抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫毒力的影响及对乙酰胆碱酯酶的诱导作用

抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫毒力的影响及对乙酰胆碱酯酶的诱导作用 抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫毒力的 影响及对乙酰胆碱酯酶的诱导作用 昆虫』4cEntomologicaSinica,December2003,46(6):691—696ISSN0454—6296 抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫毒力的影响 及对乙酰胆碱酯酶的诱导作用 刘波,高希武,郑炳宗 (中国农业大学昆虫学系,北京100094) 摘要:辛硫磷,马拉硫磷和灭多威3种抗胆碱酯酶剂亚致死剂量(LD,.)预处理棉铃虫Helicoverpaarmigera3龄幼虫24h后, 对辛硫磷,马拉硫磷,灭多成,溴氰菊酯和高效氯氰菊酯5种杀虫药剂的毒力影响有明显差异.酶动力学研究表明:在48 h内,辛硫磷亚致死剂量对棉铃虫乙酰胆碱酯酶比活力有一定的抑制作用,24h仅为对照组的0.56倍;马拉硫磷,灭多威 则可以诱导乙酰胆碱酯酶的比活力增加.诱导最大值时间分别为3h和12h.通过对米氏常数(K)值分析表明,辛硫磷 诱导48h内对乙酰胆碱酯酶与底物亲和力的影响不大,马拉硫磷,灭多威诱导48h内乙酰胆碱酯酶对底物亲和力有所下 降,其中灭多威诱导组最为明显?3种药剂亚致死剂量处理24h后.通过蔗糖密度梯度离心表明5%蔗糖梯度层乙酰胆碱酯 酶分布百分数明显高于对照组,而20%蔗糖梯度层却明显低于对照组,说明亚致死剂量处理可能引起乙酰胆碱酯酶分子型 及不同分子型分布比例的变化. 关键词:棉铃虫;乙酰胆碱酯酶;抗胆碱酯酶剂;毒性;亚致死剂量 中图分类号:Q965.9文献标识码:A文章编号:0454—6296(2003)06—0691—06 Effectsofsublethaldosesofanticholinesteraseagentsontoxicityofinsecticidesand theirinductiontoacetylcholinesterase(ACHE)activityinHelicoverpaarmigera LIUBo,GAOXi—wu,ZHENGBing— Zong(DepartmentofEntomology,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing 100094,China) Abstract:Effectsontoxicityofinsecticidesbysublethaldosesofanticholinesteraseagents(phoxim,malathionand methomy1)andtheirinductionofAChEspecificactivity,theMichaelisconstants(K)wereinvestigatedinthelarvaeof thecottonbollworrn,Helicoverpaarmigera(Htibner).Theresultsindicatedthattoxicityoffiveinsecticideshadsignifi— cantdifferencesat24hoursaftertreatments.TheAChEspecificactivityofcottonbollworrnwasmoderatelydepressedat 24hoursaftertreatmentwithLDIoofphoxim.Thetime— coursestudyrevealedthatthemaxinmminductionofAChEspe— cificactivitybymalathionandmethomylwasobservedat3hand12haftertreatment.resultingina1.45一foldand1.92一 f0ldincreaseofAChEactivity.respectively.ThesublethaldoseofphoximhadnoeffectontheaffinityofAChEtoward acetyhhiocholinein48hoursaftertreatment,butAChEaffinitiesweresignificantlyreducedaftertreatmentwithLDll】of malathionandmethomy1.ThedensitygradientcentrifugationshowedthatthedistributionofAChEactivityinthe5%gra. dientlayerwashigherthanthecontrolat24hoursaftertreatmentwithsublethaldosesofanticholinesteraseagents,but