液态氮冷冻保存对异种神经移植后神经再生的影响

液态氮冷冻保存对异种神经移植后神经再生的影响 5 () 江西医学院学报 1996; 36 4: 5, 8A c ta A cad em iae M ed ic inae J iang x i 液态氮冷冻保存对异种神经 Ξ 移植后神经再生的影响 温 蔚 刘德明 丁文龙 ()解剖学教研室 南昌 330006 【提要】 将成年日本大耳兔的胫神经在液态氮中保存4周或40周, 经反复冰冻、融解5次后移植至大白鼠的坐骨神经中。异种神经移植术后8、12、24周可观察到宿主的再生神经纤维从近段 W ista r 坐骨神经越过近端吻合部长入异种移植神经, 继而越过远端吻合部向远段坐骨神经延伸。用体视学 对异种神经移植段再生神经纤维的 、和 测定和比较表明: 异种神经在液态氮中保 ƒA A N A A A N A 存4周和40周后再移植, 不影响宿主神经纤维的再生, 两组之间的再生神经纤维无显著性差别。 关键词: 胫神经ƒ移植 液态氮冷冻移植, 异体 神经再生 中图号: 322- 33R 1. 2 已有文献报道用反复冰冻、融解、, 分为二组, 6只鼠为一组, 分别接受在液态只603 4 辐射或 灌注等方法预先处理 氮中保存4周和40周的兔神经, 经戊巴比妥钠 Co Co n A () 30 ƒ腹腔注射麻醉后, 暴露右侧坐骨 异种移植神经, 能减弱或消除异种神经的抗 m g k g 神经, 于梨状肌下缘4 处切除坐骨神经5 原性, 移植至宿主体内不仅能存活, 而且允许 mm , 将8 长、按上述方法保存和反复冰 mm mm 宿主的再生神经纤维通过并向远段生长、重 冻融解的日本大耳兔胫神经植入缺损部位, 5. 6 新支配靶器官, 再生神经纤维恢复了轴浆 用90无损伤缝合线将鼠坐骨神经的近、远断 ƒ7 流。异种神经的来源广泛, 取材后在液态氮 端与植入的兔神经缝合。植入的异种神经与 宿主的坐骨神经等粗。 中冷冻保存是组织保存的常用方法, 但不同 保存期对异种神经移植后神经纤维的再生是 1. 2 组织学染色方法和观察指标 否有影响, 尚无报道, 值得探讨。接受了在液态氮中保存4周和40 周兔神 经的鼠分别存活8周、12周和24周, 再次麻醉 1 鼠后取出近段坐骨神经及其相连的移植神 材料与方法 经, 移 植 神 经 及 其 相 连 的 远 段 坐 骨 神 经 入 1. 1 神经制备和神经移植手术 10% 福 尔 马 林 固 定, 石 蜡 包 埋 纵 切 片, 体重1.5 的成年日本大耳兔4 只, 戊 k g 法镀银染色。移植神经中段入B ie lschow sk y ( ) 巴 比妥钠 30 ƒ腹腔注射麻醉后取出 m gk g 胫神经入液态氮中分别保存4周和40周。移植 含 2. 5% 戊 二 醛 的 0.1 ƒ磷 酸 缓 冲 液 前从液态氮中取出切成8 长的移植神经m o lL mm ) ( ( ) ( ) 7. 2, 4?固 定, 再 入 含 1% 锇 酸 的 0. 1段, 经反复冰冻 - 30?, 融解 室温5次后pH ) ( 磷酸缓冲液 ƒ备 用。体 重 280, 300 的 大 白 鼠 127. 2, 4 ?后固定 ,m o lL pHg W ista r Ξ 国家自然科学基金资助项目 包埋, 半薄横切片经甲苯胺蓝染色, 8周的密度高。618较Epom 2. 2 在液态氮中保存4周和40周的异种神 经光镜观察。 移植神经横切片显微照相, 用体视学方 移植后再生神经纤维的比较 液态氮中法的多功能测试系统测试异种神经移植段中 保存4周和40周的异种神经移 () 再 生 神 经 纤 维 的 数 面 密 度 , 面 面 密 度 N A 植后的各存活期, 在异种移植神经中段的半() ()和平均截面面积 。体视学所测 ƒA A A A N A 的数据在486 计算机上用 软件处理, 薄横切片上, 可见大量再生的神经纤维, 很多 POM S 各项数据进行 检验或 检验。t f 再生神经纤维聚集在一起, 被神经束膜包绕 形成神经束, 部分再生神经纤维散在分布于 神经束之间。由于甲苯胺蓝染色仅显示呈环 2 结果状的有髓纤维髓鞘, 所以用体视学方法检测 的异种移植神经中段的再生神经纤维均为有 2. 