肿瘤坏死因子

肿瘤坏死因子 河北医科大学 ，, ,,, ,, 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生弥您新虢形绛 二级学院领导盖章: 嚼:,(一蒙? 年 月 日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名:孑—星 导师签章:拍与套 年 月 日 —————————————————————————————————一—— , ,，,,, , ，, ， ,, ,,, ， , ，,,,,, ， ， ，, ， ,, ,, , ,,, 目 录中文摘 要………………………………………………………………………,英文摘要………………, ,, , , , , , ,………………………………??, , , , , , , , , , ,, ,…,研究论文肿瘤坏死因子一,及肿瘤特异性生长因子在淋巴结反应性增生 疾病中的表达及意义 前言??????…??????????“???“… 一??“?“((?”“”“”…”””一一””?, 月,舌“”“…一””””““““…“”“““”“”““…”””…“””。 , , ,”一((, ”一”， 材料与方, , 法………………………………………………………………, 结果??????…??????一一??“??…?????????????”?“一”??“??“””“一“…一”一一”, 附 图……………………………………………………………………, , 附表…………………………………………………………………一?,, 讨论”一“一一…””一“”一……””…((”“一”一一””一”…”“一“一一“?,, 结 论??????????????????????????…????……????????????“一“??一??一“”“一“”?,, 参考文 献………………………………………………………………,,综, 苤???????????????????????????????????????…????“???一?“?“一”??一??”((一“……?,,致 谢…?,?????????????????????????????????……?……??????“???一……”,一“一“一?,,个人简历……………………………………………………………………,, 中文摘要 肿瘤坏死因子(？及肿瘤特异性生长因子在淋巴结反应性增 生疾病中的表达及意义 摘 要 目的:本研究通过检测肿瘤坏死因子(,,(,,,,, ,,;,,,,, ,,;,,,,,)和肿瘤特异性生长因子(,,,,, ,,,;,,,; ,,,,,, ,,;,,,)在淋巴结反应性增生中的表达情况，探讨其在此类疾病中的辅助诊断价值，为临床能早期做出正确诊断提供实验依据。 :选择由,,,,年,月至,,,,年,月在沧州市中心医院口腔颌面外科住院的经病理确诊为淋巴结反应性增生患者,,例标本组织蜡块，对照组选择同期住院的颌面部恶性肿瘤行颈部淋巴结清扫术后的阴性和阳性淋巴结的标本组织蜡块各,,例。采用免疫组织化学方法对实验组与对照组石蜡切片行免疫组织化学染色，应用，,,,,(,,, ,,,,,(,专业图像分析系统测量染色切片中阳性产物对应的平均光密度值，结合对免疫组化染色强度的，衡量肿瘤坏死因子一,【和肿瘤特异性生长因子在淋巴结反应性增生疾病中的表达情况。 结果: ,肿瘤坏死因子(,【和肿 瘤特异性生长因子表达皆定位于细胞胞浆内; ,肿瘤坏死因子((，,在反应性增生淋巴结中的阳性表达明显低于在颌面部恶性肿瘤颈部淋巴结清扫术后阳性淋巴结中的表达(尸,,(,,,)，与颌面部恶性肿瘤颈部淋巴结清扫术后阴性淋巴结中的阳性表达无明显差别(尸,,(,,)。 ,肿瘤特异性生长因子在反应性增生淋巴结中的阳性表达明显低于在颌面部恶性肿瘤颈部淋巴结清扫术后阳性淋巴结中的表达(,,,(,,,)，与颌面部恶性肿瘤颈部淋巴结清扫术后阴性淋巴结中的阳性表达无明显差别(尸,,(,,)。 结论:本研究通过检测肿瘤坏死因子(,和肿瘤特异性生长因子在淋巴结反应性增生中的表达情况，探讨其在此类疾病中的辅助诊断价值，得出以下结论:两种细胞因子的检测可用于肿大淋巴结的辅助鉴别诊断，为临床能早期做出正确诊断提供实验依据。如两种细胞因子均出现强阳性表 中文摘要达，可高度提示恶性肿瘤可能。 关键词:肿瘤坏死因子(仅;肿瘤特异性生长因子;淋巴结反应性增生;免疫组化 英文摘要 ,, „ 一 „ „一 ‟ 。,‟,,,, ,,;,,,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,;,,, ,,,, ,,;,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,, ? , ? ?, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,;,,;, ,,,,,,,, ,,, ,;,,,,:，, ,,,, ,,,,,‟,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,—;【,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,;,,,, ,,;,,,，,, ,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,;,,;, ,,, ,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,;,( ,