lowerinthe20%gradientlayer.Itwasinferredthattreatmentofsublethaldosesmaycausethechangesinmolecular formsandthedistributionofdifferentmolecularforillsofAChE. Keywords:Helicoverpaarmigera;acetylcho? nestemse;anticholinesterase;toxicity;sublethaldoses 杀虫剂施用于田间后,除了对害虫的直接杀死 作用外,随着时间的推移以及个体接触药量的差 异,对部分个体还存在着亚致死效应,对生殖力, 生长发育,行为和抗药性等都会产生不同程度的影 响(Nemoto,1993;Perveen,2000),并且对生物体 内重要靶标酶和代谢酶系亦有不同程度的影响(高 希武等,1997,1998). 乙酰胆碱酯酶(AChE,EC.3.1.1.7)属水解 作者简介:刘波?女.1973年10月生.中国农业大学昆虫学系博士研究生.主要从事 昆虫毒理学的研究. E-mail:libobj@s0h.c. *通讯作者AuthorhcorrespondemE-mail:gaoxiwu@263.net 收稿日期Received:2002.12—20;接受日期Accepted:2003.04—15 692昆虫AcEnto,f.g.Sinicn46卷 酶,在神经传递过程中执行重要的生理功能外,也 是有机磷和氨基甲酸酯类药剂的靶标酶(Siegfried 接触杀扑磷2mg/L剂量 andScott,1990).据报道, 5天的鲤鱼(CyprinuscarpioL.),心脏和骨骼肌的 AChE比活力下降77%一92%(Szeglleteseta1., 1995).用甲基对硫磷和谷硫磷亚致死剂量处理 MicromustasmaniaeWalker和ChrysoperlacarneaSte— Dhen两种草蜻蛉24h,AChE受到不同程度的抑制, 前者AChE的抑制率随着杀虫剂浓度的增加而呈指 数增长,而后者幼虫AChE活性只受到极小的抑制 (Rumpfeta1.,1997). 棉铃虫Helicoverpaarmigeia(Htibner)是世界性 的重要害虫之一,目前仍以化学防治为主,有机磷 和氨基甲酸酯是两类使用最多的杀虫剂.许多研究 表明,棉铃虫已对这两类杀虫药剂产生了抗性 (Kayeta1.,1983;Armeseta1.,1992).但有机磷 和氨基甲酸酯类抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫 AChE的影响及与抗性发展的关系还未见详细报道. 本研究目的在于阐明辛硫磷,马拉硫磷和灭多威3 种药剂亚致死剂量对棉铃虫AChE生物化学和毒理 学性质的影响,为杀虫药剂的合理使用及棉铃虫抗 药性治理提供理论依据. 1材料和方法 1.1供试药剂 99%辛硫磷(phoxim)品,天津农药厂产 品;92.3%马拉硫磷(malathion)原药,辽宁葫芦 岛农药厂产品;80%灭多威(methomy1)原药.山 东济宁化工厂产品;95.2%高效氯氰菊酯(8. cypermethrin)原药,天津龙灯化工厂产品;98%溴 氰菊酯(dehamethrin)原药,浙江威尔达化工有限 公司产品. 1.2试剂及仪器 5,5.二硫双硝基苯甲酸(DTNB),Roth公司 产品;碘化硫代乙酰胆碱(ATCh)和考马斯亮蓝 G250,Fluka公司产品;TritonX.100,上海化学试 剂采购供应站美国进口分装;牛血清蛋白和蔗糖, 分析纯,为国内相关厂家生产. HimacCR22E高速冷冻离心机,HimacCP808 超速冷冻离心机(日本HitachiKoki公司),Bio40 紫外.可见分光光度仪(美国PE公司). 1.3试虫来源及饲养 棉铃虫采自河北邯郸地区,实验室内已人工饲 养50代左右,未接触任何药剂.饲养温度为(26 ?1)cc,湿度为70%,80%,光照(IdD)为16/8. 1.4生物测定方法 选用12mg?2mg的棉铃虫3龄幼虫作为试虫. 避免使用刚脱皮或快要脱皮的幼虫.采用毛细管点 滴法将0.1398L药液点在幼虫胸部背面.供试药 剂用丙酮稀释成5,7个浓度,每个浓度处理3个 重复,每个重复用10头幼虫.以丙酮处理作对照. 处理后的幼虫单头放入装有人工饲料的指形管中, 在(26?1)?培养48h后检查死亡率.以解剖针 轻触虫体,无反应者为死亡.对照死亡率小于5% 为有效测定.