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年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响

2017-09-26 6页 doc 19KB 30阅读

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年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响 年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响 山东医药2OO6年第46卷第14期 年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响 李吴,,王一兵,张芮,张诚,冯永强,王海涛. (1山东大学医学院,山东济南250012;2山东省立医院;3山东医学高等专科学校) 【摘要】目的探讨年龄对瘢痕组织神经构筑的影响.方法26份瘢痕组织标本取自来我院行整形修复手 术的26例患者,正常皮肤来自供皮区,利用HE染色,单克隆抗体免疫荧光法,免疫荧光显微镜下观察不同年龄 瘢痕患者及正常皮肤中的神经丝蛋白(NFP),蛋白基因...
年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响
年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响 年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响 山东医药2OO6年第46卷第14期 年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响 李吴,,王一兵,张芮,张诚,冯永强,王海涛. (1山东大学医学院,山东济南250012;2山东省立医院;3山东医学高等专科学校) 【摘要】目的探讨年龄对瘢痕组织神经构筑的影响.26份瘢痕组织标本取自来我院行整形修复手 术的26例患者,正常皮肤来自供皮区,利用HE染色,单克隆抗体免疫荧光法,免疫荧光显微镜下观察不同年龄 瘢痕患者及正常皮肤中的神经丝蛋白(NFP),蛋白基因产物(PGP9.5)在末梢神经组织中的标记情况.结果创 面愈合后1,2Oa,?20岁和>20岁患者瘢痕组织中的神经纤维密度差异无统计学意义;1,9a患者瘢痕组织中 的神经纤维密度明显少于正常皮肤的密度,>9a患者瘢痕组织中的神经纤维密度基本恢复到正常皮肤水平.结 论2O岁前后两个年龄段患者瘢痕组织中神经纤维密度差异无统计学意义.瘢痕的年龄段差异可能是神经系统 以外其他因素作用的结果. 【关键词】瘢痕;神经丝蛋白;蛋白基因产物;神经构筑;年龄 【中图分类号】R641【文献标识码】A【文章编号】1002—266X(2006)14—0017-02 Abstract:Objective:Toevaluatetheeffectofageontheinnovationcharacterofnervesinscarti ssues. Methods:SpecimenstakenfromscartissuesandnormalskinswerestainedwithHEanddetect edbyusing monocloneantibodyforimmunofluorescence.Results:Therewerenodistinctlinkbetweent heexpressionof NFPandPGP9.5inscartissuesandtheageofpatients.Conclusion:Otherelementsmayplayi mportantrolesin theformingofscar. Keywords:scar;NFP;PGP9.5;innervation;agefactor 以往对瘢痕组织中神经构筑的研究主要集中在 对瘢痕组织与正常皮肤或早期(<6个月)瘢痕与晚 期(>6个月)瘢痕的神经纤维数量进行比较.2005 年3月~2006年1月,我们利用HE染色,免疫荧光 染色观察了2O岁前后患者瘢痕及正常皮肤组织神 经纤维在神经丝蛋白(NFP),蛋白基因产物(PGP 9.5)标记后的组织形态及阳性达数目,旨在探讨 年龄对瘢痕组织中神经构筑的影响. 1材料与方法 1.1标本来源及分组26份瘢痕组织标本取白头 面颈部外伤后1,20a来我院行整形手术的26例患 者(无其他皮肤病史).创伤后1,9a14份,>9a12 份,每份又分为?2O岁和>2O岁两组.取手术所需 供皮区全层皮肤标本作为正常对照(n一5). 1.2标本处理标本采集后,保存,立即切成 1.0cm×1.0cm的组织块,在液氮罐中保存,标记.将 组织块放人恒温冰冻切片机内切片,每份组织块取3 张切片,共生成3套切片.一套切片立即做HE染色, 普通光学显微镜观察组织形态;余两套切片在室温 放置15,30min,人4C纯丙酮固定10min,PBS冲 [基金项目]山东省自然科学基金资助项目(Y2002C29) ?通讯作者 洗,1次/5min,冲洗3次. 1.3抗体准备与免疫荧光将一抗和荧光二抗原 液在推荐工作浓度内,通过抗体滴度试验确定最佳 浓度.切片擦干,滴加1O正常山羊血清,室温下湿 盒中孵育20min.倾去血清,勿洗,擦干,滴加5O, 100vl的稀释一抗(两种一抗分别购自ABCAM和 NovoCastra公司),放人湿盒,4'C过夜.PBS冲洗,1 次/5min,冲洗3次,擦干.在避光条件下滴加1,2 滴FITC标记的兔抗鼠IgG二抗(SBA公司产品), 放入湿盒,37C孵育4O,50min,取出后PBS冲洗,1 次/5min,冲洗3次.