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【doc】检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义

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【doc】检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义【doc】检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义 检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床 意义 2o05年第32卷第2期中国肿瘤临床?73? 检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义 摘要目的:探讨膀胱癌患者尿脱落细胞微卫星不稳定性及临床意义.方法:将42例患者尿液标本经适”-3处理 后,采用PCR—PAGE一银染方法检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的情况,分析其与临床病理参数的关系.结果:膀 胱癌患者尿中MSI阳性率为5952%(25/42),浸润性肿瘤患者尿中阳性率较高.但无统计学意义(P>0.05);复发...
【doc】检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义
【doc】检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义 检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床 意义 2o05年第32卷第2期中国肿瘤临床?73? 检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义 摘要目的:探讨膀胱癌患者尿脱落细胞微卫星不稳定性及临床意义.方法:将42例患者尿液标本经适”-3处理 后,采用PCR—PAGE一银染方法检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的情况,分析其与临床病理参数的关系.结果:膀 胱癌患者尿中MSI阳性率为5952%(25/42),浸润性肿瘤患者尿中阳性率较高.但无统计学意义(P>0.05);复发病例 中阳性率(80.00%)比初发者(40.91%)明显要高(P<0.05).结论:检测尿脱落细胞微卫星不稳定性可以作为膀胱癌的 一 种无创诊断及筛查手段 关键词膀胱癌微卫星不稳定性尿脱落细胞 中图分类号:R737.14文献标识码:A文章编号:10o0—8179(2o05)02一o073—04 ClinicalImplicationsofMicrosatelliteInstabilityinUrinaryExfoliative CellofthePatientswithBladderCarcinoma DiJinmingWuQiongZhangYaoetal DepartmentofUrology,AffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,Bengbu,Anhui. AbstractObjective:Toinvestigatemicrosatelliteinstability(MSI)andit’spotentialclinicalim— plicationsinurinaryexfoliativecellofthepatientswithbladdercarcinoma.Methods:Atiertreatedwith propermethod,urinespacimensfrom69individualswereanalyzedbyPCRformicrosatelliteinstability andit’srelationtotheclinico—pathologicparameters.Results:Theoverallse nsitivityofmicrosatellite instabilityinvoidedurinesamplesforthedetectionofbladderneoplasmswas59.52%(25/42).Itwas relativelyhigherinthetumorofadvancedstageandgrade,buttherewasnosignificance(P>0.05).It wassignificantlyhigherinrecurrentcases(60.00%,12/20)thaninprimarycases(80.00%,16/20)(P< 0.05).Conclusion:MSIiSapotentialbiomarkerfornoninvasivedetectionofbladdercarcinomabyas— sayingexfoliatedcellsfromthevoidedurinespecimenwithPCR. KeywordsBladderneoplasmsGeneMicrosatelliteinstability Urinaryexfoliativecell 膀胱癌是泌尿系最常见的肿瘤,术后复发率高. 