用POLO软件进行统计分析,计算 LD值等. 1.5AChE活性测定 1.5.1试虫处理:取统一标准的3龄幼虫,分别 用辛硫磷0.0410g/头,灭多威0.0795g/头,马 拉硫磷0.227g/头的LD剂量点滴幼虫后,各组 均于第3,6,12,24,48h后取样,于一20cc冷冻 保存备用.对照组用0.1398L/头丙酮处理,其他 条件同药剂处理组. 1.5.2酶液制备:各处理均取棉铃虫幼虫50头, 先剪取头部,再加预冷的含0.1%TritonX.100(W/ V)的0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)进行匀浆, 匀浆液(12头/mL)在4cc下用10000g,离心20 min,取上清液作为酶源. 1.5.3AChE活性测定:采用Gorun等(1978)改 进的Ellman等(1961)的方法.取待测酶液0.1mL 与0.1mL底物(ATCh,10mmol/L)混匀,置于 30~C水浴中反应15min,加入0.9mL显色剂(DT. NB,15mmol/L),终止反应并显色.30min内在 412am处测定光密度值,重复3次. 1.5.4米氏常数(K)值测定:用0.1mol/L磷酸 缓冲液(pH7.5)将底物(ATCh)稀释成不同的浓 度,分别测定AChE的反应速度,用Enzifit软件计 算K值. 1.6AChE的蔗糖密度梯度离心 用含0.5%TritonX.100及1mmo1/LEDTA的磷 酸缓冲液(pH7.5),等体积配制成5%,10%, 15%和20%(g/mL)蔗糖梯度溶液.在配好的蔗 糖梯度溶液上加入1.25mL酶液,在4?下用 105000g(34000r/min)离心16h.由下向上依 次从20%,15%,10%,5%蔗糖梯度层和上清层, 分层收集试样用于测定. 6期刘波等:抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫毒力的影响及对乙酰胆碱酯酶的 诱导作用693 2结果与分析 2.1抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫耐药性的 影响 先用辛硫磷,马拉硫磷,灭多威的亚致死剂量 (LD)处理棉铃虫3龄幼虫24h,丙酮处理作对 照(各处理组试虫存活数如表1所示),再分别测 定存活幼虫对辛硫磷,马拉硫磷,灭多威,溴氰菊 酯和氯氰菊酯等5种杀虫药剂的敏感性变化(表 2).用辛硫磷预处理24h后,对有机磷和氨基甲 酸酯类药剂的敏感性无明显改变,LD为对照组的 0.88,0.98倍,而对氯氰菊酯和溴氰菊酯的敏感性 却明显下降,LD分别为对照组的1.82和2.28倍. 经马拉硫磷,灭多威预处理24h后的棉铃虫3龄 幼虫,对有机磷和氨基甲酸酯类药剂敏感性稍有下 降,LD分别是对照组的1.04,1.41倍.对溴氰菊 酯和氯氰菊酯的互作则各不相同:马拉硫磷诱导后 对溴氰菊酯有拈抗作用,LD是对照的1.26倍; 对氯氰菊酯存在增效作用,LD是对照组的0.39 倍;灭多威诱导后对溴氰菊酯和氯氰菊酯都表现为 增效作用,分别是对照组的0.84和0.34倍.可见 即使是作用机制相同的同一类药剂,与其它药剂互 作的机制也不同,对不同杀虫药剂的交互抗性有明 显差异. 表1辛硫磷,马拉硫磷和灭多威亚致死剂量(LD..)处理 棉铃虫幼虫24h后存活数比较 Table1Comparisonofsurvivalnumbersinthelarvaeof Helicoverpaarmigeraaftertreatment24hbysublethaldosesof phax~.malathion,methomyl(LDl0) 注:差异显着性分析表明对照及各处理组在0.05水平差异不 显着. Notes:Therewasnosignificantdifferencebetweenthecontrolandtreat— ments(T.test,P>0.05). 表2抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫幼虫耐药性的影响 Table2Effectsoftreatmentbysublethaldosesofanticholinesteraseagents onsensitivityofthelarvaeofHelicoverpaarmigrera 表示每一处理组中预处理组同对照相比水平差异显着(T-test, P?O.05). N.t:Th."t.1wastreatedwithacet.nefor24h:T.p,T.nlaandT—nlerepresenttreatnlentwithphoxim, malathi.nandmethornylrespectively Significantlydifferent(T.test,P?0.05). 694昆虫I4c,nEntomolognSinic?46卷 2.2抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫AChE诱 导的时间效应 在昆虫幼虫的不同日龄,其酶活性存在一定的 变化规律.