管角螺肌肉中性糖蛋白的化学组成及抗肿瘤活性研究

管角螺肌肉中性糖蛋白的化学组成及抗肿瘤活性研究 管角螺肌肉中性糖蛋白的化组成及抗组学 瘤活性究研 《中海洋组物》组志国年第期组第期2020026(9O) 管角螺肌肉中性糖蛋白的化组成及抗组瘤活性究学研 傅余强组组群刘睿方玉春,,, 中海洋大海洋组物食品究所国学与研山组组青(.266003) 摘要目的研体究海洋组组物管角螺肉中糖蛋白的化组成学理化性::Hem,fuSUStuba(Gmelin)~Jt,, 组及抗 组瘤活性方法管角螺肌肉用组水浸提水提取液再组柱组析分.:,DEAE—cellulose,SephadexG-100 离冷组, 干燥得到组中性糖蛋白和组酸性糖蛋白1(NeutralGlycoproteinofH.tuba,NGH)3 (AcidicGlycoproteinof 组组行了组度组组及相组分子组量组定改良的一组硫酸和苯酚酚法组H.tuba,AGH);HPLCNGH,Folin 组糖组蛋白组的含量气相色组法组定糖组成和法定糖组组型确苷组果组均一性组分,,,IRNMR.:NGH, 相组分子组量组其组糖含量组蛋白组含量组糖组成分析表明糖组部分主要由半7.66×10.,89.6,7.2;: 乳糖及少量的甘露糖和葡萄糖组成其物组的量比组及组分析表明其组糖,23.5:2.6:1.0;IRHNMR: 残 基组一型吡喃构初步组理组组表明组小鼠组瘤具有组着的抑制作用a.:NGHs. 组组组管角螺糖蛋白组瘤抑制:;; 中组分组号文组组组献文章组号:R931.74:A:1002—3461(2002)06—0020—05 StudyontheChemicalCompositionAndAntitumorActivityof NeutralGiycoproteinFromthe (Gmelin) MuscleofHemifusustuba FUYu—qiang,GUQian—qun,LIURui,eta1. (MarineFoodAndDrugInstitute,OceanUniversityofChina,Qingdao266003,China)Abstract:AimTostudythechemicalcompositionandantitumoractivityofglycoproteinfrommarinemolluskHemifusustuba(Gmelin).MethodsThemuscleofH.tubcfwasex—tractedbyboilingsaltsolution.TheaqueousextractwaschromatographedonDEAE—cellu—loseandSephadexG-100columns,elutingwithwaterandsodiumchloridesolutiontovieldneutralglycoprotein(NGH)andthreeacidicglycoproteins(AGH),respectively.ThepurityandMWofNGHweredeterminedbyHPLC,thecontentsofsugarandproteinweremeas—uredbyimprovedphenol-sulfuricacidandfolin—phenolmethods.Sugarcomponentwasana—lysedbyGC,IRandNMRwereusedtodeterminetheconfigurationofglycosidicbondofNGH.ResultsNGHwashomogeneousandMwwas7.66×10.Itssugarchainwasconsis— tedofgalactosewithalittleofmannoseandglucose.Sugarcontentwas89.6andprotein was7.2.Themonosaccharideconfigurationwasa—pyranoside.NGHshowedtumor—inhibi— 一tionactivityinvivoonS180bearingmice.Keywords:Hemifusustuba(Gmelin);glycoprotein;tumorinhibition 随学着生命科的组展糖蛋白的重要生物, 活性不被揭示断其中海洋组组物中糖蛋白体, 的组着抗癌活性已引起多者的组注众学目. 前已有组道组组海洋组组物海从体兔组夷扇, 《中海洋组物》组志国年第期组第期20026(9O)组和文蛤中提取的糖蛋白具有明组的抑瘤作 用卜本组组室在组我北方沿海组的组孔国, 扇组组行究组研组组其所含的糖蛋白组小鼠, 组瘤有组着抑制作用组了组更好的找Sl..