【doc】高效液相色谱法测定小儿克感敏颗粒中4种有效成分

【doc】高效液相色谱法测定小儿克感敏颗粒中4种有效成分 高效液相色谱法测定小儿克感敏颗粒中4种 有效成分 ? 624?药物分析杂志ChinJPharmAnal2004,24(6) 高效液相色谱法测定小儿克感敏颗粒中4种有效成分 王燕桓傅承光叶菊花封利梅周建科 (1.河北大学理化分析研究中心保定071002;2.河北长天药业有限公司保定 071000) 摘要目的:用反相高效液相色谱法测定d,JL克感敏颗粒中氨基比林,咖啡因,马来 酸氯苯那敏,非那西丁4种有效成分的含 量.:采用LUNAC(250mmx4.6mm,5m)色谱柱,流动相为甲醇一乙腈一 0.05mol?L磷酸二氢铵(内加0.1%三 乙胺,磷酸调pH=2.7)(90:210:700),流速1mL?min,,波长为261nm.结果:测得 上述4种有效成分RSD(n=5)分 别为:0.9%,0.9%,0.5%,0.5%;平均回收率(n=3)分别为:100.5%,100.1%,99.5%,99.0%.结论:本研究建立了一种快 速,准确,灵敏的HPLC测定d,JL克感敏颗粒中4种主要成分的方法. 关键词HPLCd,JL克感敏颗粒氨基比林咖啡因马来酸氯苯那敏非那西丁 I-~LCDeterminationofFourActiveComponentsinXiaoerKeganminGranules WANGYan—huan,FUCheng—guang,YEJu—hua,FENGLi—meiandZHOUJian—ke (1.ResearchCenterofPhysicalandChemicalAnalysis,ttebeiUniversity,eo~t(ng071002; TianPharmaceudcMCompanyLtd.,Baoding071000) 2.HebeiChang— AbstractObjective:AnHPLCmethodwasestablishedforthedeterminationofaminopyrine, caffeine,chlorphena— minemaleate,phenacetininXiaoerKeganmingranulessimultaneously.Method:Thechrom atographicconditions wereasfollows:LUNAC18(250mmx4.6mm,5trm)chromatographiccolumn,methanol— acetonitrile—ammonium dihydrogenphosphate0.05mol?L(90:210:700)andadded0.1%triethylamineasmobilepha seandpHadjus— tedat2.7withphosphericacid.TheflowrateofmobilephaseWas1mL?min,.Thedetective wavelengthWas261 nm.Results:TheresultswereobtainedthattheRSD(rt=5)andaveragerecoveries(rt=3)offou rdrugswere 0.9%(100.5%),0.9%(100.1%),0.5%(99.5%)and0.5%(99.O%)respectively.Conclusion: Aspecific, sensitive,simpleandreproducibleHPLCmethodWasdevelopedforthedeterminationofthef oursubstancesinXiao— erKeganmingranules. KeywordsHPLC,XiaoerKeganmingranules,amidopyriBe,caffeine,chlorphenaminemal eate,phenacetin 小儿克感敏颗粒为氨基比林,咖啡因,马来酸氯 苯那敏,非那西丁等组成的复方制剂,具有解热镇痛 的作用,临床用于治疗感冒,发烧,头痛,神经痛及风 湿痛等.用高效液相色谱法测定此4种物质中2种 或3种组分在相关药物中含量的报道?-4并不少 见,目前,测定小儿克感敏颗粒中4种有效成分的 HPLC方法尚无报道.本文的高效液相色谱法,可 在同一色谱条件下测定该4种物质,方法简便,快 速,准确,可用于该药品的质量检测,结果令人满意. 1仪器与试药 日本ShimadzuLC一6A型高效液相色谱仪, SPD一6AV紫外/可见分光光度检测器,7125手动六 通进样阀,日本岛津CR一3A数据处理机. 氨基比林,咖啡因,马来酸氯苯那敏,非那西丁 对照品由中国药品生物制品检定所提供,甲醇,乙腈 为色谱纯,水为三次蒸馏水,其他试剂均为分析纯. 