棉铃虫3龄幼虫在48h内,乙酰胆碱 酯酶比活力也呈现一定的变化趋势,呈逐渐降低趋 势(图1),由0.636OD./(mg?min)降至0.307 OD./(mg?min).LD..剂量的辛硫磷处理棉铃虫, 在48h内,AChE活性的诱导最低峰出现在处理后 = . :'j 譬 一 0 ? ? !}g 丑 0.4 0.2 24h,为0.206OD./(mg?min),仅是对照组的 0.56倍.而马拉硫磷,灭多威处理组则相反,对 棉铃虫AChE活性的诱导较为明显,诱导高峰分别 出现在处理后3h和12h,AChE活性分别为0.922 OD4.,/(mg?min)和0.684OD.2/(mg'min),是对照 组的1.45和1.92倍.表明利用抗胆碱酯酶剂亚致 死剂量处理后,棉铃虫AChE比活力的变化同处理 药剂相关,并存在一定的时间效应. 十对照Control +辛硫磷处理组Treatmentbyphoxim 36122448 诱导时间Time(h) 图I抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫幼虫诱导的时间效应 Fig.1ChangesofAChEspecificactivitydependentontimeaftertreatmentbysublethal dosesofanticholinesteraseagentsinthelarvaeofHelicoverpaarmigera 2.3不同药剂诱导后AChE对底物亲和力比较 不同的抗胆碱酯酶剂以亚致死剂量处理棉铃虫 3龄幼虫,在48h内,AChE对底物ATCh的米氏常 数()值的影响有明显差异(表3).是衡量 AChE和底物亲和力的一个重要参数,越大,表 明酶对底物的亲和力越小.用辛硫磷诱导后,棉铃 虫AChE对ATCh的亲和力同对照组相比变化不大, 说明亲和力没有明显改变.而马拉硫磷诱导组 在不同诱导时间变化较大,24h达到最大值,是对 照的2.54倍.灭多威诱导48h后,值均明显高 于对照组,最大值为对照的5.68倍,说明用亚致 死剂量诱导,48h内AChE对底物的亲和力明显降 低. 表3抗胆碱酯酶剂亚致死剂量不同诱导时间AChE的值比较 Table3EffectofsublethaldosesofanticholinesteraseagentsonKofAChEdependent ontimeaftertreatmentinthelarvaeofHelicoverpaarmigera , N.t:Dti"tbleweretheaVerageValues.fthreereplicates? standardeITors.Thedatainthesamemwwiththedifferentlettersaresignificantlydiffer ent(T—test,P?0.05). 6期刘波等:抗胆碱酯酶剂亚致死剂量对棉铃虫毒力的影响及对乙酰胆碱酯酶的 诱导作用 —— 2.4不同药剂诱导后AChE蔗糖密度梯度离心的 活性分布 对照及3个诱导后AChE用蔗糖密度梯度离 心,其活性分布结果见表4.对照组AChE的活性 主要分布在10%,20%的蔗糖梯度层中,集中了 总活性的71.22%.经辛硫磷,灭多威和马拉硫磷 诱导的分别占总活性的73.9%,74.35%和36.2%. 辛硫磷和灭多威诱导组相似,上清层和20%蔗糖 梯度层中AChE活性分布有所下降,其他3个梯度 层中的分布比例同对照组相比均有增加.马拉硫磷 诱导组AChE活性在15%和20%蔗糖梯度层分布明 显下降,在上清层,5%和10%的蔗糖梯度层中却 明显提高,特别是在5%梯度层中,活性分布是对 照绢的3.73倍 表4棉铃虫幼虫AChE的活性在蔗糖梯度内的分布情况 Table4DisbIm帅 ofAChEspecificactivityofthelarvaeofHelicoverpaarmigeraindifferentsucrosegradients 3讨论 杀虫剂的大量使用,在杀死害虫的同时也引发 害虫产生了越来越强的抗性;另外,杀虫剂对害虫 及其天敌,微生物,植物,高等动物和人类还存在 亚致死效应.Laecke等(1989)曾报道用亚致死剂 量的氟啶脲,除虫脲和氟铃脲处理甜菜夜蛾3龄幼 虫,对害虫的繁殖具有抑制作用,幼虫不化蛹或个 体不能发育为成虫.而溴氰菊酯,氯氰菊酯和氰戊 菊酯的亚致死剂量,却诱发棉蚜抗药性迅速提高, 并破坏棉田生态系统,导致棉蚜的再猖獗(Nandi— hallieta1.,1992).有机磷和氨基甲酸酯类抗胆碱 酯酶剂亚致死剂量对害虫抗药性发展的影响亦有报 道(HusseinandWetze,1989).本实验用有机磷和 氨基甲酸酯类3种抗胆碱酯酶剂亚致死剂量处理棉 铃虫3龄幼虫,24h后,对辛硫磷,马拉硫磷,灭 多威,溴氰菊酯,高效氯氰菊酯的毒力测定表明, 不同的抗胆碱酯酶剂诱导作用不同,导致棉铃虫对 每种药剂的敏感性变化存在差异,3种抗胆碱酯酶 剂与其他药剂的互作各不相同.