1 异种神经移植后的神经再生 异种神经在液态氮中保存4周和40 周后 髓纤维。用多功能系统测定了再生有髓纤维 () () 的数面密度 , 面面密度 和平均截面 再移植, 术后8周的异种神经较宿主的坐骨神 N A A A ()面积 ƒ。经稍粗, 其它存活期的异种移植神经与宿主 A A N A 的坐骨神经等粗。 异种移植神经在液态氮中保存4周和表1θ()40周后再生有髓纤维的比较 ? x s 异种神经移植术后8周、12 周和24 周, 不 管异种神经在液态氮中保存4周还是40周, 均 保存ƒA A N A N A A A 时间 可观察到宿主近段坐骨神经内的再生神经纤 4周15. 12?3. 50?0. 012?0. 00010. 0520. 003439维越过近端吻合部向异种移植神经段生长, 17. 44?3. 65 0. 042?0. 018 0. 002408?0. 0001 40周 长入异种移植神经段的再生神经纤维穿过远 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 P 端吻合部向远段坐骨神经延伸。再生神经纤 维呈波浪型或直线向前生长。由于近、远端吻 表1显示异种神经在液态氮中保存4周或合部存在少量瘢痕结缔组织使部分再生神经 40 周 后 再 移 植, 宿 主 再 生 有 髓 纤 维 的 、N A纤维通过时呈迂曲状。神经移植术后12 周和 () 、ƒ无显著性差异 > 0. 05。A AA A N A P 24周的长入远段坐骨神经内的再生神经纤维 θ() 表2 异种神经在液态氮中保存4周和40周后再移植, 不同存活期再生有髓纤维的比较 ?x s 保存时间 ( ) N A A A ƒ存活时间 周A A N A P P P 4周40周4周40周4周40周 8 > 0.0 5 > 0.0 5 > 0.0 5 11. 96?1. 0 116. 06?7. 2 70. 059?0. 01 40. 034?0. 01 20. 004933?0. 00210. 002117?0. 0012 15. 30?3. 1 2 17. 02?1. 1 7 0. 043?0. 008 0. 037?0. 001 0. 002810?0. 0011 0. 002174?0. 0012 12 > 00. 5 > 00. 5 > 00. 5 18. 09?3. 5 7 19. 25?1. 3 2 0. 054?0. 013 0. 056?0. 028 0. 002985?0. 0014 0. 002909?0. 0013 24 > 00. 5 > 00. 5 > 00. 5 异种神经在液态氮中保存4周和40周后周围神经缺损造成该神经支配区域功能再移植, 于不同的存活期观察测定再生有髓 , 这在临床很常见, 要使再生神经纤维 的丧失 向远段生长重新支配靶器官, 需要桥接。异种 纤维的 、和 ƒ, 存活8 周、12 周 和N AA A A A N A )( 0105 24 周 的 各 组 之 间 无 显 著 性 差 异 > 神经移植作为神经缺损的桥接物, 由于存在 P () 表2。抗原性而面临免疫排斥反应。一般认为异种 2 神经的抗原性主要存于 细胞, 本Schw an n 3 讨论 实验的反复冰冻、融解预先处理异种神经旨, 低温对化学和物理过产生衰退和老化现象 在杀死 细胞。异种神经移植后神经 Schw an n 程有抑制效应, 细胞的代谢近乎于停滞状态,纤维和细胞裂解成碎片被巨噬细胞吞噬, 而 8 从理论上讲可以在液态氮中长期保存。细胞外的基膜仍保持其完整性, 成 Schw an n (本实验的体视学检测得到组织胚胎学教研室朱清仙 为再生神经纤维向远段生长的通道。本实验 )副教授的帮助, 谨此致谢! 观察到宿主的再生神经纤维不仅能通过近端 吻合口长入异种移植神经, 而且能越过远端 4 参考文献吻合部向远段生长。 丁文龙, 刘德明, 王桂秀, 等. 异种神经移植后的周围神 1 异种组织器官移植的保存十分重要, 异 经再生. 