【doc】低强度He—Ne激光与丹参注射液联用对牛中性粒细胞呼吸爆发的影响

【doc】低强度He—Ne激光与丹参注射液联用对牛中性粒细胞呼吸爆发的影响 低强度He—Ne激光与丹参注射液联用对牛 中性粒细胞呼吸爆发的影响 2003年2月 Feb.20o3 华南师范大学(自然科学版) JoURNALOFSOUTHCHINANORMALUNIVERSITY (NATURALSCIENCEEDITION) 2003年第1期 No.1,2003 文章编号:1000—5463(2003)01—0115—04 低强度He—Ne激光与丹参注射液联用对 牛中性粒细胞呼吸爆发的影响 李艳玲,角建瓴,刘承宜.,刘颂豪 (1.华南师范大学信息光电子科技学院,广东广州510631;2.暨南大学中医学系,广东广州510632; 3.华南师范大学激光运动医学实验室,广东广州510631) 关键词:低强度He—Ne激光;丹参注射液;中性粒细胞;呼吸爆发 中图分类号:Q631;Q6文献标识码:A EFFECI'soFLOWD[ENSnYHe—NeLASER?UnONCOM口ElDED,rnI SAI,?A,皿nORR?ZA?CmONON11}?RESPIRATORYBURSTOF BoVDENI?oP】唧LS hao LIYah—lingI,J/AOJian—lin,LIUCheng—yi,LIUSong— (1.CollegeofInfomaationandOptoelectronicScienceandTechnology,SouthChinaNormal University,Guangzhou510631,China; 2.DepartmentofTraditionalChineseMedicine,JinanUniversity,Guangzhou510632,Chin a; 3.1aboratoryofLaserSportMedicine,SouthChinaNommlUniversity.,Guangzhou510631 ,China) Abstract:Neutrophilscangenerateoxygenfreeradicalsbyrespiratoryburst,Oxygenfreeradi— calsinjuryisoneoftheimportantreasonsofischemiaandanoxemia.LowintensityHe—Ne laserirradiationcombinedwithSalviamiltiorrhizainjection(SM)Cantreatischemiaandanox- emiawellinclinic,butthemechanismremainsobscure.Primarystudyoncellularlevelis needed.Inthepaper,theeffectsoflowintensityHe—Nelaserirradiation,SM,andthecon- binationoflowintensityHe——NelaserirradiationandSMontherespiratoryburstofbovine neutrophilsareexamined,respectively.Inthestudy,He—Nelaser,SMorthecombinationof He—NelaserandSMallCaninhibittherespiratoryburstofneutmphilsevidently.Theeffect ofthecombinationoflaserandSMismoremarkedthanthatofonlylaserorSM.Theseresuhs canhelptounderstandthemechanismofischemieinjury. Keywords:lowintensityHe—Nelaser;Salviamiltiorrhizainjection;neutrophil;respiratory btlrst 收稿日期:2OO2—02—16 基金项目:国家自然科学基金(60178003,6027812);广东省自然科学基金团队项目 (20003061)和重点项目(20011480);激光技 术国家实验室开放基金以及广东省"千百_I_程"优秀人才培养基金(Q02087) 作者简介:李艳玲(1977一),女,广东韶关人,华南师范大学2000级硕士研究,;角建瓴 (1970一),女.