荆半夏的悬浮培养

荆半夏的悬浮培养 生物工程学院实验 姓 名:谢应松 学 号:2012307040202 专 业:生物制药技术 课程名称:《植物细胞学》 指导教师: 李先良 成 绩: 实验目:荆半夏的悬浮培养 ? 实验目的 1、 掌握悬浮培养技术 2、掌握无菌植物的获得步骤 ?实验仪器与试剂 实验器材:超净工作台、光照培养箱、刻度烧杯(1000ml)、小烧 杯若干、量筒(1000ml、50ml)、容量瓶(500mL 、250mL)、棕色 试剂瓶(500mL、100mL)、药勺、玻棒、洗耳球、洗瓶、电炉、 不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、无菌吸水纸、一次性手套、 记号笔、标签纸，滴管、电子天平(感量为0.0001g)、一般天平 (感量为0.1g)、高压灭菌锅、pH计(pH试纸)，三角烧瓶(100mL)、 称量纸、 试 剂: 荆半夏、NAA、2,4-D、6-BA、琼脂、蔗糖 ?实验原理 半夏是一种重要的中药材，具有镇痛、抗生育、抗肿癌、提 高记忆之活性，具有很好的发展前景。生物碱在半夏的药理活性 中具有重要的作用。半夏生物碱的积累和提取显得至关重要，细 胞悬浮培养是一个好的选择。 ?实验步骤 1、 无菌外植体的获得 从田间采挖直径0.5,1.0cm的半夏块茎,在流水中冲洗干 净,剥去皮,置于超净工作台上用体积分数70%酒精表面消毒 30s,再用体积分数0.1%HgCl2溶液消毒15min,无菌水冲洗6,7 次,切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块,然后将其接入含 0.2mg/L2,42D和3.0mg/L62BA的MS培养基中,于光照培养箱中, 培养1,2个月后诱导形成半夏植株。 2、 培养基的配制: (1)MS+0.2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA; (2)MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA; (3)MS+0.2mg/LNAA+2.0mg/L6-BA; (4)MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA; (5)MS+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA; (6)MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA。 3、 接种 接种完后，贴上标签，注明姓名、接种日期、培养基名称和培养 名称。整理、清洁超净工作台台面。 4、 培养 ?实验结论 根据小块茎在固体培养基上的增殖情况,选用添加 0.6mg/L6-BA的1/2MS液体培养基进行小块茎的液体悬浮培养。在此 培养基中,未分化的小块茎不断生长出许多二级、三级小块茎。在一个培养周期内,小块茎的生长进程，转入液体培养基的第1周,小块茎的生长量几乎没有变化,此时为培养的延滞期;到培养的第2周,小块茎生长量有少量增加,从刚开始接种的30.00g/L增加到了30.38g/L;第2周以后,小块茎进入了快速生长期,到第5周末,生长量已达到120.56g/L,是初始接种的4.02倍;培养至第6周,小块茎增长变缓,而此时其颜色已开始变褐,培养基浑浊,表明小块茎已进入生长衰退期。