,,,,,,:,, ,,,,,,,, ,,,;,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,;,,, ,,,,,,，,,,,,;,,,,,,，,,,, ,,,,,,, ,, ;,,,,,, ,,,,,(,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,，,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,;, ,,,,(,,,,,,,,,,,,,,;,,,,;,, ,,,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,; ,,,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ;,,,,,, ,,,,,(，,,,,—,,, ,,,,,(,(，,,)，,,, ,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ？,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,;,, ,,,,,,，,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,？,,,,,,,,,,, ,, ,,,一伍,,, ,,,, ,,,,,,,,,,( ,,,,,,,: , ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,一,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,,;,,, ,, ,,,,,,,;,,,,,,( , ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,—,, ,,,,, ,,,,,(,,,(,, ,)(,,, ,,,,,,,,;, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,, ,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,—,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,;,,;,(,,,(,,)( , ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,一叩,, ,,, ,,,,, ,,,,,(,,,(,, ,)，,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,, ,, , 英文摘要,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,, ,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,(,,,(,,)( ,,,,,, ,,,,— ;,,,,,,,:,,, ,,, ;,,,,,,,, ,,, ,, ,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,(,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,, ,,, ;,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,( ,,, ,,,,,:,,,,, ,,;,,,,, ,,;,,,—,;,,,,, ,,,;,,,; ,,,,,, ,,;,,,;,,,,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,;，,,,,,,,,,,;,,,,,,,, , 研究论文 肿瘤坏死因子。,及肿瘤特异性生长因子在淋巴结反应性增 生疾病中的表达及意义 (些～刍 刖 吾 淋巴结反应性增生是一个病理诊断名词，也是一类疾病的统称。各种损伤和刺激常引起淋巴结内的淋巴细胞和组织细胞反应性增生，使淋巴结肿大，称为淋巴结反应性增生。很多原因如细菌、病原微生物、物理、化学、环境污染等均可引起淋巴结的反应性增生。临床上，淋巴结反应性增生比较多见，为良性病变，但肿大的淋巴结无论从肉眼观或是镜下观察都容易与淋巴结的肿瘤相混淆，尤其是在颌面颈部，因其临床表现与颌面颈部的肿瘤相似，常常会被误诊为肿瘤而收入院手术治疗，因此，对此类疾病的鉴别诊断就显得十分重要，如果我们能对早期肿大、增生的淋巴结进行细致的研究，将大大提高我们对此类疾病的鉴别能力。 淋巴结各种成份的增生性变化实际上是对已知和未知因素刺激所起的反应。其中有些与炎症反应有关，而有些则涉及免疫反应，有时豫者同时存在口刺激,细胞的抗原物质主要引起淋巴滤泡增生增大，生发中心扩大增生,束,,激,细胞的抗原物质主要引起滤泡旁区淋巴细胞增生。有些抗原物质则主 要引起淋巴窦内的组织细胞增生。一个相似的镜下图像可由许多种原因引起，但有些病原因子却可以产生具有特点的镜下图像，女,,,,,,,,,,病，,,,,;,,淋巴结炎，猫抓病，恶性淋巴瘤等，初期都是表现在淋巴结肿大上，但是病理分型确存在着差异，其治疗和预后差别很大，因此，对淋巴结反应性增生早期做出正确诊断和鉴别诊断对临床治疗方法的选择和预后有着十分重要的意义。 