诺氟沙星胶囊微生物学验证

诺氟沙星胶囊微生物学验证 药品微生物限度检查法 验证试验报告 验证单位:********有限公司 验证项目:诺氟沙星胶囊细菌、霉菌和酵母菌计数方法和控制菌检查 方法的验证。 验证依据:1、中国药典2005版二部 2、国药典发[2005]98号文 报告日期:****年**月**日 验证用菌种:验证用的菌种为传代次数不超过五代的菌株斜面培养物。 大肠埃希菌 (Escherichia coli)[CMCC (B) 44 102] 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC (B) 26 003] 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)[CMCC (B) 63 501] 白色念珠菌 (Candida albicans)[CMCC (F) 98 001] 验证方法:中国药典2005版二部附录? J 验证要求:1、细菌、霉菌和酵母菌计数方法的验证试验中各试验中各试验菌的 回收率均不低于70%。 2、各控制菌检查方法的验证试验中，阴性菌对照组不得检出对照菌， 试验组应检出试验菌。 验证结果:1、计数方法(细菌计数、酵母菌计数)各试验菌的回收率 ________不_____低于70%。 2、各控制菌检验方法验证试验中，阴性菌对照组____未_____检出对 照菌，试验组____检出_____试验菌。 检验方法:供试液制备:取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液至 置于45?水浴溶解，作为1:10供试液;取1:10供试液，100ml， 离心5分钟(500转/分)取上清液备用。 1、酵母菌计数:常规法 2、细菌、控制菌的检查均可采用薄膜过滤联合培养基加入硫酸锰的 方法，冲洗300ml。 诺氟沙星胶囊微生物限度检查法验证试验 检品名称:诺氟沙星胶囊 批 号:******** 生产单位:********有限公司 试验日期:****年**月**日至****年**月**日 1、方法: 1.1检查方法:依据中国药典(2005版)二部附录? J 1.2验证方法:依据中国药典(2005版)二部附录? J及国药典发[2005] 98号 2、计数方法的验证: 2.1菌种:验证用的菌种为第*代菌株斜面培养物。 大肠埃希菌 (Escherichia coli)[CMCC (B) 44 102] 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC (B) 26 003] 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)[CMCC (B) 63 501] 白色念珠菌 (Candida albicans)[CMCC (F) 98 001] 2.2菌液制备:接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，35?培养24小时。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，27?培养24小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50,100CFU的菌悬液备用。 2.3供试液的制备:供试液制备:取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液至100ml，置于45?水浴溶解，作为1:10供试液;取1:10供试液，离心5分钟(500转/分)取上清液备用。 2.4常规法回收率测定: 2.4.1试验组:取1ml 1:10供试液、1ml含菌数为50,100CFU的菌悬液，分别注入平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。结果见。 2.4.2菌液组:取试验菌液各1ml,分别注入平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加的菌数。结果见表。 2.4.3供试品对照组:取1:10供试液各1ml，分别加入2个平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。结果见表。 2.4.4结果统计 验证试验结果 菌落计数 回收菌种明称 平皿 率% 试验组 菌液组 供试品对照组 1 0 60 0 大肠埃希菌 2 0 60 0 0 平均值 0 60 0 1 0 63 0 金黄色葡萄球菌 2 0 63 0 0 平均值 0 63 0 1 0 52 0 枯草芽孢杆菌 2 0 52 0 0 平均值 0 52 0 1 80 80 0 白色念珠菌 2 80 80 0 100 平均值 80 80 0 1 65 65 0 黑曲霉 2 65 65 0 100 平均值 65 65 0 结论:由上表结果可知，白色念珠菌试验菌的回收率均高于 70% ，说明可以用常规法，进行该供试品的霉菌、酵母菌计数;对其他3种细菌有很强的抑菌作用。 2.5薄膜过滤法回收率测定: 2.5.1试验组:取1ml 1:10供试液、1ml含菌数为50,100CFU的菌悬液，分别注入过滤器中，用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗，将滤膜贴于注有营养琼脂培养基(含硫酸锰)的平皿中，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。结果见表。 2.5.2菌液组:取试验菌液各1ml, 分别注入过滤器中，用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗，将滤膜贴于注有营养琼脂培养基(含硫酸锰)的平皿中， 每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加的菌数。结果见表。 2.5.3供试品对照组:取1:10供试液各1ml，分别注入过滤器中，用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗，将滤膜贴于注有营养琼脂培养基(含硫酸锰)的平皿中，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。结果见表。 2.5.4结果统计 验证试验结果 菌落计数 回收菌种明称 平皿 率% 试验组 菌液组 供试品对照组 1 60 60 0 大肠埃希菌 2 60 60 0 100 平均值 60 60 0 1 63 63 0 金黄色葡萄球菌 2 63 63 0 100 平均值 63 63 0 1 52 52 0 枯草芽孢杆菌 2 52 52 0 100 平均值 52 52 0 结论:由上表结果可知，各试验菌的回收率均高于 70% ，说明可以用薄膜过滤联合培养基加入硫酸锰的方法，进行该供试品的细菌计数。 3.控制菌检查方法的验证: 大肠埃希菌检查方法的验证 3.1菌种:验证用的菌种为第*代菌株斜面培养物。 大肠埃希菌 (Escherichia coli)[CMCC (B) 44 102] 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC (B) 26 003] 3.2菌液制备:接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，35?培养24小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10,100CFU的菌悬液备用。 3.3供试液的制备:供试液制备:取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，离心5分钟(500转/分)取上清液为1:10供试液。 3.4 大肠埃希菌检查方法的验证 3.4.1试验组:取1:10供试液10ml及10,100CFU大肠埃希菌，分别注入过滤器中，用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗，将滤膜放入100ml BL增菌培养基(含硫酸锰)中，依照大肠埃希菌检查方法进行检查。 3.4.2阴性菌对照组:取1:10供试液10ml及10,100CFU金黄色葡萄球菌，分别注入过滤器中，用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗，将滤膜放入100ml BL增菌培养基(含硫酸锰)中，依照大肠埃希菌检查方法进行检查。 3.4.3结果:见下表 大肠埃希菌检查方法的验证 阴性菌对照组 试验组 (金黄色葡萄球菌) 无变化 BL(含硫酸锰) 变浑浊 EMB(含硫酸锰) + 无菌生长 大肠埃希菌加菌量:60 金黄色葡萄球菌加菌量:63 结论:由上表结果可知，采用薄膜过滤法检查大肠埃希菌时，试验组 检出 大肠埃希菌，阴性对照组 未检出 金黄色葡萄球菌。故该供试品大肠埃希菌的检查可采用薄膜过滤联合培养基加入硫酸锰的方法。 总结论: 由上结果可知，进行该供试品微生物限度检出时，供试液制备为:取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液至100ml，置于45?水浴溶解，作为1:10供试液;取1:10供试液，离心5分钟(500转/分)取上清液备用。 1、霉菌、酵母菌计数:常规法 2、细菌、控制菌的检查均可采用薄膜过滤联合培养基加入硫酸锰的 方法，冲洗300ml。 注:100mlBL增菌培养基含1mol/L硫酸锰溶液5ml;20ml营养琼脂培养基含1mol/L硫酸锰溶液5ml。