敏感,简便易行的检查方法尤为重要.尿液是最易采 集的标本,许多学者利用尿液中少量的脱落细胞进 行多种检查诊断膀胱癌,本实验通过应用PCR— PAGE一银染方法检测膀胱癌患者尿脱落细胞中微 卫星不稳定性情况,为临床寻找一种新的膀胱肿瘤 的无创诊断手段 1材料与方法 1.1临床资料 69例可疑标本均取自本院泌尿外科2000年2 月,2003年6月膀胱镜前膀胱冲洗液100mL.血液 lmL,另有20例正常者作为对照.尿液标本留取后 离心沉淀尿沉渣,PBS重悬细胞,反复3次后转移至 1.5mL的ependoff管中置一80度冰箱保存.42例均 本文课题受2000年安徽省教育厅高校优秀青年教师科研基金(编 号:2000jq137) 和安徽省自然科学基金资助(编号:2001kj176) ?肿瘤内科?蚌埠医学院检验系 中国肿瘤临床 I止脚胱撼仆竽数包蚵截?大小 硬分娥 I2I)NAhh提 怀绎f册圳府(1I澉尿怀杠)fIII凡Iml 斛澈(0】Till,r-/INa(~l0{?Il1…TJ6~L1.10~Bufh,I 5『,dVIIcIOnmml/IIFIMg2I(25mmo]/IlI l僻(I5f…,llI.tll】1.OIx1uc5~z/FxI)05uI模 ed.髓JJ】?八一淌油.总体岛 50,uL船吓什:先于坐i’1945micl_接F求35扶 憎吓:4.M55~L9(Js(啡州引物温废L所). 72:90.蚪2i!f枉727ini I5尘弭{阿烯酏陆凝脞r淋 I)CI~】物取5L#JFT凡l0LI弹缓冲液(stop Itlli?1.9551,离子【I魄脏O025~,苯艇. 0025沮脊监IOmmol/LEr ilg0.95坐性 {0miii.ItlJ甘r球l.持甲链状态.接替胆15. 川徽进样样f127i业性壤阿烯胺凝脞 (29:J.身碌索7M0l1电泳电泳条件8W8h.州恒温 衍环柠仅持电泳鹰4 】6锹盐溆包 I淋站_囊取{I1槲:i甘腔边缘悼性卉进 衍讯镪一崔:】%础脯辄.七m?ti(捕州完垒 娈包)rl!m脯锻t占III咩20~L,lOOmL1银染30一 h%碱瞒枘l甲阵4”【/I?nI)址蟛至条带清 址Jl_玻璃纸忸盖凝脞昧I:侏俘或艄照 I7纰计牛讣 鹿1【]SIi一统计蚀件让理.确切慨半沾 2结果 2J肿.『前敞 噼胱移仔细胞蜘37.崃癌4例.蜷癌I例 rfr战丧忡(打膜以内)19剜.浸润性肿俯23 :幻发痈制2:洲.髓病例20俐』IIlJ瘕径05, 5till恼龃fd},8十 2.2瞰]r{:划定准 以外?胞1)N,?0PCR{=rl曾产物作止 常对照噼胱肿标小(i4Jd!’增产物桐邻的荣带 L十同一策什l,世iJpl,lF5? 2.4MSI与临床病理关系 见1. 经PCR—PAGE一银染方法检测所有标本中出现 微卫星不稳定性28例,其中病理证实为膀胱癌的 42例中MSI阳性者25例(59.52%,25/42),非肿瘤 者中3例(11.11%,3/27).其中复发病例中阳性率 (8O.OO%)比初发者(40.91%)明显要高(P<0.05);在 浸润性肿瘤中阳性率相对较高.但无统计学意义 (P>0.05).在正常对照者尿液中均为阴性.对于膀胱 癌该检查的敏感性为40.48%.特异性为92.59%.诊 断准确性为6O.87%(42/69).MSI阳性率与年龄,性 别,肿瘤部位及数目多少等均无关. 表1不同标本中MSI比较例(%) 3讨论 微卫星(Microsatellite.MS)是基因复制或细胞 减数分裂过程巾染色体不对等交换产生的寡核苷酸 重复序列.它的缺失或插入造成微卫星不稳定性 (MicrosatelliteInstability,MSI).1993年Thibodeau’ 发现MSI后,相继于结直肠癌2.3,胃癌:,卵巢癌:5i 及膀胱癌一组织中均发现MSI.从而成为检测临床 肿瘤标本很有价值的标记物. 范振斌等研究膀胱癌患者尿脱落细胞中MSI 时发现,9p丢失在膀胱癌早期是最常见的现象,其 中位于9p21的微卫星位点的改变最常见.国外也有 相似的报道=8=8.本文选择了该处的四个位点(IFNA, D9S162,D9S747及D9S171),结果发现在尿脱落细 胞中的阳性率分别为35.00%,38.00%,8.00%和 2.00%.BAT一26在结直肠癌中单态性很好.膀胱 癌中该位点的单态性依然很好,但阳性率不高 (5.00%). Berger等’应用17个微卫星位点检测31例膀 胱癌患者尿脱落细胞的MSI的敏感性为77% (24/31);也有报道利用尿沉渣检测MSI敏感性达 89%”:.我们检测了69例可疑膀胱癌患者(42例确 诊为膀胱癌)尿脱落细胞中的MSI,敏感性为 59.52%(25/42),相对偏低,可能与选择微卫星位点 数目偏少有关.但特异性较高达88.89%,所有非膀 胱病变对照者中均为阴性.这与国内外报道相似ll,. 提示该项检测具有较高的敏感性和特异性.