【doc】检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义
检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床
意义
2o05年第32卷第2期中国肿瘤临床?73?
检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的临床意义
摘要目的:探讨膀胱癌患者尿脱落细胞微卫星不稳定性及临床意义.方法:将42例患者尿液标本经适”-3处理
后,采用PCR—PAGE一银染方法检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的情况,分析其与临床病理参数的关系.结果:膀
胱癌患者尿中MSI阳性率为5952%(25/42),浸润性肿瘤患者尿中阳性率较高.但无统计学意义(P>0.05);复发病例
中阳性率(80.00%)比初发者(40.91%)明显要高(P<0.05).结论:检测尿脱落细胞微卫星不稳定性可以作为膀胱癌的
一
种无创诊断及筛查手段
关键词膀胱癌微卫星不稳定性尿脱落细胞
中图分类号:R737.14文献标识码:A文章编号:10o0—8179(2o05)02一o073—04
ClinicalImplicationsofMicrosatelliteInstabilityinUrinaryExfoliative
CellofthePatientswithBladderCarcinoma
DiJinmingWuQiongZhangYaoetal
DepartmentofUrology,AffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,Bengbu,Anhui.
AbstractObjective:Toinvestigatemicrosatelliteinstability(MSI)andit’spotentialclinicalim—
plicationsinurinaryexfoliativecellofthepatientswithbladdercarcinoma.Methods:Atiertreatedwith
propermethod,urinespacimensfrom69individualswereanalyzedbyPCRformicrosatelliteinstability
andit’srelationtotheclinico—pathologicparameters.Results:Theoverallse
nsitivityofmicrosatellite
instabilityinvoidedurinesamplesforthedetectionofbladderneoplasmswas59.52%(25/42).Itwas
relativelyhigherinthetumorofadvancedstageandgrade,buttherewasnosignificance(P>0.05).It
wassignificantlyhigherinrecurrentcases(60.00%,12/20)thaninprimarycases(80.00%,16/20)(P<
0.05).Conclusion:MSIiSapotentialbiomarkerfornoninvasivedetectionofbladdercarcinomabyas—
sayingexfoliatedcellsfromthevoidedurinespecimenwithPCR.
KeywordsBladderneoplasmsGeneMicrosatelliteinstability
Urinaryexfoliativecell
膀胱癌是泌尿系最常见的肿瘤,术后复发率高.
敏感,简便易行的检查方法尤为重要.尿液是最易采
集的标本,许多学者利用尿液中少量的脱落细胞进
行多种检查诊断膀胱癌,本实验通过应用PCR—
PAGE一银染方法检测膀胱癌患者尿脱落细胞中微
卫星不稳定性情况,为临床寻找一种新的膀胱肿瘤
的无创诊断手段
1材料与方法
1.1临床资料
69例可疑标本均取自本院泌尿外科2000年2
月,2003年6月膀胱镜前膀胱冲洗液100mL.血液
lmL,另有20例正常者作为对照.尿液标本留取后
离心沉淀尿沉渣,PBS重悬细胞,反复3次后转移至
1.5mL的ependoff管中置一80度冰箱保存.42例均
本文课题受2000年安徽省教育厅高校优秀青年教师科研基金(编
号:2000jq137)
和安徽省自然科学基金资助(编号:2001kj176)
?肿瘤内科?蚌埠医学院检验系
中国肿瘤临床
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2结果
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2.4MSI与临床病理关系
见
1.
经PCR—PAGE一银染方法检测所有标本中出现
微卫星不稳定性28例,其中病理证实为膀胱癌的
42例中MSI阳性者25例(59.52%,25/42),非肿瘤
者中3例(11.11%,3/27).其中复发病例中阳性率
(8O.OO%)比初发者(40.91%)明显要高(P<0.05);在
浸润性肿瘤中阳性率相对较高.但无统计学意义
(P>0.05).在正常对照者尿液中均为阴性.对于膀胱
癌该检查的敏感性为40.48%.特异性为92.59%.诊
断准确性为6O.87%(42/69).MSI阳性率与年龄,性
别,肿瘤部位及数目多少等均无关.
表1不同标本中MSI比较例(%)
3讨论
微卫星(Microsatellite.MS)是基因复制或细胞
减数分裂过程巾染色体不对等交换产生的寡核苷酸
重复序列.它的缺失或插入造成微卫星不稳定性
(MicrosatelliteInstability,MSI).1993年Thibodeau’
发现MSI后,相继于结直肠癌2.3,胃癌:,卵巢癌:5i
及膀胱癌一组织中均发现MSI.从而成为检测临床
肿瘤标本很有价值的标记物.
