小鼠胚胎肾小球滤过膜早期发育的超微结构

小鼠胚胎肾小球滤过膜早期发育的超微结构 () 〃技术方法〃文章编号 :100928488 20010120020203 小鼠胚胎肾小球滤过膜早期发育的超微结构 21 1 2 () 宏郭 敏,郭 锦州医学院组织胚胎学教研室 ;锦州市中心医院 ,辽宁 锦州 121001 摘 要 : 目的 观察小鼠胚胎肾小球滤过膜早期发育 。方法 应用透射电镜观察小鼠胚龄 10 、14 、18 d 时肾 小球超微结构改变 。结果 毛细血管侵入 S 小体第一弯曲时诱导足细胞分泌基膜 ,然后足突 、毛细血管内 皮孔出现 ,内皮产生基膜 ,最后内皮基膜与足细胞产生和基膜融合成一层共有的基膜 。结论 毛细血管诱导 足细胞分泌基膜之后再诱导足突产生 ;足细胞基膜和足突出现后内皮才发育成有孔型内皮 ,并开始分泌内皮 基膜 ,最终两层基膜融合为一层 。 关键词 :肾小球 ;滤过膜 ;早期发育 ;超微结构 中图分类号 : R321 . 55 ;Q954 . 4文献标识码 :A The Ultrastructure of Glomerular Filtrating Membrane of mouse embryo in Early Stage of Development 1 212(GUO Mian, GUO Hong Department of Histology and Embryology ,J inzhou Medical College ;J inzhou Central Hospi2 )tal ,J inzhou ,Liaoning Province 121001 ,China Abstract :O bjective To observe the ultrastructural changes of glomerular filtrating membrane of mouse embryo in early ( stage of development . Metho d s By electron microscope , the ultrastructural changes of glomerulus in mice embryonic ) age :10 ,14 and 18 dayswere observed. Re sult s With capillary invading the first arcuation of S2bodies ,nurse cells were induced to secrete basement membrane ,then podocytic process and capillary endothelial fenestra appeared ,and endothelia secreted basement membrane ,finally endothelial basement membrane and nurse cells appeared and were fused with base2 ment membrane into one layer of shared basement membrane . Co nclu sio n : Capillary induced nurse cells to secrete basement membrane ,then induced the appearance of podocytic process ;endothelia were developed into fenestrated endotheli2 a and began to secrete endothelial basement membrane ,finally two layers of basement membrane were fused into one . Key words :glomerulus ;filtrating membrane ;early stage of development ; ultrastructure () 1 日计算胚龄 。分发现雌鼠阴道出现精栓为胚龄第 滤过膜 又称滤过屏障是肾小球滤过原尿的结 1 ,2 构 。早期发育的研究已有报道,但对其发生过程 别选取胚龄 10 、14 、18 d 孕鼠子宫腔内胎鼠 4 只为观 中各成份出现的规律看法尚不一致 ,特别是超微结 察对象 。 构变化尚需进一步补充 。笔者以小鼠为实验动物 , 1. 2 电镜标本制作 应用透射电镜观察了滤过屏障发生过程中的变化 。剖开孕鼠子宫腔 ,选取最大胎鼠经脐带开腹 ,取 出左肾经肾门横断后臵 2 . 5 % 戊二醛中固定 48 h , 1 材料和方法 常规 树 脂 定 向 包 埋 , 使 肾 脏 横 断 面 与 切 片 面 平 行 。 μL KB2V 型超片机行半薄切片 ,厚度 0 . 5m ,甲苯胺蓝 1. 1 动物选择及胎鼠胚龄计算 染色 。在光镜下观察选择 ,然后制超薄切片 ,厚度为 昆 明 种 小 鼠 , 雌 雄 比 例 按 3 ?1 同 窝 饲 养 , 以 50 nm ,使整个肾脏切面容纳在切片中 , 醋酸铀柠檬 () 酸染色 ,1200 EXJ EOL透射电镜观察 。 () ( ) 作者简介 :郭 敏 19602,女 汉族,辽宁省沈阳市人 ,硕士 ,副教授 收稿日期 :2000209230 ;修回日期 :2001201212 血管壁尚无内皮基膜出现 ,但可见足细胞分泌薄薄 4 ,5 ( ) 一层 基 膜 上 皮 基 膜 , 见 图 2。Majumdar 等认 10 d 时肾脏只见输尿管芽和周围的小鼠胚龄 生后肾组织 。小鼠胚龄 14 d 时肾小球毛细血管侵 为 ,在肾小体形成的早期 ,毛细血管侵入后诱导足细 () ( )入 S 小体第一弯曲 见图 1 箭头所示; 足细胞 PC 胞分化 ,而这种分化最早的反应是足突的出现 。本 ( ) 文观察结果可以看出 ,足细胞对毛细血管诱导的反 尚无突起出现 ,但已分泌基膜 见图 2 箭头所示和 () 形成毛细胞管 见图 2 caP。小鼠胚龄 18 d 时肾小 应最早的是分泌基膜 ,然后才是足突的出现 。