【doc】 无排卵模型大鼠卵巢MDA及T—AOC的实验研究

【doc】 无排卵模型大鼠卵巢MDA及T—AOC的实验研究 无排卵模型大鼠卵巢MDA及T—AOC的实 验研究 第6期马惠荣,等.无排卵模型大鼠卵巢MDA及T—AOC的实验研究693 但Rao等发现,在体外实验中微囊藻毒素一LR能引起同 样不具有胆汁酸转运系统的BHK一21细胞(幼仓鼠肾细胞)和 MEF细胞(鼠胚胎纤维原细胞)DNA损伤”.比较两次实验, 主要的差别是Rao等所用剂量较大(1mg/L),这时的DNA损 伤作用可能归因于微囊藻毒素一LR的细胞毒性. 至于微囊藻毒素一LR如何引起DNA的损伤,Bojana等提 出活性氧(ROS)在这其中可能起到了重要作用,活性氧可以 攻击多不饱和脂肪酸,启动脂质过氧化反应,形成脂质自由 基L?,烷氧型自由基LO?,过氧自由基LOO?及其它终产物. 活性氧和脂质过氧化反应产生的自由基可导致DNA损伤, 造成DNA单链断裂.根据文献报道,微囊藻毒素一LR能引 起肝细胞内的ROS的增加,而在后面的实验中我们选用 HL广7702细胞进一步确证微囊藻毒素一LR在引起DNA损伤的 最低剂量下是否能导致细胞的氧化应激. 4参考文献 1YoshizawaS.Inhibitionofproteinphosphatasesbymicrocystionand nodularinassociatedwithhepatotoxicity.JCancerResClinOncol,1990, 116:6O9 2UenoY,NagataS,TsutsumiT,etal,Detectionofmicrocystins,ablue— greenalgalhepatotoxin,indrinkingwatersampledinHaimenandFusui, endenficareasofprimarylivercancerinChina,byhighlysensitive immunoassay.Carcinogenesis,1996,17,1317—1321 3ItoE,KondoF,TeraoK,etalNeoplasticnodularformationinmouse liverinducedbyrepeatedintrapefitonealinjectionsofmicrocystin—LR. 文章编号:1000—8020(2005)06—0693—02 Toxicon,1997,35(9):1453—1457 4施玮,朱惠刚.微囊藻毒素,藻类提取物和藻细胞裂解液致突变 性比较.上海环境科学,2003,22(8):532.535 5王红兵,朱惠刚.我国若干湖白中蓝藻毒素的遗传毒性研究.中 国公共卫生,1995,14(6):339.341 6RaoPVL,BhattacharyaR,Thecyanobacteriatoxinmlcrocystln—LR inducedDNAdamageinmouseliverinvivo.Toxicology,1996,114(1): 29.36 7LankoffA,KrzowskiL,GlabJ,etal,DNAdamageandrepairinhuman peripheralbloodlymphocytesfollowingtreatmentwithmicrocystin—LR. MutRes,2004,559(1.2):131.142 8SinghNP,MccoyMT.Asimpletechniqueforquantitationoflowlevelsof DNAdamageinindividualceUs,ExpCellRes,1988,175:184—191 9谷康定,林群馨.微囊藻毒素一LR对传代细胞的毒性.中国公共卫 生,2004.20(4):411-412 10RaoPVL,BhattacharyaR,ParidaMM,eta1.Freshwater cyanobacteriummicrocystisaenl西nosa(UTEX2385)inducedDNA damageinvivoandinvitro.EnvironToxicolPharmacol,1998,5(1):1-6, 11SeguraB,SedmakB,FilipiM.Microcystin—LRinducesoxidativeDNA damageinhumanhepatomacelllineHepG2,Toxicon,2003,41(1):41— 48 12BoualchaN.MaatoukI.Microcystin—LRandnodularininduce intracellularglutathionealteration,reactiveoxygenspeciesproductionand lipidperoxidationinprimaryculturedrathepatocytes.ToxicolLetters, 2004,148(1):53.63 (2005.01.08收稿) 无排卵模型大鼠卵巢MDA及T—AOC的实验研究 马惠荣杜惠兰宋翠森杨秀芳 河北医科大学中西医结合学院,石家庄050091 ? 方法与技术? 