改变波长高效液相色谱法测定氨咖敏片中氨基比林和咖啡因含量

改变波长高效液相色谱法测定氨咖敏片中氨基比林和咖啡因含量 改变波长高效液相色谱法测定氨咖敏片中 氨基比林和咖啡因含量 2011年第2O卷第4期药物鉴定 改变波长高效液相色谱法测定氨咖敏片中氨基比林和咖啡因含量 解瑞辉 (河南省濮阳市食品药品检验所,河南濮阳457000) 摘要:目的建立改变检测波长的高效液相色谱(HPLC)法,测定氨咖敏片的氨基比林和咖啡因含量.方法采用AgilentC?s柱(150[nln× 4.6mm,5m),以甲醇一水一冰醋酸(40:60:0.2)为流动相,流速为1.0mL/min,选样量为20L,检测温度为室温,检测波长0,3min时为 263nm.3,15min时为273nm.结果氨基比林的平均回收率为99.2%,RSD=0.28%(n=6);咖啡因的平均回收率为98.2%,RSD= 0.41%(H=6).结论该方法简单,可靠. 关键词:氨咖敏片;氨基比林;咖啡因;高效液相色谱法;检测波长;含量 中图分类号:R927.2;R971.1文献标识码:A文章编号:1006—4931(2011)04—0041—02 氨咖敏片是以氨基比林,咖啡因为主要成分的复方制剂.在国 家药品标准…中,其氨基比林与咖啡因含量测定方法为化学分析 法,其中氨基比林采用中和滴定法,存在辅料干扰引起的空白和样 品滴定终点色泽不一致的误差;咖啡因采用氯仿萃取后剩余碘量 法,操作烦琐,不准确.同时,咖啡因的含量较低.为使结果更精确, 笔者采用改变检测波长的高效液相色谱法.测定,报道如下. 1仪器与试药 Agilent1200型高效液相色谱仪;SecomamUVIKONxL型双光 束扫描紫外/可见分光光度计;Precisa92一SM一202A型电子天 平.氨基比林,咖啡因对照品(批号分别为100503—200301, 100101—198403,中国药品生物制品检定所);氨咖敏片(成都第一 制药有限公司);甲醇(色谱纯),冰醋酸(分析纯),水(纯化水). 2方法与结果 21色谱条件 色谱柱:AgilentC18柱(150mm×4.6lllin,5m);流动相:甲 醇一水一冰醋酸(40:60:0.2);流速:1.0mL/mL;柱温:室温;进 样量:20L.外标法定量峰面积.理论板数按氨基比林峰计应不 低于2000,分离度符合要求. 22检测波长确定 以流动相为溶剂,配制质量浓度分别为20p~g/mL的氨基比林 与咖啡因对照品溶液,在200,400nm波长范围内扫描,结果氨基 比林在263nnl波长处,咖啡因在273nm波长处有最大吸收.在选 定色谱条件下,氨基比林和咖啡因的平均保留时间分别为2.5inin 和3.6rain.由于咖啡因的含量较低,为了提高方法的灵敏度和准 确度,使检测器的检测波长在检测时均处于两种主要成分的最大 吸收波长处,本试验采用变波长检测,即0,3min时为263nm 3,15rain时为273nm. 23溶液制备 取氨基比林对照品50.21mg,置50mL量瓶中,用流动相溶解 并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液I;取105?下干燥至恒重的咖啡 因对照品10.16mg,置100mL量瓶中,用流动相溶解稀释至刻度, 摇匀,作为贮备液II;精密量取上述两种贮备液各5mL,置50mL 量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,作为对照品溶液.按处方制备不含 氨基比林和咖啡因的阴性对照品溶液.取氨咖敏片20片,精密称 定,研细,精密称取适量(约相当于氨基比林0.1g),置50mL量 瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液 5mL,置50mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,作为供试品溶液. 2.4方法学考察 阴性干扰试验:取阴性对照品溶液,对照品溶液,供试品溶液, 分别注入液相色谱仪.结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱 相应位置无吸收,证明阴性无干扰(图1). 中国药业ChinaPharmaceuticals l 2 l mAU 300 200 l00 t/min0 050505 ABC 1.氨基比林2.咖啡因 A.对照品溶液B.供试品溶液C.阴性对照品溶液 图1高效液相色谱图 用色谱仪自动进样器 线性关系考察:取2.3项下对照品溶液, 分别进样5,10,l5,20,25,30L,测定峰面积,以进样量(txg)为横 坐标(),峰面积为纵坐标(y)绘制标准曲线,氨基比林回归方程 y:55.85+73.635(r=0.9998),进样量在0.5,3.0g范围内 与峰面积线性关系良好;咖啡因回归方程Y=78.342X+20.057 (r=0.9997),进样量在0.05,0.30g范围内与峰面积线性关系 良好. 