小鼠 球 、足细胞已出现突起 、裂孔以及裂孔膜已出现 , 足 胚龄 18 d 时可见足突出现并相互之间形成指状交 细胞基膜明显完整一层 ,毛细血管内皮细胞孔已出 叉 、裂孔膜出现后 ,足细胞分泌的上皮基膜已呈现完 () 整一层 ,相对应内皮细胞无核部分已有孔出现 ,并且 现 见图 3 箭头所示,开始分泌自己的基膜 ;毛细血 () 管内皮基膜与足细胞基膜清晰可见 ,并可见相互融 内皮细胞开始分泌基膜 见图 3,说明有孔的内皮出 () 合 见图 4 箭头所示。 现在足细胞突起之后 ,并且开始分泌内皮基膜 ,这一 过程是否在足细胞足突诱导下完成 ,需要进一步研 3 讨 论 究 。 成熟的滤过膜是由有孔的内皮 、基膜和足细胞 足突间裂孔组成 。当内皮基膜 、上皮基膜出现后 ,两 观察发现小鼠胚龄 10 d 时肾脏只见输尿管芽 6 () 层基膜开始融合 见图 4,最终正如 McCarthy所描 和其周围的生后肾组织 ,后者由密集在输尿管芽顶 端周围细胞团组成 。小鼠胚龄 14 d 时可见在生后 述的那 样 融 合 为 一 层 共 有 的 基 膜 。小 鼠 胚 龄 18 d 肾组织部位细胞团已发育为 S 小体 ,且在 S 小体第 时肾脏可见髓旁肾小球出现 , 而被膜下又有新的 S () 小体形成 ,也现出毛细血管的侵入 ,由此可见小鼠 一弯曲处可见毛细血管侵入 见图 1,说明肾小体开 3 始形成;电镜下可见 S 小体第一弯曲处毛细血管肾脏肾小球是在胚胎晚期开始发生发育 。 ( )图 1 胚龄 14 d 时肾滤过膜发育 ×1600 ( )图 3 胚龄 18 d 时肾滤过膜发育 ×13000 ( ( ))图 2 胚龄 14 d 时肾滤过膜发育 ×16000 图 4 胚龄 18 d 时肾滤过膜发育 ×16000 4 Majumdar A , Drummond IA. Podocyte differentiation in the 参考文献 : absence of endothelial cell as revealed in the zebrarish avacu2 () lar mutantcloche J . Dev Genet ,1999 ,24 3,4:2201 Abrahamson DR ,John PL . Laminin distribution in developing Nagata M ,Watanabe T. Podocytes in metanephric organ cul2 5 glomerular basement membrane J . Kidney Int , 1993 , 48 ture express characteristic in vivo phenotypes J . Histochem () 1:73 () Cell Biol ,1997 ,108 1:17 2 2 Couchman J R ,Abrahamson DR , Carthy KJ . Basement mem Mcarth KJ . Morphogenesis of the glomerular filter : the syn2 6 brane proteoglycans and development J . Kidney Int ,1993 , chronous assembly and maturation of two distinct extracellular () 48 1:79 () matricesJ . Microsc Res Tech ,1997 ,39 3:233 3 刘 斌 ,高英茂 . 胚胎学 M .北京 : 北京人民卫生出 版社 ,1996. 299 () 〃技术方法〃文章编号 :100928488 20010120022202 韦格特神经纤维染色方法的改进 ( ,张湛波 ,杨玉风 ,唐力勇 ,宋士英 ,马 春海力斯 哈尔滨医科大学人体解剖学教研室 ,黑龙江 哈尔滨 )150086 关键词 :神经纤维 ;染色方法 文献标识码 :B中图分类号 : R322234 μ埋 。切片厚度为 40,60 韦格特染色法可用于神经 系 统 教 学 标 本 的 制m 。用库尔奇斯基氏液进 行染色 ,将切片先入 0 . 25 % 高猛酸钾液 1 min ,再 作 ,主要显示人脑和脊髓中神经纤维的分布 ,特别是 入帕尔氏液后在镜下控制分色 ,反复操作 3,4 遍 , 纤维束的位臵和进程 ,其效果比较稳定 、可靠 。但也 直至灰质无色 、白质深蓝 。冲洗 12 h ,注意不要直接 存在耗时和耗料等不足 。为此 ,笔者对韦格特染色 冲到片子上 。 法进行了改进 ,现报道如下 。 从 50 %, 95 % 乙 醇 梯 度 脱 水 各 2 min 。用 1 % 乙 醇 伊 红 染 色 1 min 左 右 , 然 后 入 纯 乙 醇1 方 法 2 min ,随入乙醚乙醇 ,溶去片子周围的火棉胶 ,再入 纯乙醇 2 min ,二甲苯透明 。贴片用毛笔轻轻移动切 取成人脑干 ,分切为 3 段 。用流水冲洗 3 d 后 , 片于载玻片上 。滴树脂胶封片 ,入温箱干燥 。 以 10 % 甲醛液固定 2 d 。预染时间依脑干大小而 定 ,成人 脑 干 一 般 为 8 , 10 d 。乙 醇 梯 度 脱 水 从 2 讨 论 50 %,100 % 逐渐增加 ,每个梯度 2 d 。入乙醚醇 1 d 后 用 5 % 火 棉 胶 液 浸 15 d 、8 % 火 棉 胶 液 浸 虽然制作神经系统教学标 本 的 染 色 方 法 有 多 30 d 、15 % 火棉胶液浸 60 d 后 ,15 % 火棉胶液包 种 ,其中韦格特染 色 法 应 用 比 较 广 泛 , 本 法 具 有 稳 定 、可靠和能显示较细的有髓纤维的优点 。但实践 () ( ) 作者简介 :海力斯 19552, 女 蒙古族, 内蒙古自治区宁城县人 , 本 科 ,高级实验师 () 中发现 ,在制作大量教学切片时 ,也存在不足 : 1先 收稿日期 :2000209212 ;修回日期 :2001201212 把切片贴在载玻 片 上 , 然 后 才 能 进 行 染 色 , 耗 时 较