解剖学报, 1992, 23: 230 种神经的保存亦是如此, 以便需要时随时提 O saw d T , Ide C , T o h yam a K. N e rve regene ra t io n 供。细胞和组织离开正常的机体以后, 很快失 2 th ro ugh c ryo t rea ted xeno gen ic ne rve g raf t s. A rch H is2 去生物活性, 如何维持其原来的生物活性是 , 1987, 50: 193to l J ap 体外保存的关键。液态氮超低温保存组织器 60D ing W L , L iu D M , W ang G X , e t a l. E ffec t o f Co ir2 官是常用的有效方法, 液态氮的超低温能急 3 . rad ia t io n o n ne rve regene ra t io n in h e te ro g raf t ne rve骤降低组织器官的温度, 保持其完整的组织 , 1994, 39: 1 398C h in Sc i B u l 结构, 取出复苏后又能恢复组织器官的生物 丁文龙, 刘德明, 王桂秀, 等. 刀豆球蛋白 A 处理异种移 学特性。异种神经在液态氮中不同保存期对 4 植神经对神经再生的影响, 解剖学报, 1995, 26: 7 丁文移植后的神经再生是否有影响, 本研究用体 龙, 刘德明, 王桂秀, 等. 异种神经移植后去神经支 配 骨 视学方法测定和比较表明, 异种神经在 5 骼 肌 运 动 终 极 的 再 形 成, 中 国 临 床 解 剖 学 杂 志, 液态氮中不同时间的保存、即使保存40 周也 1994, 12: 61 60 不影响移植后的神经再生。因为在- 196?的 丁文龙, 刘德明. 辐射异种神经移植后皮肤感觉神 Co ( ) 经末梢的再形成, 江西医学院学报, 1994, 34 2: 4 丁文温度下, 分子运动完全受到抑制, 细胞全部的 6 龙, 刘德明, 温蔚. 异种神经移植后再生神经纤维的 H R P 生理和生化反应过程完全停止, 因此不可能 逆行运输. 解剖学杂志, 1996, 19: 17 7 刘 金 刚, 刘 作 斌. 低 温 医 学. 北 京: 人 民 卫 生 出 版 社, 1993. 8 8 The Ef f ec t of Freez in g Pre serva t ion w ith L iqu id N itrogen on Nerve Regen era t ion in He terograf t Nerve W en W e i L iu D em in g D in g W en lon g (), , , 330006 D ep a rtm en t of A n a tom y J ia n g x i M ed ica l C ol lg eN a n ch a n g A bstra c t , A du lt J ap an e se b ig ea r rab b it’ s t ib ia l n e rvep re se rved in liqu id n it ro gen re sp ec t ive ly fo r 4 40 , w eek s an d w eek sw a s g raf ted in to th e sc ia t ic n e rve o f W ista r ra t b y rep ea ted f reezin g 5 . an d th aw in g fo r t im e sT h e regen e ra t in g n e rve f ib e r s o f th e ho st c ro ssed th e p ro x im a l su2 , tu re in to th e h e te ro g raf t n e rvep a ssed th ro u gh th e d ista l su tu re an d ex ten ded in to th e d ista l . sc ia t ic n e rveT h e regen e ra t in