肿瘤坏死因子(,,(,,,,, ,,;,,,,, ,,;,,,,,,,,,，,,,(,)是一种分子量为,,(,,,,的非糖基化蛋白，既有抗肿瘤活性，又能介导炎性反应，增加血管通透性，在广泛的微血管系统中起作用，诱发血管内皮细胞的表型改变为炎症型。在炎症反应和组织损伤中发挥重要的生理和病理作用。在基础研究和临床研究中，常把肿瘤坏死因子(,【作为炎性细胞因子加以研究，其在许多炎症性疾病中呈阳性表达，故可作为炎性疾病的观察指标之一。肿瘤特异性生长因子(,,,,, ,,,;,,,; ,,,,,, ,,;,,,，,,,,)是由肿瘤 研究论文细胞产生的一种特殊物质，在恶性肿瘤形成和生长时，它能促进肿瘤的生长及周边毛细血管的大量增生，正因为这一物质的作用，肿瘤组织得到了更多的血液供应，致使其疯狂的快速增长。因此，,,,,被认为是一种新的肿瘤标志物而用于临床检测。其主要特点是:?是一种独立的物质，属于新的琢霰曛疚铮 胍酝 谋曛疚镂藿徊娣从Γ ?胫琢錾 こ收 喙兀虎谑且恢侄裥灾琢龉灿械奈镏剩 粲诠闫仔灾琢霰曛疚铮虎墼诙裥灾琢黾觳庵校 裕樱牵圃缬谌魏伪曛疚锍鱿郑裕樱牵萍觳猓 视糜谥琢龅脑缙谡锒希 视忻舾行愿叩奶氐恪,俅采希 粤菩Ч鄄臁?巳浩詹橐灿薪细叩挠τ眉壑怠?我们拟对肿瘤坏死因子一,【及肿瘤特异性生长因子在淋巴结反应性增生疾病中的表达进行研究，以鉴别肿大增生的淋巴结是良性病变还是恶性肿瘤，为临床采取正确的治疗方法提供理论依据。通过免疫组化方法检测淋巴结反应性增生标本中与颌面部恶性肿瘤行颈部淋巴结清扫术后的阴性和阳性淋巴结的标本中,,,—,与,,,,的表达情况，应用专业图像分析系统，,,,,(,,, ,,,, ,(,(，,,,(,)测量两者阳性表达的平均光密度值(，,,,,,,)，结合对免疫组化染色强度评价，分析,,,(,与,,,,在肿大的淋巴结中表达的意义。 材料与方法, 研究材料,(,研究对象:选择,,,,(,,,,年在我院口腔颌面外科住院的经病理确诊为淋巴结反应性增生的患者,,例，平均年龄在,,(,岁;对照组选择同期住院的颌面部恶性肿瘤行颈部淋巴结清扫术后的阴性和阳性淋巴结的患者各,,例，平均年龄分别为,,(,岁和,,(,岁。,(,主要仪器及设备 美康系列石蜡切片机 国产电热恒温干燥箱 日本,,,,,,,光学显微镜 北航全自动病理成像分析系统(免疫组化染色后切片摄像) ，,,,,(,,, ,,,,,(,专业图像分析系统 研究论文,(,主要试剂 一抗,)兔抗人,,,(,单克隆抗体 够自:上海蓝基生物科技有限公司 规格:,(,,,浓缩液 编号:,,(,,,,, 工作浓度:,:,,, ,)兔抗人,,,,单克隆抗体 够自:上海蓝基生物科技有限公司 规格:,(,,,浓缩液 工作浓度:,:,,, 二抗兔二步法免疫组化检测试剂盒 购自:上海蓝基生物科技有限公司 规格:,,,即用液 保存:开封后(,?保存 内容:,内源性过氧化物酶阻断剂 ,二抗一,,,多聚体 ,,,,, ,辣根酶标记羊抗兔多聚体 ,,, ,,,购自:上海蓝基生物科技有限公司 保存:即用即配(,,, ,,,溶于,,,,,,,缓冲液中，再加入 ,(,,,浓度为,,,,, ,，过滤去除沉淀物后即用)。,实验方法,(,切片制备,(,(,玻片预处理重铬酸钾硫酸溶液浸泡,,,，去除多余蛋白酶等酶类，取出后充分用自来水冲洗，用蒸馏水洗三遍，后置于,,?烤箱中烤干。把经过烘烤的玻片用,,,一氨丙基(,(乙氧基甲硅烷(,,,,)丙酮液(,:,,)浸泡,,,,，然后用丙酮沈去多余的,,,,，并用蒸馏水清洗玻片,,,次，,,。,烤干玻片，在干燥器皿中防污保存待用。,(,(,光镜下重新观察选取病例相对应的,,染色切片，收集相应石蜡包埋组织块，应用美康石蜡切片机,,(,,连续切片室温保存备用。,(,免疫组化染色步骤采用免疫组化二步法，与传统的三步法相比，此法具有简单、快速、敏感等特点，系统中不再使用生物素，可避免由于内源 研究论文性生物素造成的背景染色。染色过程中以已知,,,,,,,,与,,,(,均阳性表达的乳腺癌组织切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液(,,,)代替一抗进行染色切片，作为阴性对照。,)脱蜡、水化; ,(组织切片置于二甲苯中浸泡,,分钟，更换二甲苯后再浸泡,,分钟; ,(无水乙醇中浸泡,分钟; ;(,,,乙醇中浸泡,分钟; ,(,,,乙醇中浸泡,分钟;,),,,洗,次各,分钟;,)滴加,,,,,,，室温静置,,分钟;,),,,洗,次各,分钟;,)抗原修复:将切片放入盛有枸橼酸盐缓冲液(工作液,(,,,枸橼酸钠缓冲溶液(,,,(,))的容器中，微波炉内加热使容器内液体温度保持在,,?”,,?之间并持续,,,,,分钟;,),,,洗,次各,分钟;,)滴加,,,,正常山羊血清封闭液，室温,,分钟，甩去多余液体;,)滴加，抗,,,,，室温静置,,,,,后，,?过夜;,)由,。,冰箱内取出切片后室温静置,,,,,,,,),,,洗,次各,分钟;, ,)滴加，，抗,,,,，室温静置,,,,,,,,),,,洗,次各,分钟;,,)每张切片,,,,,,新配制,,,溶液显色,,,,分钟，在显微镜下观察染色程度;(在显色部位形成不溶性褐色沉淀，与组织对比清晰，定位清晰。) (,,)自来水冲洗,分钟;, ,)苏木精复染,分钟;,,)自来水冲洗,,,,,分钟;,,)脱水、透明; ,(,,,乙醇,,,, ,(,,,乙醇,,,, 研究论文 ;(,,,,乙醇， ,,,, ,(,,,,乙醇，， ,,,, ,二甲苯， , ,,,, ,(,,甲苯，， ,,,,,, ,)封片、镜检。 ,(滴中性树胶湿封 ,(盖盖玻片，显微镜下观察,(,免疫组化染色切片观察显微镜下盲法观察整张免疫组化染色(避免选取组织边缘部位),个高倍镜(,,,,倍)视野，置于病理成像系统下采集染色后组织切片图像(该系统由同一人采用统一条件操作)。,(,免疫组织化学染色结果判定,,,(,与,,,,均以细胞浆内出现棕黄色或褐色颗粒为判断;根据阳性细胞显色深浅分级:不显色或显色不清为阴性(一);浅黄色为弱阳性(，);棕黄色为中度阳性(，，);深褐色为强阳性(，十，)。,(, ，,,,,(,,, ,,,,,(,专业图像分析系统下测量阳性细胞平均光密度值(，,,,,,,)，数据保存以备统计学分析。,统计学方法，,,,,—,,, ,,,, ,(,测量所得数据均以乏土,表示，采用,,,, ,,(,统计软件包对数据进行统计分析，两样本均数比较用,检验;等级资料间比较采用矿检验;检验水准均为,,,,(,,。 结 果, ,,,(,与,,,,表达组织细胞学定位观察免疫组化切片，,,,(,与,,,,主要表达于细胞浆内。如下图所示: (, ,,,(,表达,(, ,,,(,在实验组(反应性增生的淋巴结)与对照组(颌面部恶性肿瘤行 颈部淋巴结清扫术后阳性淋巴结)中的表达,,,(,在实验组中表达，,,,,,,为,(,,,士,(,,,，明显低于在对照组中表达(,,,,(,,,， ,,,(,,,)。,(, ,,,(,在实验组(反应性增生的淋巴结)与对照组(颌面部恶性肿瘤行颈部淋巴结清扫术后阴性淋巴结)中的表达,,,(,在实验组中表达 研究论文，,,,,,,为,(,,, ,,,(,,,，与对照组中表达的差异无统计学意义(户,(,,,，,,,(,,)。, ,,,,表达,(, ,,,,在实验组(反应性增生的淋巴结)与对照组(颌面部恶性肿瘤行颈部淋巴结清扫术后阳性淋巴结)中的表达根据测得平均光密度值分析,,,,在两组间表达情况，实验组中，,,,,,,为,(,, , ,,,(,,,，明显低于对照组(,,,(,,,，,,,(,,,)。进一步对两组中不同强度,,,,阳性表达的频数分布进行比较，,,,,在实验组中主要为弱阳性或阴性表达，在对照组中表达主要为中度阳性表，少部分呈强阳性表达，两组频数分布差别有统计学意义(,,,,,(,,,，尸,,(,,,)。,(, ,,,,在实验组(反应性增生的淋巴结)与对照组(颌面部恶性肿瘤行颈部淋巴结清扫术后阴性淋巴结)中的表达,,,,在实验组中表达，,,,,,,,为,(,,, ,,,(,,,，与对照组中表达的差异无统计学意义(户,(,,,，,,,(,,)。 进一步对两组中,,,,不同强度阳性表达的频数分布比较，两者无明显统计学差异(尸,,(,,)。 研究论文 附 图(,,,(, ,,,),,,,,,,, ,,,, —, ,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, , ,,,,, ,,,, 鼠 黪:。釜。,,盘私, 。:锈砖一茹》一:。， “:?, ;,，,,磊敷麓:，《:么;,;,忽,:?,，,荔旒,，;蘸 (,,,(, ,, ,),,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,—, ,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,, 研究论文 ,,,,(,,,(, ,,,),,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,—, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,;, ,,,,,;,,,, ,, 研究论文(,,,(, ,,,),,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,—, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,,;, ,,,,,;,,,, (,椋纾 ?,,,),,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,—, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,;, ,,,,,;,,,, ,, 研究论文 ,, ,,,, ,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,;季,,,。: ?乃‟，;，。。:;务，,:鼍?,?, 鼍;,警妒‟:锄,,锈 ,, ,,,;,,,, ,(,,,(, ,,,),,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,, 研究论文(,,,(, ,,,),,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,,;, ,,,,,;,,,, ,,,, (,,,(, , ,,,),,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,;, ,, ,,,;,,,, ,, 研究论文 (,,,(, , ,,,),,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,;, ,,,,,;,,,, (,,,(, , ,, ,),,,,,,,, , ,,,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,, , ,,,,, ,,;, ,,,,,;,,,,.