血小板计数偏低误差实验探讨及对策

血小板计数偏低误差实验探讨及对策 血小板计数偏低误差实验探讨及对策 现代检验医学杂志2006年9月第21卷第5期JModLabMed,September2006,Vo1.21,No.591 血小板计数偏低误差实验探讨及对策 程晖,刘更夫,袁桂荣,王文兰,左芳 (黄石市中心医院检验科,湖北黄石435000) 摘要:目的以全自动血液分析计数法,血涂片计数法,草酸铵溶液直接计数法对血小板进行计数,探讨三种方法血小板 计数偏低误差原因,以寻求理想的测定方法.方法将412例血小板计数样本,分为血小板数(3O,5O)×1O./L,(2O,30) ×1O./L组,<2O×1O./L组及健康成人组,采集样本放置不同时间,以上述各种方 并进行配对f检验.结 法测定血小板数, 果以采血样本放置60rain后计数结果较为稳定,准确.三种计数方法差异无显着性(P>0.05);但在血小板计数<3O× 1O./L两组中,发现EDTA盐依赖性血小板假性减少症.仪器法计数结果明显低于涂片法和手工法.结论EDTA盐抗凝 血,仪器法测定血小板数必须在采血后60min开始计数,计数偏低,特别是<5O×1O./L时,需用涂片法和手工法加以复 核,并观察血小板质和量的变化.必要时需作骨髓穿刺,观察巨核细胞及血小板数量和形态.当仪器法与手工法结果悬殊特 别大时,应考虑为EDTA盐依赖性血小板假性减少症. 关键词:血小板计数;偏低误差;EDTA盐依赖性血小板假性减少症 中图分类号:R446.113文献标识码:A文章编号:1671—7414(2006)05—091—02 血小板计数对血栓与出血性疾病的诊断与治 疗有重要的参考价值,现今血液分析仪血小板计数 已被广泛应用,其准确性的问题已引起临床及实验 室的关注,尤其对临床上元出血倾向而血小板计数 <50×10./L之结果特别引起国内外学者的重视 和探讨.本文根据血小板具可逆聚集性,抗凝剂 EDTA盐致血小板发生凝集等特性,以日本Sys— mexSE一9000全自动血液分析仪计数法,草酸铵溶 液直接计数法与涂片血小板计数法及骨髓穿刺涂 片法等,对计数<50×10./L的结果作了相关性比 较,并提出准确计数的对策,以求得可靠的临床诊 断,治疗依据,现报告如下. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1实验对象:收集本院2004年12月,2005 年12月的门诊,住院患者血液分析中血小板计数 <50×10./L样本共362例,其中男性218例,女 性144例,年龄1,68Y.健康体检无贫血,肝胆疾 患,无出血者血液分析样本50例,其中男性28例, 女性22例,年龄20,60Y,均为EDTA—K:抗凝 血. 1.1.2仪器:日本SysmexSE一9000全自动血液 分析仪,日本Olympus双目显微镜成像系统. 1.1.3试剂:校准物,质控物均为日本Sysmex SE一9000专用配套试剂,SysmexS一100全血校准 物,四川迈克全血质控物,台湾Baso瑞氏染液,自 配草酸铵血小板计数液,均在有效期内使用. 1.1.4EDTA—K:抗凝真空采血管(武汉致远公 司供给). 1.2方法 1.2.1用含EDTA—K:抗凝剂之真空采血管采集 血样本,轻轻混匀5次后,分别于即刻,15,30,60, 120min在SE一9000血液分析仪(室内质控在控) 上计数血小板,记录其结果.362例血分析样本,按 血小板计数<20×10./L(一120),(20,30)× 10./L(一98),(3O,50)×10./L(一144)分为三 组及健康组(一5O). 1.2.2以草酸铵溶液直接计数法(下称手工法)[1 计数血小板. 1.2.3以血涂片法计数血小板(下称涂片法)[2]: 血液涂片,瑞氏染色油镜镜检,以下列公式计数. 计数血涂片中血小板数一计数100个白细胞时血 小板数量/lOO个白细胞×10./L(白细胞数为血液 分析仪计数结果). 1.2.4用以上仪器法,手工法,涂片法计数血小板 %20×10./L者取其中8例.作骨髓穿刺涂片,观 察巨核细胞数及分类,观察血小板数量,形态. 2结果 2.1仪器法计数血小板结果采血后放置不同时 间,四组计数结果见1. 实验证明,采血后于即刻,15,30min行血小 板计数,四组中放置60min以内计数者明显低于 放置60,120min计数结果,均有显着性差异(P< 0.01);而放置60min与120min后计数,四组计 数结果均元显着性差异(P>0.05),证明采血后应 放置60min计数,且结果较为稳定. 