可以作 为膀胱癌诊断,高危人群筛查的一种无创手段. MSI在浸润性肿瘤患者尿液中阳性率为 73.91%(17/23),较浅表性肿瘤者的阳性率 (42.11%,8/19)相对要高,但无统计学意义(P> O.05),这与有关报道相似”13.MSI阳性率与肿瘤分 期,分级无关.Amira等_l4发现13例复发病例中12 例(92%)MSI阳性,且其中的9例在确诊复发前1,9 个月即检测阳性.本文也发现MSI在复发者的尿液 中(8O.00%)明显高于初发者(4O.91%).提示尿脱落 细胞MSI阳性可能是膀胱肿瘤复发的一个重要指 标. 参考文献 1ThibodeauSN,BrenG,SchaidD.Msiincanceroftheproximal colon[1].Science,1993,260(5109):816,819 2狄金明狲立,吴穷,等.伴有微卫星不稳定性的散发性结直肠 癌转化生长因子beta?受体基因突变的研究?】.中国病理生理杂 志,2004,20(7):1144,1148 3WardR,NeagherA,TomLisonI,eta1.Microsatdliteinstability andclincopathologicalfeaturesofsporadiccolorectalcancer?】. Gut,2001,48(6):821,829 4GrundeiT,VogelsangH,OttK,etal,Lossofheterozygosityand microsatelliteinstabilityaspredictivemarkersforneoadjuvant treatmentingastriccarcinoma?】.ClinCancerRes,2000,6(12): 4782-4788 5Sin~rG,KaUinowskiT1HarmaannA,eta1.Differenttypesof microsatelliteinstabilityinovariancarcinoma?】.IntJCancer, 2004,112(4):643,649 6PrimdahH,WikmanFP,vonderMaaseH,eta1.Allelicimbal— ancesinhumanbladdercancer:genome—widedetectionwith l1igh-densitysingle--nucleotidepolymorphismarrays?】.JNatl CancerInst,2002,94(3):216-223 7范振斌,张建军,白瑾峰,等.膀胱移行细胞癌病人癌组织与尿脱落 细胞中9p微卫星不稳定性的分布?】.中华医学杂志,2000,8O(1): 44-45 8GhengL,BostwickDG,LiG,eta1.Gonservedgeneticfindingsin metastaticbladdercancer:possibleutility0falleliclossofchro- mosomes9p21and17p13indiagnosis?】.ArchPatholLabMed, 2001,125(9):1197,1199 9狄金明,张一楚,陈蕾,等.微卫星BAT__26位点单态性的分析?】. 肿瘤防治研究,2001,28(2):124,125 10BergerAP,ParsonW,Stenzleta1Microsatellitealterationsin (下转第78页) ? 78?中国肿瘤临床2005年第32卷第2期 浆的释放,启动caspases,进而诱发细胞凋亡;2)以 不依赖于细胞色素C的方式启动caspases.如通过 easpases启动因子Apaf-1等来诱发细胞凋亡.有些 情况下BH3域可同时激发以上两个途径.触发细胞 死亡.许多健康细胞类型内存在有Bim的表达,如 造血干细胞及腺细胞等.其中Bim以失活的形式与 微管相连的动力蛋白复合物相结合.在某种凋亡刺 激下.Bim从微管上释放出来,介导caspase依赖的 细胞凋亡.其具体目前尚不明确.除位置的变化 外.Bim的促凋亡活性还受蛋白磷酸化的调节].磷 酸化后Bim蛋白的促凋亡活性明显减低.Bad与 Bim同属仅含BH3域蛋白.研究证实Bad的活性调 节主要受PI3K/PKB途径的磷酸化调节[6-8一,而 PI3K/PKB途径的过度激活与子宫内膜癌的发生密 切相关[9,10.因此推断Bim蛋白活性的改变可能与 子宫内膜癌的发生有关. 本文结果表明在非典型增生子宫内膜组织中, Bim蛋白表达已明显少于正常内膜组织,而在内膜 癌组织中,Bim蛋白表达则更加减少,说明子宫内膜 癌的发生与Bim蛋白改变密切相关,而在不同临床 分期,组织学分级以及肌层浸润程度之间Bim蛋白 表达没有明显差异.这些提示Bim蛋白改变可能是 子宫内膜癌发生过程中的早期事件,随着癌症的进 展.Bim蛋白不再有明显改变.因此认为Bim蛋白的 改变与子宫内膜癌的发生有关.而其具体机制尚不 明确.Bim蛋白磷酸化后其促凋亡活性明显降低,探 讨Bim磷酸化后子宫内膜细胞增殖情况的变化及 其与PI3K/PKB途径的关系将进一步明确Bim蛋白 在正常子宫内膜细胞癌变过程中的作用. 综上所述,Bim蛋白的表达的改变在子宫内膜 癌的发生过程中起重要作用.但Bim蛋白活性的调 控机制以及Bim蛋白改变导致子宫内膜癌发生的 机制尚不明确,我们将就此深入研究,以期为子宫内 膜癌的早期,有效治疗提供理论依据. 