范振斌等研究膀胱癌患者尿脱落细胞中MSI
时发现,9p丢失在膀胱癌早期是最常见的现象,其
中位于9p21的微卫星位点的改变最常见.国外也有
相似的报道=8=8.本文选择了该处的四个位点(IFNA,
D9S162,D9S747及D9S171),结果发现在尿脱落细
胞中的阳性率分别为35.00%,38.00%,8.00%和
2.00%.BAT一26在结直肠癌中单态性很好.膀胱
癌中该位点的单态性依然很好,但阳性率不高
(5.00%).
Berger等’应用17个微卫星位点检测31例膀
胱癌患者尿脱落细胞的MSI的敏感性为77%
(24/31);也有报道利用尿沉渣检测MSI敏感性达
89%”:.我们检测了69例可疑膀胱癌患者(42例确
诊为膀胱癌)尿脱落细胞中的MSI,敏感性为
59.52%(25/42),相对偏低,可能与选择微卫星位点
数目偏少有关.但特异性较高达88.89%,所有非膀
胱病变对照者中均为阴性.这与国内外报道相似ll,.
提示该项检测具有较高的敏感性和特异性.可以作
为膀胱癌诊断,高危人群筛查的一种无创手段.
MSI在浸润性肿瘤患者尿液中阳性率为
73.91%(17/23),较浅表性肿瘤者的阳性率
(42.11%,8/19)相对要高,但无统计学意义(P>
O.05),这与有关报道相似”13.MSI阳性率与肿瘤分
期,分级无关.Amira等_l4发现13例复发病例中12
例(92%)MSI阳性,且其中的9例在确诊复发前1,9
个月即检测阳性.本文也发现MSI在复发者的尿液
中(8O.00%)明显高于初发者(4O.91%).提示尿脱落
细胞MSI阳性可能是膀胱肿瘤复发的一个重要指
标.
参考文献
1ThibodeauSN,BrenG,SchaidD.Msiincanceroftheproximal
colon[1].Science,1993,260(5109):816,819
2狄金明狲立,吴穷,等.伴有微卫星不稳定性的散发性结直肠
癌转化生长因子beta?受体基因突变的研究?】.中国病理生理杂
志,2004,20(7):1144,1148
3WardR,NeagherA,TomLisonI,eta1.Microsatdliteinstability
andclincopathologicalfeaturesofsporadiccolorectalcancer?】.
Gut,2001,48(6):821,829
4GrundeiT,VogelsangH,OttK,etal,Lossofheterozygosityand
microsatelliteinstabilityaspredictivemarkersforneoadjuvant
treatmentingastriccarcinoma?】.ClinCancerRes,2000,6(12):
4782-4788
5Sin~rG,KaUinowskiT1HarmaannA,eta1.Differenttypesof
microsatelliteinstabilityinovariancarcinoma?】.IntJCancer,
2004,112(4):643,649
6PrimdahH,WikmanFP,vonderMaaseH,eta1.Allelicimbal—
ancesinhumanbladdercancer:genome—widedetectionwith
l1igh-densitysingle--nucleotidepolymorphismarrays?】.JNatl
CancerInst,2002,94(3):216-223
7范振斌,张建军,白瑾峰,等.膀胱移行细胞癌病人癌组织与尿脱落
细胞中9p微卫星不稳定性的分布?】.中华医学杂志,2000,8O(1):
44-45
8GhengL,BostwickDG,LiG,eta1.Gonservedgeneticfindingsin
metastaticbladdercancer:possibleutility0falleliclossofchro-
mosomes9p21and17p13indiagnosis?】.ArchPatholLabMed,
2001,125(9):1197,1199
9狄金明,张一楚,陈蕾,等.微卫星BAT__26位点单态性的分析?】.
肿瘤防治研究,2001,28(2):124,125
10BergerAP,ParsonW,Stenzleta1Microsatellitealterationsin
(下转第78页)
?
78?中国肿瘤临床2005年第32卷第2期
浆的释放,启动caspases,进而诱发细胞凋亡;2)以
不依赖于细胞色素C的方式启动caspases.如通过
easpases启动因子Apaf-1等来诱发细胞凋亡.有些
情况下BH3域可同时激发以上两个途径.触发细胞
死亡.许多健康细胞类型内存在有Bim的表达,如
造血干细胞及腺细胞等.其中Bim以失活的形式与
微管相连的动力蛋白复合物相结合.在某种凋亡刺
激下.Bim从微管上释放出来,介导caspase依赖的
细胞凋亡.其具体
目前尚不明确.除位置的变化
外.Bim的促凋亡活性还受蛋白磷酸化的调节].磷
酸化后Bim蛋白的促凋亡活性明显减低.Bad与
Bim同属仅含BH3域蛋白.研究证实Bad的活性调
节主要受PI3K/PKB途径的磷酸化调节[6-8一,而
PI3K/PKB途径的过度激活与子宫内膜癌的发生密
切相关[9,10.因此推断Bim蛋白活性的改变可能与
子宫内膜癌的发生有关.