四川1人,暨南大学讲师, 博1:;刘承宜(1963一),男,四川人,华南师范大学教授.博士,从事激圯医:而的研究. 为了探讨低强度He—Ne激光与丹参注射液联合作用在细胞水平的生物效应,本 文应用 粒细胞的化学发光法[]检测了单用低强度He—Ne激光或丹参注射液,低强度He —Ne激光与 丹参注射液联用对中性粒细胞呼吸爆发的影响,以进一步探讨其抗缺血,缺氧性损 伤的机制. 1材料和方法 1.1材料 趋化三肽(N—formyl—methionyl—leucyl—phenylalanine,f1?LP),鲁米诺(5一amino一2,3一di— hydro一1,4一phthalazinedione,Lumino1),DextranT一500均购自Sigma;淋巴细胞分离液购自上海 华精生物科技有限公司;HEPES购自华美生物工程公司;丹参注射液购自上海第一制药厂. PBS(Phosphatebalancedsaltsolution,不含 Ca2,M,pH7.2),HBSS(Hanks'balancedsaltsolu— tion,不含Ca2,Mg,添加10mr~l/LHEPES和4mr~l/LNaHCO3,pH7.4). 1.2中性粒细胞的分离纯化 取健康牛外周血,肝素抗凝,经淋巴细胞分离液(Fic0U—Hy1)aque)密度梯度离心,中分子右 旋糖酐(相对分子质量70000,Phannacia)沉降,分离纯化获得PMN,用双蒸水低渗除去残存红 细胞.PMN悬于HBSS液中,瑞氏染色法检验纯度大于98%,台酚兰检验细胞活性大于95%. 调整细胞含量(1×106个/mE)后置冰浴待用. 1.3鲁米诺增强的PMN化学发光测量 1.3.1低强度He—Ne激光对PMN呼吸爆发的影响 将悬于HBSS液的PMN分别用40,200,1000,2000,3000,6000J/m2的He—Ne激光照射, 并设空白对照组(不照激光).处理完毕后,加人Luminol(终浓度为5/xmol/L),再加人刺激剂 l1?(终浓度为20/xmol/L),立即放人中国科学院生物物理所研制的高灵敏度单光子计数型超 弱发光测量仪_2J,37恒温连续检测发光强度. 1.3.2丹参注射液对PMN呼吸爆发的影响 将悬于HBSS液的PMN分别用4,8,l2,16止的丹参注射液37?水浴预孵育10min,后用 HBSS洗两次.并设对照组(不加丹参注射液).处理完毕后,加人Inminol(终浓度为5tanol/ L),再加人刺激剂f1?LP(终浓度为20/xmol/L),同上测量. 1.3.3低强度He—Ne激光与丹参注射液联合作用对PMN呼吸爆发的影响 将悬于HBSS液的PMN分为4组:(1)对照组(不加丹参注射液;不照激光);(2)He—Ne激 光照射(剂量为1000J/m2);(3)丹参注射液(8ttL)预孵育10min;(4)丹参注射液(8L)预孵 育10min+He—Ne激光照射(剂量为1000J/m2). PMN与丹参注射液37?水浴振摇10min,后用HBSS洗两次,然后进行He—Ne激光照 射.处理完毕后,加人hnninol(终浓度为5,anol/L),再加人刺激剂fMLP(终浓度为20/maol/L), 同上测量. 1.4数据处理 文中实验数据均表示为mean?SEM,并采用f测验中的成对数据比较法进行统计分析,P <0.05为有显着差异. 116 2结果与分析 如图1和图2所示,低强度He—Ne激光,丹参注射液,低强度He—Ne激光与丹参注射液 联用均能明显降低受激PMN的化学发光值,低强度He—Ne激光与丹参注射液联用时对PMN 化学发光的抑制效应比单独使用低强度He—Ne激光或丹参注射液的效应要更明 显.与对照 组相比,He—Ne激光照射(剂量为1000J/m2),丹参注射液(8)预孵育10min及He—Ne激 光与丹参注射液联用等处理均能明显抑制PMN的呼吸爆发(P<0.001).另外,将上述3种处 理的结果之间作t一检验,结果均有显着差异(P<0.01). 3讨论 芒 MN化学 图2低强度He—Ne激光与丹参注射液联用对P 发光的影响(代表性原始实验曲线) 1.对照组(不加丹参注射液;不照激光), 2.He—Ne激光照射(剂量为1000J/m2), 3.丹参注射液(8止)预孵育10min, 4.丹参注射液(8ILL)预孵育10min+He—Ne激光照射 (剂量为1000J/m2) Fig2EffectsoflowintensityHe—Nelaserirradiation combinedwithSalviamilfiorrhizainiectionon山eehemilumi. nescenceofPMN.