参考文献 1OConnorL,StrasserA,ORely,etai.Bim:anovelmemberof theBcl--2familythatpromotesapoptosis[J].EMBOJ,1998,17(2): 384~395 2Jiangz,ZhengX,LytleRA,etai.Lovastafin--inducedup--regu- lationoftheBH3---onlyprotein,Bim,andcelldeathinglioblas- tomacells[J].JNeurochem,2004,89(1):168,178 3SuntersA,FernandezdeMattosS,StahlM,etai.FoxO3atrail- scriptionairegulationofBimcontrolsapoptosisinpaclitaxel—— treatedbreastcancercelllines?].JBiolChem.2003,12;278(50): 49795,49805 4StrasserA,PuthaiakathH,BouilletP,etai.Theroleofbim,a proapoptoticBH3—0vmemberoftheBd_2familyincell— deathcontrol[J].AnnNYAcadSci.2000,917:541,548 5SewardRJ,yonHailerPD,AebersoldR,etai.Phosphorylafionof thepro--apoptoticproteinBiminlymphocytesisassociatedwith protectionfromapoptosis[J].Mollrnmunol,2003,39(16):983,993 6PetrosAM,OlejniczakET,FesikSW.Structuralbiologyofthe Bcl__2familyofproteins[J].BiochlmBiophysActa.2004.1644(2, 3):83,94 7Ol’ikeN,MiddletonG,BorthwickE,etai.RoleofPI3--kinase, AktandBc1—2—relatedproteinsinsustainingthesurvivalofneu. rotrophicfactor-independentadultsympatheticneurons[I].JCell Biol,2001,154(5):995,1005 8LizcanoJM,MorriceN,CohenP.RegulationofBADbycAMP- dependentproteinkinaseisme~atedviaphosphorylationofa novelsite,Ser155?].BiocbemJ,2000,349(Pt2):547—557 9WanX,YokoyamaY,ShinoharaA,etai.PTENaugmentsstau? rosporine--inducedapoptosisinPTEN—nullIshikawacellsby downregulafingPI3K/Aktsignalingpathway[]].CellDeathD. 2002,9(4):414,420 1O郭瑞霞,魏丽惠,王建六,等.17B一雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂 酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的激活作用?].中华妇 产科杂志,2004,39(7):469-473 (2OO4一.06—11收稿) (2004--09--28修回) (杨红欣校对) (上接第75页) humanbladdercancer:detectionoftumorcellsinurinesediment andtumor~suem.EurUrol,2002,41(5):532,539 ll张建军,郑闪,邸雪冰,等.微卫星分析在膀胱癌诊断中应用的进 一 步研究田.巾华医学杂志,2001,81(20):1224~1226 12邱林,丛笑,谭一伟,等.尿脱落细胞微卫星DNA改变在膀胱 癌早期诊断巾的应用?].中华肿瘤杂志,2000,22(6):483-486 l3CattolW,MeuthM.HamdyFc,etai.Geneticinsmb~and transitionalcellcarcinomaofthebladder[J].BJUInt,2004,93(1): 19,24 14AmiraN,MourahS,RozetF,etai.Non--invaswemolecular detectionofbladdercancerrecurrence?].IntJCancer,2002,101 f3):293—297 ‘(2004--06_4收稿) ‘(2Oo4—1o_’o6修回) (韩豫生校对)
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