本文结果表明在非典型增生子宫内膜组织中,
Bim蛋白表达已明显少于正常内膜组织,而在内膜
癌组织中,Bim蛋白表达则更加减少,说明子宫内膜
癌的发生与Bim蛋白改变密切相关,而在不同临床
分期,组织学分级以及肌层浸润程度之间Bim蛋白
表达没有明显差异.这些提示Bim蛋白改变可能是
子宫内膜癌发生过程中的早期事件,随着癌症的进
展.Bim蛋白不再有明显改变.因此认为Bim蛋白的
改变与子宫内膜癌的发生有关.而其具体机制尚不
明确.Bim蛋白磷酸化后其促凋亡活性明显降低,探
讨Bim磷酸化后子宫内膜细胞增殖情况的变化及
其与PI3K/PKB途径的关系将进一步明确Bim蛋白
在正常子宫内膜细胞癌变过程中的作用.
综上所述,Bim蛋白的表达的改变在子宫内膜
癌的发生过程中起重要作用.但Bim蛋白活性的调
控机制以及Bim蛋白改变导致子宫内膜癌发生的
机制尚不明确,我们将就此深入研究,以期为子宫内
膜癌的早期,有效治疗提供理论依据.
参考文献
1OConnorL,StrasserA,ORely,etai.Bim:anovelmemberof
theBcl--2familythatpromotesapoptosis[J].EMBOJ,1998,17(2):
384~395
2Jiangz,ZhengX,LytleRA,etai.Lovastafin--inducedup--regu-
lationoftheBH3---onlyprotein,Bim,andcelldeathinglioblas-
tomacells[J].JNeurochem,2004,89(1):168,178
3SuntersA,FernandezdeMattosS,StahlM,etai.FoxO3atrail-
scriptionairegulationofBimcontrolsapoptosisinpaclitaxel——
treatedbreastcancercelllines?].JBiolChem.2003,12;278(50):
49795,49805
4StrasserA,PuthaiakathH,BouilletP,etai.Theroleofbim,a
proapoptoticBH3—0vmemberoftheBd_2familyincell—
deathcontrol[J].AnnNYAcadSci.2000,917:541,548
5SewardRJ,yonHailerPD,AebersoldR,etai.Phosphorylafionof
thepro--apoptoticproteinBiminlymphocytesisassociatedwith
protectionfromapoptosis[J].Mollrnmunol,2003,39(16):983,993
6PetrosAM,OlejniczakET,FesikSW.Structuralbiologyofthe
Bcl__2familyofproteins[J].BiochlmBiophysActa.2004.1644(2,
3):83,94
7Ol’ikeN,MiddletonG,BorthwickE,etai.RoleofPI3--kinase,
AktandBc1—2—relatedproteinsinsustainingthesurvivalofneu.
rotrophicfactor-independentadultsympatheticneurons[I].JCell
Biol,2001,154(5):995,1005
8LizcanoJM,MorriceN,CohenP.RegulationofBADbycAMP-
dependentproteinkinaseisme~atedviaphosphorylationofa
novelsite,Ser155?].BiocbemJ,2000,349(Pt2):547—557
9WanX,YokoyamaY,ShinoharaA,etai.PTENaugmentsstau?
rosporine--inducedapoptosisinPTEN—nullIshikawacellsby
downregulafingPI3K/Aktsignalingpathway[]].CellDeathD.
2002,9(4):414,420
1O郭瑞霞,魏丽惠,王建六,等.17B一雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂
酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的激活作用?].中华妇
产科杂志,2004,39(7):469-473
(2OO4一.06—11收稿)
(2004--09--28修回)
(杨红欣校对)
(上接第75页)
humanbladdercancer:detectionoftumorcellsinurinesediment
andtumor~suem.EurUrol,2002,41(5):532,539
ll张建军,郑闪,邸雪冰,等.微卫星分析在膀胱癌诊断中应用的进
一
步研究田.巾华医学杂志,2001,81(20):1224~1226
12邱林,丛笑,谭一伟,等.尿脱落细胞微卫星DNA改变在膀胱
癌早期诊断巾的应用?].中华肿瘤杂志,2000,22(6):483-486
l3CattolW,MeuthM.HamdyFc,etai.Geneticinsmb~and
transitionalcellcarcinomaofthebladder[J].BJUInt,2004,93(1):
19,24
14AmiraN,MourahS,RozetF,etai.Non--invaswemolecular
detectionofbladdercancerrecurrence?].IntJCancer,2002,101
f3):293—297
‘(2004--06_4收稿)
‘(2Oo4—1o_’o6修回)
(韩豫生校对)