紫外分光光度法测定毛蕊花糖苷浓度及其油水分配系数.pdf

紫外分光光度法测定毛蕊花糖苷浓度及其油水分配系数.pdf 第5卷 第2期 食品安全质量检测学报 Vol. 5 No. 22014 年 2 月 Journal of Food Safety and Quality Feb. 2014 紫外分光光度法测定毛蕊花糖苷浓度 及其油水分配 系数 张伦宁 1 2 付桂明 1 2 3 万 茵 1 2 1. 南昌大学食品科学与技术国家重点 实验室 南昌 330047 2. 南昌大学生命科学与食品工程学院食品系 南昌 330031 3. 南昌大学中德食品工程中心 南昌 330047 摘 要: 目的 测定毛蕊花糖苷的油水分 配系数。 采用紫外分光光度法测定毛蕊花糖苷的浓度 结合摇 瓶法 正辛醇- 水系统测定毛蕊花糖苷的油水分配系数。结果 在 030 g/mL 范围内 毛蕊花糖苷的 浓度与吸 光值成线性?叵?相关系数为 0.999 平均回收率为102.16?0.703 RSD 为 0.688 n3 油水分配系数为 0.273 logP0.566n3 毛蕊花糖苷易溶于水。结论 紫外 分光光度法测定毛蕊花糖苷浓度操作简便 准 确性好 可作为毛蕊花糖苷油水分配 系数测定的方法。 关键词: 紫外 毛蕊花糖苷 油水分配系数 Determination of verbascoside and its oil-water partition coefficient by ultraviolet spectrophotometry ZHANG Lun-Ning1 2 FU Gui-Ming1 2 3 WAN Yin1 2 1. State Key Laboratory of Food Science and Technology Nanchang University Nanchang 330047 China 2. Food Engineering Department of Life Science and Food Engineering College Nanchang University Nanchang 330031 China 3. Sino-German Food Engineering Center Nanchang University Nanchang 330047 China ABSTRACT: Objective To determine the oil-water partition coefficient of verbascoside. Method Ultra- violet spectrophotometry UV was used to determine the content of verbascoside. Shake-flash method octa- nol-water system was employed to determine the oil-water partition coefficient of verbascoside. Results The content of verbascoside was linearly related to its absorbance values when the content was in the range of 030 g/mL and the correlation coefficient was 0.999. The average recovery was 102.16?0.703 with RSD of 0.688 n3. And the oil-water partition coefficient was 0.273 logP,0.566 n3 which indicated that verbascoside could be freely dissolved in water. Conclusion The method for determination of verbascoside is simple and has good correctness in this study. It can be used to determine the oil-water partition coefficient of verbascoside. KEY WORDS: ultraviolet spectrophotometry verbascoside oil-water partition coefficient基金项目: 国家自然科学基金项目 31160316Fund: Supported by National Natural Science Foundation of China 31160316通讯作者: 万茵 博士 副教授 主要研究方向为天然产物活性成分研究与开发 食品化学。E-mail: yinwanncu.edu.cnCorresponding author: WAN Yin Associate professor State Key Laboratory of Food Science and Technology Nanchang University Nan-chang 330047 China. E-mail: yinwanncu.edu.cn第2期 张伦宁 等: 紫外分光光度法测定毛蕊花糖苷 浓度及其油水分配系数 529 紫 外 分 光 光 度 仪 UV-7504上 海 精 密 科 技 仪 器 厂 1 引 言 UV-2450 型 紫 外 分 光 光 度 计 日 本 岛 津 离 心 机 毛蕊花糖苷verbascoside 又名麦角甾苷、类叶 5810R德国 Eppendorf 恒温振荡器 ZD-88苏州威升麻苷 是苯乙醇苷类中最早被发现的一种物质 也 尔实验用品有限 公司。