[; 高效低毒的活性糖蛋白探组其组活性的构与, 组系本文组采自组海域的组组物管角螺青体, 中性糖蛋白组行了初步究研管角螺一.Hemi 属盔螺科组于中近海国stuba(Gmelin),, 可以食用我组首次管角螺肌肉中得到从.1 组中性糖蛋白一(NeutralGlycoproteinofH.tu 和组酸性糖蛋白,NGH)3(AcidicGlycopro. 并重点组道管角螺肌teinofH.tuba,AGH), 肉中性糖蛋白的化组成及组小鼠学组瘤Sls. 的抑瘤活性. 材料方法与1 材料1.1 原料1.1.1 管角螺采自组海域青组组海洋大青学, 水组院王昭萍老组组定组学Hemifusustu—ba(Gmelin). 组器组组与1.1.2 高效液相色组组Waters600E,NICO- 组外光组组IETNEXUS470,BECMAN 紫外光组组DU640,HEWIETTPACK— 气相色组组核磁共振组ARD5890,Varican 作溶组(500MHz,D2O);DEAE—cellulose 鼠(sigma),SephadexC~lOO(Pharmacia),L- 李糖露糖半乳糖肌醇二海组组,I)_,I)_,(J 厂一阿拉伯糖一葡萄糖);L(+),D(+)(Sig— 木糖多糖相组分子组量分ma);D-(Merck), 布组定所用的组准品组系列的TDextran 其余组组均组分析组(Pharmacia),. 组物,雌性昆明组小鼠青1.1.31820g, 组市组组所提供. 方法1.2 管角螺糖蛋白的制组1.2.1 从剥离管角螺中出肌肉部分置高390g21 速组组组机组匀内匀匀组液用的,1O 溶液在水浴上提取次NaC11500mL80”C3,提取液心离合上液并清上液分组用超清,. 组组和透析袋组组脱组再组一组组,.DEAE 素柱用蒸组水和,溶,02.0mol?LNaC1液组性洗脱紫外组组出峰波组分,,220nm,组得到和?粗提物将NGHAGHI,U,. 通组柱组一步分离NGHSephadexG-lOO, 组化冷组干燥得到白色粉末引,I. 法组组度和相组分子组量1.2.2HPLC 色组件条色组柱:UltrahydrogelLinear 流组相,柱BlendXZ,:0.1mot?INaNO3,温?池温?流速:45,:37,:0.9mL?rain, 组组量先组出组准品一:2OL;T2000,T— 一一一和一等系列葡聚糖llO,T8O,T7O,T4OT2O的保留组组以公式,,Kav:(Ve—V.)/(Vt 组算出组组的然后以V.)Kav,logMw—Kav作组得组准曲组求得组品的相组分子组量,. 紫外光组和组外光组分析1.2.3 将组品溶于蒸组水中在10mg3mL, 组紫外组描组外光组组定采190~800mm. 用组化组组片法在,之组组,4004000cm描引,. 蛋白组含量组定1.2.4 采用一法酚以牛血蛋白组组清Folin], 准作组准曲组牛血蛋白用组氏定法组清氮, 定蛋白组的含量. 糖含量组定1.2.5 采用改良的一硫酸法苯酚u... 糖组成分析1.2.6 加三乙酸氟NGH10mg2mol?I. 封管后在?水解冷却(TFA)1.5mL,l1O3h,后组抽去减用组色组法组组水TFA,(PC) 解组物展组组组乙酸乙组一组一醋酸一水吡,(5 苯胺苯一组二甲酸组组组色剩:5:1:3),. 余组品用组原反组加减组NaBH.,MeOH,抽干以除去硼酸根组干燥后加.PO1. 吡组一乙酸组于?反组加5mI(1:1)1002h,组除去组量组组所得乙组化衍生物溶于, 《中海洋组物》组志国年第期组第期2220026(9O) 气相色组分析CHcl.,(GC)ll1j. 核磁共振分析1.2.7(NMR) 用重水作溶组组行核磁共振组(D0), 组分析引|1. 抗组瘤活性组组副1.2.8l_1 昆明组小鼠只随机分成组每组40,5, 只除空白组外其余小鼠均在右腋下接组8,, 瘤株治组组分组组组S...20,40 空白组和模型组注射生理组水mg?kg,, 组照组注射组组组磷胺从接组20mg?kg. 组瘤后第天组始腹腔注射组组组组组组2, 停组后隔日组死小鼠剥取瘤组脾和胸7d,,, 腺称重组算抑瘤率脾指数数和胸腺指组,,. 组组果做组组t. 组果组组与2 管角螺中性糖蛋白的化组成及理化学2.1 性组 组品制组2.1.1 管角螺糖蛋白的提取分组化流离程如组 所示用蒸组水洗脱一组组素柱得1.DEAE 到一组组的组峰组再通组一(2),SephadexG 柱组一步组化冷组干燥得1O0,NGH6. 得率糖蛋白的提取受温度97g,1.74., 组和组组度等因素的影响组大本组组pH 采用?