摘要:目的比较无排卵模型大鼠与正常大鼠卵巢组织丙二醛(MDA), 总抗氧化能力(T-AOC)含量,及与 卵巢性激素的关系,探讨氧化损伤与抗氧化能力对无排卵发生的影 响.方法采用9日龄SD雌性大鼠颈背 部皮下注射雄激素的方法制造无排卵模型,以正常同龄雌性大鼠为对照.4月龄时,测定动情前期大鼠卵巢 组织匀浆MDA,T-AOC和血清性激素水平,HE染色光学显微镜观察卵巢病理形态学变化.结果无排卵大 鼠卵巢组织匀浆MDA明显高于正常组,T.AOC明显低于正常组.结论卵巢组织中MDA升高,T.AOC降低 是无排卵的影响因素之一 关键词:无排卵模型大鼠 中图分类号:R711.75 丙二醛总抗氧化能力卵巢 文献标识码:A 无排卵是不孕症,闭经,功血,多囊卵巢综合征等多种妇 科疾病共同的病理现象,其发病机制不明.氧化损伤和抗氧 化能力降低在许多疾病病理过程中起着十分重要的作用. 本实验旨在通过测定无排卵大鼠,正常大鼠卵巢组织匀浆中 丙二醛,总抗氧化能力,以探讨卵巢局部氧化损伤与无排卵发 作者简介:马惠荣,女,医学博士,讲师 1通信作者 2河北医科大学基础课教学部 生的关系. 1材料与方法 1.1药物和试剂 1.1.1实验用药丙酸睾丸酮注射液:天津市氨基酸公司生 产,:1ml,批号:0203232. 1.1.2主要试剂丙二醛测定试剂盒,总抗氧化能力试剂 盒,雌,孕,雄激素试剂盒:均购自南京建成生物工程研究所. 1.2实验动物 694卫生研究第34卷 同批出生9日龄健康雌性sD大鼠,平均体重15g.购自 华中科技大学同济医学院实验动物学部,合格证号:(鄂医动 字)19—020. 1.3主要仪器设备 日本OLYMPUS显微镜;TDL-5一A离心机,DL-5000B高速 冷冻离心机,上海安亭科学仪器厂;HH?W21?600型电热恒温 水浴箱,天津市泰斯特仪器有限公司;722分光光度仪,上海 第三分析仪器厂;古城牌FJ一20217放射免疫计数器,国营二六 二厂. 1.4方法 1.4.1造模及分组参照魏美娟等方法:初生9日龄大鼠 颈背部皮下注射丙酸睾丸酮1.25mg/只(0.05ml/只),第22日 龄断奶.第70日龄阴道开口,连续阴道上皮细胞涂片2个性 周期(每个性周期4,5天),阴道上皮细胞持续角化,提示无 排卵大鼠模型制作成功.正常组注射同等剂量的中性茶油. 共分2组:正常对照组(简称正常组),模型组,每组l0只. 1.4.2动物喂养利用自然光照,室温维持在20?,28?, 自由进食,由专人同样条件饲养. 1.5观察项目 1.5.1取材4月龄时阴道细胞涂片连续2个性周期,详细 记录各组大鼠的动情周期,选择动情前期断头处死大鼠,取 血,离心,取血清置于一20?备检.同时立即取出左侧卵巢组 织,吸去血迹,除去面脂肪组织,匀浆后置一20?冰箱保存 备用.右侧卵巢剥去脂肪组织,称重后置4%多聚甲醛中固 定,常规石蜡包埋,5m厚连续切片,用于HE染色. 1.5.2观测指标及方法HE染色观察卵巢形态学变化; MDA,T—AOC测定:采用比色法;血清E,,P,T:采用液相平衡竞 争放射免疫分析法(RIA). 1.6统计学处理 统计分析用SPSSI1.5统计软件,两组均数比较用t检验. 2结果 2.1两组大鼠卵巢形态学观察 正常组卵巢可见发育中各级卵泡,颗粒细胞层较厚,少量 典型黄体形成;模型组卵巢各级发育期卵泡少见,多数呈囊性 扩张,扩张的卵泡壁颗粒细胞层次明显减少,或仅剩1,2层, 泡膜细胞增厚.见图1,图2. 图1ASR卵巢(×100) 图2正常大鼠卵巢(×100) 2.2各组大鼠卵巢组织匀浆丙二醛(MDA),总抗氧化能力 (T.AOC),血清雌二醇(E2),孕酮(P),睾酮(T)的比较 与正常组比较,模型组MDA显着增高(P<0.01),T—AOC 显着下降(P<0.05),E,极显着性升高(P<0.01);P相比无 显着性差异(P>0.05);T显着升高(P<0.05).见附表. 3讨论 已知氧自由基攻击生物膜引发脂质过氧化作用,形成的 丙二醛(MDA),具有很强的生物毒性,极易与磷脂蛋白发生反 应,改变细胞膜的通透性,可引起细胞损伤,导致细胞代谢,功 能和结构的改变.机体防御体系中总抗氧化能力的作用主 要是维持内环境活性氧的动态平衡,分解过高的自由基和活 性氧,提高机体抗自由基能力,减少脂质过氧化,使机体处于 附表各组大鼠指标检测结果比较(?.n=10 注:与模型组相比(1)P<0.05,(2)P<0.01 氧化还原相对稳定的状态,保护和改善细胞膜的完整性和流 动性,起到调节组织细胞功能的作用.本结果显示,无排卵大 鼠卵巢丙二醛含量明显高于正常大鼠,总抗氧化能力明显低 于正常组,卵巢分泌性激素功能紊乱,HE染色显示排卵障碍 的特点,提示氧化损伤和抗氧化能力的降低可能是不排卵的 影响因素之一,减少氧化损伤和脂质过氧化物的沉积,增强卵 巢局部抗氧化能力可能有利于无排卵性疾病的治疗. 4参考文献 l张轶清,张正荣,脂质过氧化与妇科疾病.皖南医学院.1998, 17(2):209—21l 2魏美娟,俞瑾补肾药对雄激素致无排卵大鼠垂体及卵巢的形态学 变化观察.中国中西医结合杂志,1993,13(3):164—166 3陈瑗,周玫主编,自由基医学基础与病理生理北京:人民卫生出 版社.2002.36.58 (2004.12—01收稿)