这可能与抗胆碱酯 酶剂本身特殊的化学结构和靶标作用位点有关. 杀虫剂亚致死剂量对AChE的作用具有毒物特 异性(toxin—specificity),不同杀虫剂作用结果不同 (Westlakeeta1.,1985).AChE活性的改变随作用时 间的不同而变化(Villareta1.,1994).本研究表 明,抗胆碱酯酶剂亚致死剂量影响棉铃虫AChE的 机理比较复杂,不同药剂处理对AChE的作用不 同.LD剂量的辛硫磷对AChE活性没有诱导增加 作用反而使其活性下降,其诱导对AChE对底物 (ATCh)的亲和力亦无明显影响.这同用辛硫磷亚 致死剂量预处理棉铃虫幼虫24h后,对有机磷及 氨基甲酸酯类药剂敏感性无明显变化的实验结果一 致,说明在48h内,辛硫磷对棉铃虫AChE活性的 提高没有诱导作用,对AChE亲和力的改变有一定 的迟效性.其选择作用同诱导作用相比更占优势, 这可能也是棉铃虫对辛硫磷不易产生抗药性的原因 之一.但辛硫磷LD剂量预处理24h后,棉铃虫 幼虫对溴氰菊酯和高效氯氰菊酯敏感性却明显下 降,存在一定的交互抗性.LD..剂量的马拉硫磷和 灭多威预处理棉铃虫幼虫后,对有机磷和氨基甲酸 酯类药剂敏感性下降,棉铃虫幼虫AChE的变化不 仅为酶活力的增加,在结构上也发生了改变,对底 物的亲和力明显降低.因此,应限制对马拉硫磷和 灭多威的年使用次数以及考虑和其他药剂轮用或混 用,根据本实验结果,建议菊酯类药剂中选择高效 氯氰菊酯而不是溴氰菊酯. 不同药剂处理后,幼虫AChE的比活力因诱导 时间不同而异,存在时问效应.同对照相比,LD 剂量的马拉硫磷和灭多威对AChE活性的最大诱导 倍数分别为3h的1.45倍和12h的1.92倍;辛硫 磷则相反,24h达最低抑制峰.高希武等(1995) 曾用对硫磷的L处理棉铃虫,24h后,AChE对 696昆虫ActaEntomologicaSinica46卷 ATCh的亲和力明显提高;对MeTCh和PrTCh亲和 力没有明显改变,而对BuTCh的亲和力则降低近2 倍.灭多威LD处理后,使AChE对ATCh和 MeTCh的亲和力增加,对PrTCh和BuTCh的亲和力 降低,但是降低幅度低于对硫磷处理组,预示相 同药剂在相同时间内还存在剂量效应(另文发表). 在亚致死剂量诱导24h后,对棉铃虫AChE的密度 梯度离心结果显示,其活性分布在部分梯度层差异 显着,预示抗胆碱酯酶剂亚致死剂量引起害虫耐药 性的改变,不仅是由于改变了AChE活性和对底物 的亲和力,还可能与某些分子型及其分布比例的改 变有关,这可能是杀虫剂亚致死剂量导致害虫产生 耐药性的原因之一,有待于进一步研究验证. 总之,杀虫剂亚致死效应及其机制的研究是害 虫可持续治理中一项较复杂,重要的课题,认真研 究其毒理学原因,探讨杀虫药剂亚致死效应的生物 化学和分子生物学机制,对于合理使用杀虫剂,减 少其副作用及协调生防与化防的关系,都具有积极 的意义 参考文献(References) ArmesNJ,LonerganPA,JadhavDR,ForresterN矸.1992Insecticides resistanceinSouthIndia.PesticideScience,34:355—364. GaoXW,ZhengBZ,LinB,1995.Toxicologyandbiochemicalofcotton bollwormresistance.In:Executi~eCounciloftheSeeondlvY0uthSci. enceAnnualMeetingofChineseScienceAssociationed.ProgressofLife Sciences.Beijing:ChinaSoientechPress.365—372.[高希武,郑炳 宗,林彬,1995.棉铃虫抗药性的毒理学和生物化学.见:中 国科协第二届青年学术年会执行委员会编.生命科学研究进 展.北京:中国科学技术出版社.365—372] GaoXW,DongXL,ZhengBZ,ChenQ,1997.GlutathioneS-transferase (GSTs)ofHelicoterpaarmigera:inductionofinsecticidesandDlantal, lelochemiealsandmetabolismofinsecticides. ActaEntomologienSinica. 41(2):122—125.[高希武,董向丽,郑炳宗,陈青,1997. 棉铃虫的谷胱甘肽s.转移酶(GST):杀虫药剂和植物次生性 物质的诱导与GST对杀虫药剂的代谢.昆虫,40(2):122 — 125] GaoXW,ZhaoY,WangX,DongXL, ZhengBZ,1998.Inducti0nof carbexylesteraseinHelicoterpaarmigerabyinsecticidesandplantallel0, chemicaIs.ActoEra0mologicaSinica,41(Supp1.):5—10.