布或簇状分布(图4). c-met阳性细胞多位于粘膜中上l/3,散在分布 (图5).正常胃粘膜及无水乙醇所致急性胃粘 膜损伤时c-jun的阳性信号表达较少,而未见 c-met的阳性信号表达;自然恢复大鼠胃粘膜 中出现c-met的阳性信号表达;而经三九胃泰 颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗后, 胃粘膜中c-jun及c-met的阳性信号表达明显增 加,尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚(见表2,3). 表2C-jun对无水乙醇所致急性胃粘膜损伤修复的 影响(n=8) 总体的秩和检验P---O.000; 总体率的比较:x=24.767,P=0.000; 的两两比较:CVSaP=O.044,dVSaP=O.002,evsa P=0.012,fvsaP=0.002,gVSaP=-O.012,余均P>0.05 表3C-met对无水乙醇所致急性胃粘膜损伤修复 的影响(n=8) 总体的秩和检验P=0.043; 总体率的比较:x2=-12.839,P=0,046; 率的两两比较:dVSaP=O,031,dVSbP--O,03l,余均 P>0,05 讨论 胃炎是一种古老而常见的消化系统疾病, 属中医的”胃脘痛,胃痞,痞胀”等范畴.其 发病率居各种胃病之首,对人类健康的影响较 大.中医中药对胃炎的治疗具有悠久的历史, 已积累了丰富的经验.但由于胃炎病程,疗程 较长,中药煎剂费时费力,往往患者依从性差. 加强中药剂型研究,把中医理论与临床实践相 结合,筛选出确有疗效的专方专药,制成糖浆, 冲剂,片剂等中成药不仅便于患者接受,还将 现代消化及介入诊疗2001年第6卷第4期 MorenDigestion&Intervention2001,Vo1.6,No.4—45一 为拓展中药应用带来曙光.三九胃泰冲剂【】由三 桠苦,九里香,白芍等组成,具有消炎止痛, 理气健胃的作用,主治各类慢性胃炎,功能性 消化不良等上消化道疾病,面世以来,深受患 者及医生的欢迎,1994年三九胃泰被列为国家 中药保护品种. 众所周知,胃粘膜的损伤修复是一个复杂 的多因素,多途径的网络调控过程,为进一步 了解三九胃泰在胃粘膜损伤修复这一复杂调控 过程中的药理作用及其疗效,探讨三九胃 泰颗粒对胃粘膜损伤修复和细胞增殖活性调控 的机理.我们观察了其对胃上皮细胞的增殖, 与细胞增殖密切相关的早期应答基因c-jun和c. met表达的影响. PCNA可标记S期,G期及M期的增殖细 胞.PCNA的免疫组化染色标记指数是评价胃 上皮细胞增殖改变的可靠指标【.无水乙醇所致 急性胃粘膜损伤时,固有层胃小凹区域的腺管 上皮中PCNA标记的阳性细胞数量显着减少, 而经三九胃泰颗粒,胃苏颗粒,养胃冲剂及丽 珠得乐治疗后,固有层胃小凹区域的腺管上皮 中显着增多,比正常粘膜也明显增多,尤以三 九胃泰颗粒治疗后显着.提示三九胃泰颗粒对 无水乙醇所致急性胃粘膜损伤修复具有明显促 进作用. 原癌基因c-jun及c—met属即刻早期应答基 因(immediateearlyresponsegene),其编码的 蛋白为重要的转录因子,可诱导其下游基因 mRNA转录和蛋白表达,参与细胞增殖的调控, 与急性胃粘膜损伤修复的关系密切f.我们的研 究发现正常胃粘膜及无水乙醇所致急性胃粘膜 损伤时c-jun的阳性信号表达较少,未见c.met 的阳性信号表达,而经三九胃泰颗粒,胃苏颗 粒,养胃冲剂及丽珠得乐治疗后,胃粘膜中c-jun 及c.met的阳性信号表达明显增加,尤以三九 胃泰颗粒治疗后为甚.提示三九胃泰颗粒能促 进损伤胃粘膜中c-jun及c.met的表达,c-jun及 c—met参与并促进损伤胃粘膜的上皮细胞增殖过 图lA胃粘膜小片状烧伤 程,这可能也是三九胃泰颗粒能促进无水乙醇 所致急性胃粘膜损伤修复的重要原因之一. 本研究为探索三九胃泰颗粒促进胃粘膜损伤修 复的可能机制提供了新的信息和依据,提示我 们可在临床实验中,进一步观察三九胃泰颗粒 对胃粘膜损伤修复和细胞增殖活性调控的影 响. 参考文献 1.WangXD.Chronicalcoholintakeinterfereswith retinoidmetabolismandsignaling.NutrRev,1999; 57(2):5I一59. 2.WielengaVJ,vailderVoortR,TaherTE,SmitL, BeulingEA,vanKrimpenC,SpaargarenM,PalsST. 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