是分布于自然界中最为广泛的苯乙醇苷类物质之一广泛存在于双子叶植物中。 毛蕊花糖苷在大粒车前子约 8.65 mg/g1 、密蒙花6.223 mg/g2 、肉苁蓉5.432.2 mg/g3 中含量较高 是这些传统中药材的主要药效成分。它由一个酯键和两个糖苷键将 34- 二羟基苯乙醇、苯丙素、鼠李糖和葡萄糖等四个结构单元连接而成 前二者都是典型 的天然产物的活性单元 见图 1。研究表明毛蕊花糖苷具抗氧化4、抗炎5、保肝6和 降低尿酸水平7等多种生理功能。 图 1 毛蕊花糖苷的化学结构 Fig. 1 The chemical structure of verbascoside 毛蕊花糖苷浓度的测定多用高效液相色谱法 89高效液相色谱法具有选择性好、检测灵敏度高和应用范围广等优点 但是操作复杂、成本高。紫外分光光 2.2 方 法度法具有仪器简单、操作方便、灵敏度高、相对误差 2.2.1 储备液的配制小、有一定选择性等特点 目前 利用紫外分光光度 准确称取毛蕊花糖苷 10.0 mg 用甲醇溶解定容法测定毛蕊花糖苷浓度的方法还未见报道 本文依 至 50 mL 作为储备液。据毛蕊花糖苷在紫外光谱下的吸收特征 用紫外分 2.2.2 水饱和正辛醇和正辛醇水饱和溶液的制备光光度法测定其浓度。 用量筒量取 50 mL 正辛醇和 150 mL 蒸馏水于具 油水分配系数 又称脂水分配系数 是同一种 塞三角瓶中。恒温振荡 24 h 使其混合均匀 相互饱物质在有机相和水相中浓度的比值。天然产物的生物 和。置于分液漏斗 静置过夜分层 分离两相 将两利用情况与物质进入生物机体后的溶解、吸收、分布、 相界面附近的溶液弃去 其余保存备用。上层为水饱转运等一系列体内过程密切相关 而物质在体内的 和正辛醇溶液 下层为正辛醇饱和水溶液13。溶解、吸收、分布、转运都与其水溶性和脂溶性有关 2.2.3 紫外最大吸收波长的确定即和油水分配系数有关 所以 测定物质的油水分配 取 适量 毛蕊花 糖苷 储备液 稀 释至适 当浓 度系数对研究物质在体内的过程有着重要的意义。实验 在 200450 nm 波长下扫描最大吸收波长。证明 毛蕊花糖 苷于静脉注 射后 半衰 期仅为 28 2.2.4 曲线的绘制 取储备液分别稀释至 30、20、15、10、5 g/mLmin10 很快地被清除。因此 对毛蕊花糖苷的理化 于最大吸收波长处测定其吸光度值 A 以吸光值 A 与性质进行研究能对其在体内的进一步研究提供理论 毛蕊花糖苷浓度建立标准曲线。基础。本试验采用经典的摇瓶法 11 以正辛醇-水为 2.2.5 精密度的测定系统测定毛蕊花糖苷的油水分配系数12。 准确移取储备液 0.4、0.8、1.2 mL 至 10 mL 容2 材料与方法 量瓶中 甲醇定容。于最大吸收波长处测定其吸光 值 每天测 3 次 每次间隔 7 h 连续测 5 天 根据标2.1 材料与仪器 准曲线算出相应的浓度 计算其相应的日内、日间 毛蕊花糖苷本实验室利用柱层析、制备色谱技 精密度。术从车前子原料中提取纯化 HPLC 纯度为 97.6、 2.2.6 回收率的测定甲醇分析纯 天津永大化学试剂公司、正辛醇分析 准确移取储备液 0.4、0.8、1.2 至 10 mL 容量瓶纯 天津永大化学试剂公司、蒸馏水实验室自制。 中 再分别准确移取水饱和正辛醇 0.1 mL 甲醇定容 电子天平 FA1604上海精密科学仪器有限公司 至刻度 在最大吸收波长处测定吸光度 计算实测质530 食品安全质量检测学报 第5卷量浓度 每组平行测定 3 次。根据实测值与理论值的 3.2 标准曲线比值 计算回收率。 取储备液分别稀释至 30、20、15、10、5 g/mL2.2.7 油水分配系数的测定14 于 332 nm 处测定其吸光度值 A 以吸光值 A 与毛蕊 精密称量 5.0 mg 毛蕊花糖苷至 10 mL 容量瓶中 花糖苷浓度建立标准曲线 线性回归方程: Y 水饱和正辛醇定容。将上述溶液与等体积的正辛醇水 0.0261X0.0126 相关系数为 0.999 如图 3 所示。饱和溶液混合于具塞三角瓶中。平行 3 组。恒温振荡 说明毛蕊花糖苷的浓度在 030 g/mL 时与其吸光48 h 4000 r/min 离心 30 min 分离上下层。分别取 值线性关系良好 该方法可用于毛蕊花糖苷浓度的上、下层溶液 0.5 mL 置于 10 mL 容量瓶中 以甲醇 测定。定容 在最大吸收波长处分别测定上层吸光值 A1 和下层吸光值 A2。计算出上、下层毛蕊花糖苷的相应浓度 C1、C2。其中 C1 为毛蕊花糖苷在水饱和正辛醇溶液中的浓度 C2 为毛蕊花糖苷在正辛醇饱和水溶液中的浓度。按 P C1/ C2 计算油水分配系数 P 值。3 结 果3.1 紫外最大吸收波长 取 适量 毛蕊花 糖苷 储备液 稀 释至适 当浓 度在 200400 nm 波长下扫描最 大吸收波长。由图 2 可知 毛蕊花糖苷的最大吸收波长为 332 nm 因此选 图 3 毛 蕊花糖苷的标准曲线择 332 nm 作为毛蕊花糖苷的检测波长。 Fig. 3 The standard curve of verbascoside 3.3 精密度的测定结果 精密度结果如表 1 所示。结果显示 日 内、日间 精密度的 RSD 均小于 2 表明检测方法可靠 稳定 性好。 3.4 回收率的 测定结果 回收率结果如表 2 所示 平均回收率为 102.16?0.703 RSD 为 0.688。回 收率略微高于 图 2 毛蕊花糖苷的紫外扫描曲线 中国药典中的要求 98-102。结果 表明: 该方法回 Fig. 2 UV scanning spectrum of verbascoside 收率高 可用于毛蕊花 糖苷油水分配系数的测定。 