加人封片剂(Euroimmun公司) 封固,置于荧光显微镜下观察组织形态,通过leica DFC320采集图像,leicaIM5O软件保存图像. 1.4阳性判断及图像切片处理后于荧光显微镜 下观察(光源为汞灯,波长约500nm),FITc被激发 出翠绿色荧光,为NGF和PGP9.5染色阳性.利用 形态软件,进行半定量分析,计数阳性神经纤维 数目,SPSS软件包进行数据统计学处理,采用完全 随机设计两样本均数比较的非参数检验统计方法. 2结果 2.1正常皮肤普通光学显微镜下表皮较薄,且形 状扭曲多变,厚度变化较大.表皮钉脚较多,且深人 真皮组织.真皮中可见乳头层和网织层,网织层以大 】7 量胶原纤维为主,可见各种皮肤附属器.荧光显微镜 下,神经纤维发出明亮的翠绿色荧光,数量较多,分 布均匀,粗大的神经柬少见.真皮内的神经纤维走行 于胶原纤维间,绝大部分以神经束形式出现,形状较 规则,在毛囊和微血管周围可见神经纤维包绕,微血 管周围可见伴行的神经柬. 2.2瘢痕皮肤普通光学显微镜下表皮随伤后时 间延长从薄逐渐增厚,超过正常皮肤,而后又逐渐变 薄,直至恢复到正常皮肤厚度,表皮厚度较均一,变 化不大,基底层黑色素细胞的数量开始时少于正常 皮肤,10a后超过正常皮肤.表皮钉脚较少且浅.真皮 中可见乳头层和网织层,乳头层的乳头数量少于正 常皮肤的数量.网织层胶原纤维粗大,杂乱,附属器 数量较少,血管丰富.荧光显微镜下,神经纤维发出 翠绿色荧光,神经纤维分布不均,大的神经束多见, 走行于胶原纤维之间,形状不规则,走行扭曲,在毛 囊和微血管周围可见神经纤维,神经束.伤后1,9a, 瘢痕组织中的神经纤维维持在较低的水平.9a后出 现上升改变,而后逐渐恢复到正常皮肤水平.创伤后 l,9a,瘢痕组织中神经纤维的数目明显低于正常皮 肤(P<0.01).>9a神经纤维数目基本恢复到正常 水平.?2O岁和>2O岁患者瘢痕组织中神经纤维的 数目比较,P>0.05. 3讨论 以往研究发现,瘢痕组织中的神经纤维束明显 多于正常皮肤组织.亦有报道,在烧伤创面愈合后7 个月,瘢痕的神经纤维少于正常皮肤. 本实验表明,创伤后l,9a,瘢痕组织中的神经 纤维数目明显少于正常皮肤组织,这一时期,患者的 瘢痕组织大多开始软化,萎缩,痛痒症状减轻,感觉 减退;9a以后瘢痕组织中的神经纤维数目基本恢复 到正常水平,外观亦无明显变化,痛痒症状消失,感 觉开始恢复.有人认为,P物质(SP)可引起急性神经 源性炎症反应和神经纤维的增生,从而形成瘢痕愈 合[1].另外有实验证实,在增生性瘢痕组织中,可调 节SP活性的中性肽链内切酶活性明显受到抑制[2]. 我们推测,由于外周神经系统可以释放SP等皮肤神 经炎性介质以及各种生长因子,因此创伤后l,9a 明显低于正常的神经纤维可造成神经炎性介质及各 种生长因子减少;加之中性肽链内切酶活性恢复,则 进一步抑制了SP的活性,瘢痕开始减轻. ,—.+.+, ;欢迎 山东医药2006年第,16卷第l4期 McArthur等在1998年就指出人种,性别,身 高,体重的差异并没有造成正常皮肤组织中表皮神 经纤维密度的差异;20岁以前神经密度要比2O岁以 后高,但差异没有统计学意义j. 增生性瘢痕和正常皮肤中,I,?型胶原纤维是 主要构成部分.形态学提示胶原纤维直径与I/?型 胶原的比例呈负相关_-4].有实验表明,?2O岁患者瘢 痕组织中I/?型胶原的比例明显高于2O,50岁患 者,最终导致增生性瘢痕的形成[5j.表明年龄通过影 响胶原比例而对瘢痕形成发生作用.我们在实验中 发现,同一部位,相同创伤时间后的瘢痕组标本中神 经纤维的数目在?2O岁和>20岁的差异无统计学 意义.提示在促使瘢痕形成的诸多因素中,神经因素 只是其中一种,成纤维细胞表面I型和?型TGF—B 受体增高,使TGF—B作用放大[6],各型TGF—p比例 失调,肿瘤坏死因子缺乏以及白介素,成纤维细胞生 长因子及其受体,表皮生长因子及其受体等多种炎 性介质及生长因子,受体的表达和分泌的异常均能 造成创面的异常愈合.因此,2O岁前后两个年龄段外 伤患者瘢痕组织中各型胶原比例的失调不是神经因 素的作用,而可能是其他多种因素综合作用的结果. 我们的实验结果是建立在外伤后1,20a头面 颈部瘢痕的基础上,可以解释临床上一些患者出现 的症状,促进神经构筑在瘢痕形成中作用的研究.但 在时间和部位方面都还不全面,尚需要进一步实验 支持. 【参考文献】 [13谢江,赖西南.李华强.王丽丽.向德兵.神经纤维在胎兔皮肤无瘢 痕愈合中的变化[J].重庆医学,2003,32(9):1208—1210. [23ScottJR.MuangmanPR.TamuraRN,eta1.SubstancePlevels andneutralendopeptidaseactivityinacuteburnwoundsand hypertrophicscarI-J3.PlastReconstrSurg.2005,115(4):1095- llO2. [3]McArthurjc,StocksAE,HauerP,eta1.Epidermalnervefiber density.Normativereferencerangeanddiagnosticefficiency[J]. ArchNeurol.55:1513—1520. [43LinaresHA.Fromwoundtoscar[J].Burns,1996,22{339—352. [53邱林,金先庆,向代理,等.不同年龄烧伤患者增生性瘢痕的胶原 构成及影响因素的研究[J].中华烧伤杂志,2003,19(4):89—91. [6]郭能强,张一鸣,辛时林.I型和I型TGF—p受体在人增生性瘢 痕和瘢痕疙瘩中表达的研究[J].同济医科大学,2001,30 (5):457. (收稿日期:2006—03—20) 投稿,欢迎订阅山东医药
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