(Oneoftheoginaldataisshown) 1.contro12.He—Nelaserirr"adiationatadoseof1000 J/,3.culturedinSalviamiltiorrhizainjection(8t,L)for 10minutes.4.culturedinSalviamiltiorrhizainiection(8 ILl)for10minutesthenHe—Nelaserirradiationatadose of1000J/m2 在IJP的刺激下,PMN产生呼吸爆发,不同剂量的低强度He—Ne激光可以对PMN的呼 吸爆发产生抑制或增强的效应.根据刘承宜等3提出的激光生物效应的信息转换模型 (BITML):在不引起损伤的前提下,当激光的剂量超过一定域值,其产生的生物效应使信使的 浓度超过一定的域值,这个时候系统内部的平衡机制会使激光所启动的信使系统转换成与现 有系统相拮抗的信使系统.根据激光生物刺激作用的信息生物模型(BIML)L4J:低强度激光的 生物效应是低强度激光信号通过细胞膜表面处于相干态的某一类受体(称为集合受体)物理放 117 K儿K O5O5 2?? 0c00?uc—LuIlLuLIU ?\籁 大,和相继的细胞膜受体介导的第二信使的生物放大两次级联放大实现的. 丹参注射液与低强度激光配合使用后效应产生协同作用,并存在一最佳配合使用剂量. 本实验中8fL的丹参注射液与l000J/m2的He—Ne激光联合作用抑制PMN呼吸爆发的效果 较佳,且比He—Ne激光或丹参注射液单独作用的效果都要明显(P<0.01).这可能是由于丹 参注射液中的分子在PMN细胞膜上的受体与He—Ne激光在PMN细胞膜上的集合受体不同, 因而两者的效应产生了协同作用. 本文利用化学发光法研究了低强度He—Ne激光与丹参注射液联用对中性粒细胞呼吸爆 发的影响,发现低强度He—Ne激光与丹参注射液联用能够抑制PMN的呼吸爆发,并且两者的 效应具有协同作用.表明低强度He—Ne激光与丹参注射液联用能够共同抑制PMN氧化代谢 产生的氧自由基,从而对心脏和脑组织具有保护作用.这为临床治疗缺血,缺氧性心,脑血管 疾病提示了,新的路子,并且为治疗炎症,肿瘤等病症时抑制中性粒细胞的过激反应也提供了新 的方法. 参考文献: 【1JCLAESD,ANNAK.Respiratoryburstinhtunanneutrophils[J].JImmuMethods,1999 ,232:3—14. [2]BEIL,HuTH,QLZM,eta1.Extracellularca2regulatestherespiratoryburstofhumanneut rophils[J].ceu Signal,1999,11(5):355—360. 【3]LIUTCY.Biologicalinformationmodeloflowintensitylaserforlaserbiostimulation[J] .LaserSSurgMed,1999, Sl1:4. [4]刘承宜,李学梅,罗刚跃.低强度暖色激光的生物效应[J].中国激光医学杂志.1999,8(3):182—184. (上接第109页) 3结论 【责任编辑黄玉萍】 综上所述,本文根据化合物正常混点死,常温液体比重d,相对分子质量和分子中相对 原子质量A,提出了一种新的临界压缩因子的估算关联式 Zc=ao+all+a22+a3{+a4i (l=死1A3,2:~MK6A7). 应用正交设计法和回归分析法对参数估值得到的关联式的估算精确度明显优于前人方 法.而且计算方便,适用范围广,是值得推广使用的一种临界压缩因子估算方法. 参考文献: [1]田方仁.SRK状态方程参数的研究[J].石油4tI高等学校,1999,12(4):45. [2]郑大庆.改进SRK方程提高正构烷烃饱和蒸汽压和液体体积预测精度[J].化工,1997,48(2):221. [3]张宝义,王乃绪.推算非烃有机物临界压缩系数的新关联式[J].应用科学,1990,8(3):278—282. [4]卢焕章.石油化工数据手册[M].北京:化学工业出版社,1982. [5]马沛生.石油化工基础数据手册(续编)[M].北京:化学工业出版社,1993. [6]6REIDRc,PRAUSNJM.ThePropertiesofGa.~sand"d[M].4thed.NewYork:McGraw Hill,1987. 【责任编辑黄玉萍】 118