表 1 精密度测定结果n3 Table 1 The results of precision n3 添加浓度g/mL 日内精密度g/mL RSD 日间精密度g/mL RSD 7.78 7.75?0.032 0.413 7.95?0.136 1.708 15.76 15.86?0.026 0.161 16.00?0.165 1.034 23.37 22.94?0.066 0.289 23.35?0.293 1.256 表 2 回收率试验结果n3 Table 2 The results of recovery n3 添加浓度g/mL 回收率 平均回收率 RSD 7.78 102.96?0.017 15.76 101.62?0.007 102.16?0.703 0.688 23.37 101.91?0.004第2期 张伦宁 等: 紫外分光光度法测定毛蕊 花糖苷浓度及其油水分配系数 531 表 3 油水分配系数计算结果n3 Table 3 The oil-water partition coefficient of verbascoside n3 A1 C1 A2 C2 P logP 1 0.132 4.57 0.455 16.95 0.270 0.569 2 0.131 4.54 0.468 17.45 0.260 0.585 3 0.137 4.77 0.448 16.68 0.286 0.5443.5 油水分配系数 的化合物依那普利enalapril 脂溶性提高了 口服 生物利用 度也提高到 364420。 油水分配系数测定结果如表 3 所示。按公式计算 毛蕊花糖 苷的油水分配系数试验采用经典的摇得 油 水 分 配 系 数 P0.273?0.013 logP0.566? 瓶法 正辛醇-水为系统 紫外分光光度法测定。建立0.021。说明毛蕊花 糖苷易溶于水。 的紫外分光光度法操作简便 准确性好。4 讨 论 参考文献 相比于 液相色谱法 紫外分光光度法存在对样 1 万茵 谢明勇 何彦林. 反相高效液相色谱 法同时测定车前子品纯度要求较高、易受杂质干扰和应用范围较窄等缺 中的毛蕊花 糖苷和异毛蕊花糖苷J. 天然产物研究与开发点 但是 此法具有仪器简单、操作方 便、成本低等 2008 20: 474476.优点 本文用于测定油水分配系数的样品也符合紫 Wan Y Xie MY He YL. Determination of Verbascoside and Iso- verbascoside in Semen plantaginis by RP-HPLC J. Nat Prod外测定的要求。根据毛蕊花糖苷在紫外光谱内有 特征 Res Dev 2008 20: 474476.吸收峰 本文建立了紫外分光光度法测定毛蕊花糖 2 韩澎 崔亚君 郭洪祝 等. RP-HPLC 法测定密蒙花中毛蕊花苷 的浓度 结 果表 明 : 毛 蕊花糖苷的 浓度在 030 苷的含量J. 中草药 2003 3412: 10821084.g/mL 时与其吸光值线性关系良好 该方法可用于 Han P Cui YJ Guo HZ et al. Quantitative determination of ver-毛蕊花糖苷浓度的测定。 bascoside in buddleja officinalis by RP-HPLCJ. Chin Tradit 油水分配系数是用于表示化合物亲脂性和透过 Herb Drugs 2003 3412: 10821084.生物膜能力的重要以正辛醇-水系统测出的油 3 赵琳 郭 志刚 刘瑞芝 等. 肉苁蓉药材与盐生肉苁蓉培养细水分配系数对预测药物的定量结 构-吸收等有重要意 胞的主要成分对比研究J. 中草药 2004 357: 814817.义。一般 将药物分为 3 类: logPlt-0.3 的水溶性药物为 Zhao L Guo ZG Liu RZ et al. Comparison of main constituents of Herba Cistanche and cultured cells of Cistanche salsa J. Chin第一类 logP 在-0.34.5 的为第二类 logPgt 4.5 的脂 Tradit Herb Drugs 2004 357: 814817.溶性药物为第三类 15 。本试验测得的毛蕊花糖苷的 4 Chiou WF Lin LC Chen CF. Chieh Fu Chen. Acteoside protectslogP 值为-0.566 属于第一类水溶性物 质 这与苯乙 endothelial cells against free radical-induced oxidative stress J.醇苷类属 于天然水溶性糖苷16相符。 Pharm pharmacol 2004 56: 743748. 有研究 17 表明 毛 蕊花糖苷的口服生物利用度 5 Ana Mara Daza Mara Jose Abadb Lidia Fernandez et al.很低 仅为 0.12。另一种苯乙醇苷类物质连翘酯苷 Phenylpropanoid glycosides from Scrophularia scorodonia: In 18它的生物利用度也很低 仅为 0.5 。通常 造成化 vitro anti-inflammatory activity J. Life Sci 2004 7420:合物生物利用度较低的主要原因有: 水溶性差或脂 25152526.溶性差、稳定性不好、膜通透性差及高首过作用19。 6 Zhao J Liu T Ma L et al. Protective effect of acteoside on im-.