2色谱条件 色谱柱:LUNAC】8(250mmx4.6mm,5m), 流动相:甲醇一乙腈一0.05mol?L磷酸二氢铵 (含0.1%三乙胺,磷酸调pH=2.7)(90:210:700), 检测波长:261nm,流速:1mL?min,,柱温:室温. 在上述色谱条件下马来酸,氨基比林,咖啡因, 氯苯那敏,非那西丁对照品的保留时间分别为:2.3, 3.0,3.8,13.7,16.0min,色谱图见图1. 3线性关系 精密称取氨基比林12.49mg,咖啡因3.75mg, 马来酸氯苯那敏12.50mg,非那西丁18.76mg于 100mL量瓶,用流动相溶解并稀释至刻度,制成对 照品储备液.精密量取此溶液1.0,2.0,4.0,8.0, 12.0,16.0mL,分别置50mL量瓶中,用流动相稀释 至刻度,制成系列溶液.依次进样1OL,记录峰面 积,以峰面积l,为纵坐标,相应浓度(trg?mL) 药物分析杂志ChinJPharmAnal2004,24(6)?625? 图1各组分标准品色谱图 Fig1Thechromatogranaofthefourstandardcomponents 1.马来酸(maleicacid)2.氨基比林(amidopyrine) 3.咖啡因(caffeine)4.氯苯那敏(chlorphenamine) 5.非那西丁(phenacetin) 为横坐标,线性回归,氨基比林,咖啡因,马来酸氯苯 那敏,非那西丁的线性回归方程分别为: l,=一1.713X10+6.159X10Xr=0.9998 l,=一1.287X10+5.774X10Xr=0.9992 l,=一1.417X10+2.595X10Xr=0.9995 l,=一6.292X10+8.016X10Xr=0.9997 线性范围分别为2.5—40,0.75—12,2.5—40,3.8 — 6o?mL,. 4精密度试验 取线性关系测定中含氨基比林19.984g? mL,,咖啡因6.0g?mL一,马来酸氯苯那敏20.0 g?mL'非那西丁30.216g?mL的对照品溶 液10L,重复进样5次,记录峰面积,计算RSD分 别为0.9%,0.9%,0.5%,0.5%;以3倍信噪比计 算最小检出浓度分别为0.0216,0.0239,0.0144, 0.0368g?mL,. 5回收率试验 精密称取氨基比林,咖啡因,马来酸氯苯那敏 及非那西丁对照品适量,照本品的处方和工艺,按 标示量80%,100%,120%配制3份模拟制剂.分 别精密称取适量(相当于5包药量)各置250mL 量瓶,用流动相溶解(超声波助溶),定容至刻度, 取续滤液作为供试液A(供测马来酸氯苯那敏). 取供试液A1mL置于50mL量瓶,用流动相稀释 至刻度,作供试液B(供测氨基比林,咖啡因及非 那西丁).分别进样10L,各重复3次,测定各 组分峰面积,采用外标法计算含量,求得平均回收 率,结果见1. 6样品测定 取市售小儿克感敏颗粒5包于250mL量瓶,用 表1各组分平均回收率?RSD测定结果(%.^=3) Tab1Resultsofaveragerecoveries?RSDfor thefourcomponents 组分名称标示量(1abelledquantity) (components)80%100%120% 流动相溶解(超声波助溶),定容至刻度,取续滤液 作为供试液A(供测马来酸氯苯那敏).取供试液A 1mL置于50mL容量瓶,用流动相稀释至刻度,作 供试液B(供测氨基比林,咖啡因及非那西丁).分 别依上述方法进样10测定,记录峰面积,用外标 法计算各组分含量.测定结果见表2. 表2~J,JL克感敏颗粒含量测定结果 Tab2Contentsofthefourcomponentsin XiaoerKeganmingranules 7讨论 7.1流动相的组成流动相中甲醇一乙腈的浓度 对各组分的保留行为影响很大,精细调整甲醇一乙 腈的比例,可实现各组分的分离;流动相中加入磷酸 盐可缩短马来酸的保留时间,使其首先被分离;三乙 胺不仅调节各组分的保留时间,并可很好地改善峰 形,尤其是氯苯那敏的峰形,以利准确定量.经不断 优化选择,最终将流动相中甲醇一乙腈一0.05mol ? L磷酸二氢铵(含0.1%三乙胺)的体积比定为 90:210:700. 7.2pH的确定在甲醇一乙腈一0.05mol?L 磷酸二氢胺(含0.1%三乙胺)体积比为90:210:700 时,考察pH对各组分保留时间的影响.曾用磷酸 调流动相pH分别为4.51,4.02,3.53,3.25,2.7, 2.53试验,结果4种物质的保留时间随pH的降低 均有提前,其中氯苯那敏受pH影响最大,选定pH = 2.7,各组分间的分离度均可达到满意的结果,且 ? 626?药物分析杂志ChinJPharmAnal2004,24(6) 空白试验证明辅料无干扰. 7.3检测波长的选择为同时满足对/bJL克感敏 颗粒中多组分测定的需要,特别是含量较低的马来 酸氯苯那敏的测定,经紫外光谱扫描,权衡各组分紫 外吸收值,特选261nm为检测波长.