g n e rve f ib e r s o f th e h e te ro g raf t n e rve segm en t w e re m ea su red . b y th e m e tho d o f ste ro scop yT h e re su lt in d ica ted th a t th e h e te ro g raf t n e rve p re se rved in liq2 4 40 u id n it ro gen fo r w eek s o r w eek s h ad no effec t o n n e rve regen e ra t io n o f th e ho st n e rve f ib e r, no r w a s th e re an y sign if ican t d iffe ren ce b e tw een th e regen e ra t in g n e rve f ib e r s o f th e .tw o g ro up s Key word s: tran sp lan ta t ion , he tero logous; t ib ia l n ervetran sp lan ta t ion; ƒ f reez in g n erve regen era t ion; l iqu id n itrogen; 32例小儿医院感染原因调查分析 李国林 曾国强 ()第二附属医院儿科 南昌 330006 () 医 院 感 染 , 是 指 患 者 小儿时期免疫功能发育不完善, 机体抵抗力差,N o so com ia l Infec t io nN I易罹患感染性疾病, 是院内感染的高危人群。本组资 在入院时尚未发生, 也非处于潜伏期, 而是在住院后料表明, 我院儿科病房 高达9. 87% , 高于我国医 N I ( ) 72 以上初次发生的感染。我国医院感染率平均 h 院平均感染率。通过感染因素调查, 我们分析主要有 为8. 4% , 我们调查了1995年3 月, 12月儿科住院病 ( ) 以 下几方面原因: 1小儿时期免疫功能不健全, 皮 人, 发现 的发生率为9. 87% , 现对其感染情况及 N I 肤粘膜屏障功能差, 易患呼吸道及胃肠道感染, 本文 原因分析如下: 上呼吸道感染率占71. 9% , 与有关文献相符。这可能 1 临床资料是本科为综合性病房, 病种混杂, 引起交叉感染; 陪 1. 1 对象护及探视人员较多, 病室通风不良, 导致空气污染; 资料来源于我院医院感染登记表, 1995年3月, ( ) 2本组病例中长期使用激素、免疫抑制剂的患儿医 12月儿科住院病共324例, 住院后发生 者32例, 占N I 院感染占的比例亦较大, 此类患儿免疫功能低下引 ( ) 9. 87% 。男25例, 女7 例。其中婴幼儿12例, 学龄前儿 起 菌群失调, 导致自身感染发病; 3营养性疾病及 营养状况差的患儿医院感染率亦较高, 营养差, 机体 童10例, 学龄儿童10例。 免疫功能下降, 易致感染。 1. 2 患儿的原发病N I ( ) 我们认为, 对 的控制重在预防。1加强儿科 N I 感染性疾病6 例, 有肺炎、肠炎、化脓性脑膜炎、 病房科学管理, 严格探视、陪伴制度, 合理使用抗生 颈淋巴结核、肾盂肾炎; 非感染性疾病26例, 疾病分 () 素。2普及健康教育, 对患儿家属进行营养、喂养指 布为: 肾炎、再障、癫痫、肾病综合征、脑性瘫痪、营养 不良、类风湿病, 格林巴利综合征, 糖尿病, 维生素 D ( ) 导, 增强患儿抵抗力。3对免疫功能低下及接受免 缺乏性佝偻病, 原发性血小板减少性紫癜, 十二指肠 疫抑制剂治疗的患儿, 应设置隔离消毒病房, 实施保球部溃疡等。 () 护性隔离及环境消毒。4对长期使用免疫抑制剂的 1. 3 患儿感染的部位 患 儿 应 用 免 疫 调 节 剂, 增 强 免 疫 功 能, 预 防 院 内 感 上呼吸道占71. 9% , 胃肠道占15. 6% , 下呼吸道 染。 占6. 3% , 泌尿道占6. 3% 。 2 讨论