精密度试验:取同一批供试品溶液,重复测定6次.结果氨基 比林峰面积的RSD=0.08%,咖啡因峰面积的RSD=0.21%. 稳定性试验:取同一供试品溶液,分别于0,2,4,6,8,10h时进 样测定.结果峰面积基本不变,氨基比林峰面积的RSD=0.13%, 咖啡因峰面积的RSD=0.29%. 加样回收试验精密量取已知含量的样品6份,每份10mL, 每2份分别精密加入氨基比林对照品(质量浓度74.4~g/mL), 105?下干燥至恒重的咖啡因对照品(质量浓度7.8l~g/mL)的混 合溶液12,10,8mL,按供试品溶液制备方法制备成供试液,分别测 定,结果见表1. 表1加样回收试验结果(n=6 注:A为氨基比林,B为咖啡因 2.5样品含量测定 依法测定了4批样品,结果见表2. 3讨论 在流动相中加入冰醋酸,峰形得到改善,同时在一定程度上缓 ? 4l? 药物鉴定 妥布霉素滴眼液中抑菌剂含量分析2011年第20卷第4期 吴群,李霞,刘映倩 (重庆市药品检验所,重庆401121) 摘要:目的了解妥布霉素滴眼液中抑菌剂的添加情况.方法采用高效液相色谱法. 结果18家生产企业的绝大部分产品抑菌剂用量控制 较好,但个别厂家抑菌剂用量波动较大,且个别生产厂家的样品检出结果与处方标 示的不一致.结论必须控制滴眼剂中的抑菌剂含量. 关键词:妥布霉素滴眼液;抑菌剂;含量 中图分类号:R927.11;R988.1文献标识码:A文章编号:1006—4931(2011)04—0042 —02 滴眼液中的抑菌剂有细胞毒性,长期使用可造成眼表组织损 伤,并降低眼睛对滴眼液的耐受性.但为了保持药效的稳定性和控 制反复使用时微生物的污染,大多数滴眼液中都含有抑菌剂,其中 最常见的是羟苯乙酯和苯扎氯铵.为考察市场上妥布霉素滴眼液 中抑菌剂的添加情况,我所于2009年收集到国内生产的妥布霉素 滴眼液54批,复方妥布霉素滴眼液1批,并用高效液相色谱法测 定其抑菌剂含量.现报道如下. 1仪器与试药 Agilentl100型高效液相色谱仪.妥布霉素滴眼液54批,复方 妥布霉素滴眼液1批(分别来源于信谊药厂等18家生产企业);羟 苯乙酯,羟苯丙酯,苯扎氯铵对照品(中国药品生物制品检定所); 苯扎溴铵对照品(用重庆渝生药厂提供的原料代替,含量为 98.5%);乙腈(色谱纯),其他试剂(分析纯). mAU3366mAU2101 l2O 80 40 0 O48 A 01234 B 0 …一 02O4002040 CD A.羟苯丙酯B.羟苯乙酯C.苯扎溴铵D.苯扎氯铵 2方法与结果 根据各厂家提供的处方资料,所含抑菌剂主要有羟苯乙酯,羟 苯丙酯,苯扎氯铵和苯扎溴铵.依据有关参考资料,采用高效液相色 谱法,色谱柱为c.s柱,流动相为70:30的乙腈一5nllllo1/L醋酸铵 [含1%三乙胺,用冰醋酸调pH至(5.0?0.5)],检测波长262nm,考 察了述4种抑菌剂的出峰分离情况.结果羟苯乙酯,羟苯丙酯, 苯扎氯铵和苯扎溴铵均能完全分离(图1). 由图l可见,苯扎氯铵和苯扎溴铵峰形不是很好.查阅有关标准 得知,妥布霉素滴眼液(JX20010404),布林佐胺滴眼液 (JX20010359),盐酸多佐胺滴眼液(JX20000532)及酮咯酸氨丁三醇 滴眼液(JX20010382)等进口注册标准中苯扎氯铵的检测均采用氰基 柱,故将色谱柱由cs柱换成氰基柱.结果苯扎氯铵和苯扎溴铵的峰 形得到较大改善,但羟苯乙酯和羟苯丙酯出峰时间基本相同(图2). 5O 30 10 t/n1in0 05l0152O25 C A.羟苯丙酯B.羟苯乙酯C 图1色谱柱为C,柱时的高效液相色谱图图2色谱柱为氰基柱时的高效液相色谱图 ,m'…'m'.1,lllll,'m,,l,,,,llm,mlll…,m'm,,,llm'',…,m,mllll',,m,…,m,,,,l,ll,m,' 表2样品含量测定结果 在每100mL流动相中加入0.1,0.2,0.3mL的冰 解了拖尾现象. 醋酸,柱效,峰形随冰醋酸的加入明显提高,冰醋酸的加人量以 0.2mL为宜.试验中比较了250mm,150mm两种长度的cs柱.结 ? 42? 果采用250lllln的c.柱时,咖啡因的色谱峰严重拖尾,对称性差; 采用150mm的c.柱时,氨基比林,咖啡因两主成分色谱峰的峰形 均较理想,因此选用150mill的c.s柱. 参考文献: [1]WS一10001一(HD一1297)一2003,国家药品标准?化学药品地方标准 上升国家标准(第十四册)fS]. [2】祝波.正相高效液相色谱法测定脑清片中咖啡因和氨基比林的含 量[J1.首都医药,2002,9(9):45. [3]祖元刚,赵眷建.改变检测波长高效液相色谱法测定喜树碱和羟基喜 树碱的含量【J】.分析化学,2004,32(11):1421—1425. (收稿日期:2010—04—21;修回日期:2010—08—16) 中国药业ChinaPharmaceuticals O 绥 氯 扎 苯 如 D O 铵 O 溴 扎 苯