此时,除马来 酸外,其他各组分都有较好吸收. 7.4关于马来酸氯苯那敏马来酸氯苯那敏在含 水溶液中以游离的马来酸和氯苯那敏存在,在本色 谱条件下,保留时间分别为2.3min和13.7min. 马来酸含有不饱和双键,在溶液中不稳定,实际测定 中按其有效成分氯苯那敏定量计算.目前,很多关 于马来酸氯苯那敏HPLC方法测定的报道将马来酸 误当做马来酸氯苯那敏处理(梁艺英等也曾在有 关论述中指出:有不少文献误将马来酸判断为马来 酸氯苯那敏中母核氯苯那敏),因为在这类文中所 给的色谱条件下,大多使用有机溶剂比例较小的缓 冲盐流动相,氯苯那敏很难或根本不被洗脱,只有其 相关物质马来酸会在短时间内出峰. 7.5含量测定因处方中马来酸氯苯那敏含量相 对很低,在同一色谱图中影响准确定量,故在样品测 定时按前述方法先制成供试液A,供测马来酸氯苯 那敏,然后将供试液A稀释为供试液B,供测定另外 3个组分含量. 参考文献 lNANNan(南楠),CHENHua(陈华),ZHUJi—hong(朱霁虹). HPLCdeterminationofcodeinephosphate,ephedrinehydrochloride andehlorphenaminemaleateinCoci—Fedra—c—Syrup(HPLC法测 定化痰止咳露中可待因,盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏的含 量).ChinJPharmAnal(药物分析杂志),2000,20(1):7 2FENGI丑n(冯岚).Determinationofthefouractiveingredientsinas— metonstrongcapsules(阿斯美胶囊中四种组分的高效液相色谱分 析HTLC).JlnstrumAnal(分析测试)1997,16(4):50 3YuWei—Min(余伟民),YOUShi—Long(尤时龙).Determination ofcompoundpholeodineoralsolutionbyHPLCandTLC(复方福尔 可定口服液的HPLC和TLC测定).JPharm(中国医药工业 杂志),2002,33(3):134 4LAINGYi—Ying(梁艺英),ZHUBing—hui(朱炳辉),LUHui—w en(陆惠文),eta1.Determinationofmetamizolesodiumandchlor- phenaminemaleateinZhongganlingtabletsbysolid—phaseextraction HPLC(重感灵片中安乃近及马来酸氯苯那敏的固相萃取高效液 相色谱法测定).ChinTraditPatMed(中成药),2001,23(4):246 (本文于2003年7月21日收到) 链脲菌素冻干粉针的细菌内毒素检查法试验研究 李雪梅周建平 (北京市药品检验所北京100035) 摘要目的:建立链脲菌素冻干粉针细菌内毒素的检查方法(BET法).方法:按照中国药典2000年版二部的规定,确定链 脲菌素的细菌内毒素限值,进行BET法的干扰试验,并测定其最大非干扰浓度.结果:链尿菌素冻干粉针对BET法有抑制 作用,最大稀释浓度为1.25mg?mL时可以消除干扰.结论:链脲菌素可用BET法进行细菌内素素检查,用于该制剂的 质量控制., 关键词链脲菌素冻干粉针细菌内毒素检查干扰试验鲎试剂 StudyontheBacterialEndotoxinTestfor FrozenDriedStreptozocinforInjection LIXue—?meiandZHOUJian——ping (BeijingInstituteforDrugControl,Beqi~100035) AbstractObjective:ToestablishabacterialendotoxintestforStreptozocinforInjection.Methods:Accordingto ChinesePharmacopoiea(VolU,2000),interferencetestwascarriedouttodetecttheendotoxininStreptozocinfor Injectionwithlimuluslysateagentsandthelimimtionofendotoxininthispreparation.wasdetermined.Result: StreptozocinforInjectioncouldinterferethedetectionofbacterialendotoxin.Itwasprovedthatthemaximumnonin— terferenceconcen~ationWas1.25mg?mL,.Conclusion:Thedeterminationofbacterialen dotoxinissuitableand