[高希 武,赵颖,王旭,董向丽,郑炳宗,1998.杀虫药剂和植物次 生性物质对棉铃虫羧酸酯酶的诱导作用.昆虫,41(增 刊):5—10] GorunV,ProinovL,BaltescuV,1978.ModifiedEllmanprocedureforassay ofcholinesteraseincrudeenzymaticpreparations.AnalyticalBiochemis- ,n,86:324—326. HusseinlA,WetzeT.1989.Investigationsintotheinsecticideresistanceof theoataphid(RhopalosiphumpadiL).Archly.丘rPhytopathologie undPflaazenschutz,25(6):555—562. KaylJ,GreenupLR,EastonC,1983.MonitoringHellothisarmigera (Hfibner)strainfromQueenslandforinsecticideresistance.Q/d.J. AgrieAnita.Sci.,40:23—26. NandihalliBS,PatilBV,HugarP,1992.Influenceofsyntheticpyrethroid usageonaphidresurgenceincottonKarnatakaJournalofAgricultural Sciences,5(3):234—237 NemotoH,1993.Mechanismofresurgenceofthediamondbackmoth,Plute- llaxylostella(L.)(Lepidoptera:Yponomeutidae).JapanAgricultural ResearchQuarter1),27(1):27—32. PerveenF,2000.Sublethaleffectsofchlorfluazurononreproduetivityandvi- abilityofSpodopteralitura(F.)(Lep.,Noctuidae).JournalofAp- pliedEntomolog),124(5—6):223—231. RumpfS,HetzelF,FramptonC,1997Lacewings(Neuroptera:Hemerobl- idaeandChrysopidae)andintegratedpestmanagement:enzymeactivity asbiomarkerofsublethalinsecticideexposure.J.Eeon.Entomo1., 90(1):102—108. SiegfriedBD,ScottJG,1990.Propertiesandinhibitionofacetyleholines. teraseinresistantandsusceptiveGermancockroaches(Blattellager- manicaL.).Pestic.Bioehern.Ph~sio1.,38:122—129. SzeglletesT,BalintT,SzeglletesZS,NemesokJ,1995.Changecause bymethidathioninactivityanddistributionofmolecularformofcarp (C)prinuaearpioL,)AChE.PesticideBiochemistryandPhysiolog). 52:71—79. ,anLaeckeK,DegheeleD,AudaM,1989.Effectofasublethald0se0f chitinsynthesisinhibitorsonSpodopteraexigua(HUbner)(Lepidopt. era:Noctuidae).Parasitica,45:90—98. VillarD,GonzalezM,GualdaMJ,SchaefferDJ,1994.Effectsoforgan0. phosphorousinsecticideonDugesiatigrina:eholinesteraseactivityand headregeneration.Bul1.Environ.Corttam. Toxico1.,52:319— 324. WestlakeGE,HardyAR,StevensonJH,1985.Effectsofstorageandpes. tieidetreatmentsonhoneybeebrainaeetyleholinesteraseacti~ties. Bul1.Environ.Contam.Toxico1., 34:668—675.