溶液组提具有组高的80,10NaC1 组率. Museleoftuba lhomogenized ??Iextractedby10%NaCIsolutioninhotbath.tFiglPreparationofNGH,AGH,AGHandAGH 组度和相组分子组量组组组组外光组在,组描2.1.2(4);4004000cm, 组组组分布均的组一峰匀流出组示具有糖蛋白的一般特征吸收组HPLC,NGH(组组如组所示组照组准曲组组得组组中在附近有强吸收3,NGH5),IR,3420cm,相组分子组量组示有一的一组伸组振组766,740.OH0H,2930cm组准曲组一附近有中强吸收示有组的伸组振组:lgMw:0.459RT+13.012,C—H,一附近有强吸收示有组组的胺R0.9984.1640cm,C: 紫外光组和组外光组分析组伸组及组的组角振组在2.1.30N—H.NGH 分析在附近组强吸收一组组有UVNGH20Onto1154cm,1082cm_.,1024cm3《中海洋组物》组志国年第期组第期20026(9O)23.JFig2DEAE-celluloseElutionspectrumofNGH n Fig3HPLCspectrumofNGH Wavenumbers(cm.) Fig4UVspectrumofNGHFig5IRspectrumofNGH个吡喃强吸收峰提示组成的组糖可能组组组构在有吸收峰在附近;851cm,890cm无吸收峰示多糖以一糖组组接苷,a. 蛋白组糖含量组定2.1.4, 组照糖及蛋白组含量的组准曲组组算, 出的蛋白组含量组糖含量组NGH7.29/6, 主要由糖组成含有少量的89.6.NGH, Fig6GCspectrumofNGH1Man,2Glc,3Ga1. IlJ?IHJ408.O0q0Jl2ll1280 fMinure’ Fig7GCspectrumof7standardmonosaccharose 1Rha,2Ara,3Xyl,4Man,5Glc,6Gal,7Inosito1. 蛋白组. 糖组成分析2.1.5 组相色组分析气与组准糖的组NGH, 组组行组照的糖组部分主要由半乳,NGH 糖组成另外组含有少量甘露糖和葡萄糖,.组照峰面组组算其摩组比组23.5:2.6:1.组果如组所示0,6,7. 分析2.1.6HNMR 的组中可组到半乳糖端NGHHNMR, 基组子信号组甘露糖端基组子信号35.360; 组在糖的组中端基组子35.185.HNMR, 信号在以下的一般组一型构在35.0B,35.0以上的一般组一型构与献断文组照推半乳a, 糖和甘露糖基组残一型吡喃与组外光组分a, 析一致半乳糖端基组子信号强度组大于甘. 露糖端基组子信号与其含量大小有组葡萄,,糖端基组子信未能号组组出可能是因组含量太低其组的它号信堆组在一起组以组属.,. 抗组瘤活性2.1.7NGH 组组行抗组瘤活性组组体内组NGH, 组组果组表1. 《中海洋组物》组志国年第期组第期2420026(9O)由表可以看出在低组量1,NGH(2O 有组着的抑瘤作用抑瘤率组mg?kgl1), 作用强弱与磷胺组组组组相似而在高组51.0,, 量组抑瘤效果明组降低近年究表明研多.,糖及以多糖组主的一组组物是组瘤抑制组.具有免疫组组作用它体一般是通组提高机, 的免疫功能而组组抑瘤作用组组物组在机, 体内双往往起向组组作用其作用强弱与组, 量大小不呈组性组系而存在个最佳抑瘤,1 组量的最佳抑瘤组量及其作用机理,NGH 有待组一步深入研究. TablAntitumoreffectsofNGHonSl8omiee(x?s)注模型组:**P<O.01735 糖蛋白广泛存在于自然界中是一组具, 有多组生物活性的大分子它构在组上主要, 由蛋白组和糖以糖组组接苷近年着组来随. 胞生物和分子生物的组展学学科学家组组, 组糖组化合物特组是糖组合物中的糖组参与 了各组生命组象的组组如组胞组组信号组,, 组免疫与组答组胞组化分化和反分化等,,, 都与糖组的作用有组糖蛋白的组多功能也, 是在糖组的下参与完成的在有的情况下糖, 组的作用甚至更直接更突出我组的究研,. 表明管角螺肌肉中的中性糖蛋白具有组瘤抑 制活性分子中糖组占主要部分组糖,NGH, 组是由半乳糖及少量甘露糖和葡萄糖组成, 推组的活性主要是由其糖组部分引起NGH 的组其糖组组及其活性组系目前构正在深, 入研究中. 参献考文 L1]KamiyaH.Studiesonbioactivemarinemetabolltes-?characterizationoftheantibacterialandantineoplasticglycoproteininaseahareAplyslajuliana[J].Nippon$1g—isanGakkaishi,1988,54(5):737. [2]KisugiJ.Biopolymersfrommarineinvertebrate.X.modeofactionofanantibacterialglycoprotein.aplysianinE,fromeggsofaseahare.Aplysiakurodal[J].Chem.Pharm.Bul1.,1989,37(11):3050. 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