2.2采血60min后仪器法血小板计数与涂片法, 手工法比较见表2. 作者简介:程晖(1967一),男,大学本科,主管技师.目前从事检验医学,"血浆纤维蛋 白单体及降解产物试验中临界值血清的研{}I获湖北省黄石市科技进步二等奖. 92现代检验医学杂志2006年9月第2l卷第5期 JModLabMed,September2006,Vo1.21,No.5 表2仪器法,涂片法,手工法结果比较(×109/L,土2s) 分组n仪器法血涂片法手工法 (3O,50)×1O./L14448.32+10.2448.28+11.3246.32+10.30 (2O,30)×10./L98—329.18士8.3O29.24士9.1129.3018.89 <20×109/L120—518.36+5.1619.92士8.6818,87+6.24 表2所见,采血后放置60rain,用仪器法,血涂 片法,手工法计数血小板,每两两方法相比(P>0. 05),差异均无显着性.在血小板计数<20×10./L 及(20,3O)×10./L两组中,共有8例仪器法与其 它两法结果相差甚远,悬殊1O多倍,未列入手工统 计(见表2).其中(2O,30)×1O./L组有3例,<2O ×1O./L组有5例,结果见表3. 表38例血小板三法测得均值结果(×109/L) 笔者将以上8例分别作骨髓穿刺涂片,发现巨 核细胞数正常,分类正常,可见到产板巨核细胞,血 小板数亦不减少,形态大致正常,与涂片组及手工 组计数结果相符. 3讨论当血小板计数在正常范围或轻度偏低 时,利用血液细胞分析仪作血小板计数,方法简便, 快速,精确度高已元可置疑,但对于血小板数<50 ×1O/L,甚至<2O×1O/L的样本,以EDTA盐抗 凝血测,仪器计数则可信度较差. 3.1因血小板具可逆聚集性,在血细胞计数仪计 数血小板时有很大影响.实验证明,当新鲜静脉血 加入EDTA—K抗凝剂混匀后血小板即发生凝集 反应,此时若即刻计数,因可逆聚集的血小板还未 解聚,则可造成血小板计数假性降低,本实验证明 采血后于即刻,15,30rain计数是不可取的. 3.2文献报道抗凝剂EDTA—K可使血小板形态 发生改变,由盘状变成球状,从而使可逆聚集血小 板的回缩到血小板胞质内.此时血小板相互缠绕的 伪足则可解除L3].实验证明,采血后静置6O,120 min计数血小板结果稳定,准确,与报道相符?]. 3.3当血样本血小板计数2O×1O./I时,血液分 析仪不能真正地反映血小板数量,故不能辅助临床 诊断血小板减少症.笔者认为,用涂片法计数血小 板可纠正计数偏低的错误,同时,涂片法还具很好 的保存性,当计数正常而形态不正常时,可直接观 察其形态及分布情况,结合血小板直方图,对出血 性疾病的诊断具有重要意义. 3.4在血小板计数<3O×1O./L的两组中,本文 发现有8例仪器法与其它两法结果悬殊甚大者.笔 者均以末梢血及骨髓穿刺涂片镜检,观察巨核细 胞,血小板数及形态.证明了EDTA盐导致血小板 发生聚集使血液分析仪血小板计数偏低的现象,即 EDTA—K依赖性血小板假性减少症,符合文献报 道[5].有关发生原因及机制还有待进一步探讨. 3.5笔者在涂片中发现,当血小板聚集或存在有 大血小板时,亦使血小板计数发生偏低误差.此种 情况亦可在涂片法中发现. 综上所述.EDTA盐抗凝血作血小板计数必 须在采血60min后开始操作,计数偏低者特别是 <50×10./L时,需用手工法,涂片法加以复核,并 观察血小板质和量的变化.必要时需作骨髓穿刺, 观察巨核细胞及血小板数量和形态.当仪器法与手 工法悬殊特别大时,应考虑为EDTA盐依赖性血 小板假性减少症,应引起临床和实验室的重视. 参考文献: [】]叶应妩,王毓三.全国临床检验EKG,第2 版.南京:东南大学出版社,1997:22. [2-1SutorAH,GrohmannA,KaufmehlK,eta1.Prob— lemswithplateletcountinginthrombocytopenia.A rapidmanualmethodtomeasurelowplateletcounts [J].SeminThromb&Hemost,2001:27(3):237— 243. [3]丛玉隆.当代血液分析技术与临床[M3.第1版.北 京:人民卫生出版社,1997:34. E4-1李胜发,程大林,等.血小板可逆聚集在全血细胞分析 中的影响EJ].临床检验杂志,2003:21(1):37. [5-1邢辉,吴健民,等,EDTA—K.依赖性血小板假性减 少症分析FjG.临床检验杂志,2004:22(4):277. 收稿日期:2006—03—06