镍铬合金烤瓷全冠对牙周健康的影响

镍铬合金烤瓷全冠对牙周健康的影响 泸州医学院 硕士学位论文镍铬合金烤瓷全冠对牙周健康的影响 姓名:邱燕 申请学位级别:硕士 专业:口腔临床医学 指导教师:刘敏 20080401 英文缩略词对照表英文缩写 英文全称 中文全称,,, ,,,;,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, 烤瓷熔附金属,, ,,,, ,,,, 碱基对,,, ,,,,,,,,,,,;,,,; ,;,, 脱氧核糖核酸,, ,,,,,—,,,,,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 三磷酸脱氧核糖核苷,, ,,,,,,,, ,,,,,,, 溴化乙锭,,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,, 聚合酶链式反应,,, ,,,, ,,, ,,,,,, 每分钟转速,,， ,,,？,, ,,,,, 菌斑指数,, ,,,,,,, ,,,,, 牙周探诊深度,， ,,,,,,,, ,,,,, 牙龈指数,,， ,,,;,, ,,,,,,,, ,,,,, 龈沟出血指数,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, 牙龈卟啉单胞菌,, ,;,,,,,,;,,,,, 伴放线放线杆菌 ,;,,,,,,;,,,,;,,,,,,, ,, 泸州医 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师学院硕士研究生 学位论文独创性声明 指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。 签字日期:;)咿踔仞月加日学位论文作者签名:多户疵 泸州医学院学位论文版权使用授权书 本人完全了解泸州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即:泸州医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权泸州医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文，即:泸州医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位论文作者签名:砂专教 聊虢圳发签字,,期:,拗年幺月知,, 签字日期:。移年年月矽日 镍铬合金烤瓷全冠对牙周健康的影响 摘 要 目的:烤瓷熔附金属(,,,)全冠不仅具有瓷材料的美观性和良好的生物相容性，还具有合金的机械强度，能够承受牙合力而不变形，现已越来越广泛的应用于口腔修复临床。,,,全冠修复的最终效果依赖于健康的牙周组织，但,,,全冠修复过程中对牙体的预备和修复后人工牙冠边缘对牙龈的刺激往往对牙体及牙周组织造成伤害，而这些都将影响修复的最终效果。镍铬合金烤瓷全冠因抗折强度高，价格低廉，在我国应用广泛。但镍铬合金烤瓷全冠的底层金属冠中所含有的镍、铬、铍等贱金属元素可能引起牙龈的变态反应，金属离子的析出可能导致牙龈边缘变色。由于底层金属冠中的贱金属元素化学稳定性差，对微生物生长繁殖影响较大，戴入后可能改变口腔原有的微生态平衡，影响患牙牙周健康。本研究通过观察镍铬合金烤瓷全冠修复后,个月患牙各项牙周指数的变化，镍铬合金烤瓷全冠修复对患牙牙周健康的影响;通过比较镍铬合金烤瓷全冠修复前和修复后,个月患牙龈下菌斑中与牙周病关系密切的牙周可疑致病菌牙龈卟啉单胞菌(,,)、伴放线放线杆菌(,,)检出率的差别，探讨镍铬合金烤瓷全冠修复与患牙继发牙周疾病之间的关系。:选择第一磨牙行镍铬合金烤瓷全冠修复且牙周健康的患者,,例，将对侧同名健康的天然牙设为阴性对照。在进行镍铬合金烤瓷全冠修复前记录患牙和对侧同名天然牙的牙周探诊深度(,,)、菌斑指数(, ,，)、牙龈指数(,，)、龈沟出血指数(,,，)，并刮取龈下菌斑，检测龈下菌斑中与牙周病关系密切的牙周可疑致病菌,,、,,的阳性率。患者在镍铬合金烤瓷全冠粘固后,个月复诊，检查患牙和对侧同名天然牙的牙周状况，记录各相关牙周指数，同时刮取龈下菌斑，检测龈下菌斑中飑、,,的阳性率。用,,,,,,(,统计软件统计结果。结果:,(镍铬合金烤瓷全冠修复前与修复,个月后复诊时患牙各项牙周指数比较结果:复诊患牙与初诊患牙的,,差别有统计学意义伊,,(,,)，复诊时患牙的,,大于初诊;复诊患牙与初诊患牙的,,，差别无统计学意义(尸,,(,,)，复诊时患牙的,,，与初诊时无差别;复诊患牙与初诊患牙的,，差别有统计学意义俨,,(,,)，复诊时患牙的,，大于初诊;复诊患牙与初诊患牙的,,，差别有统计学意义伊,,(,,)，复诊时患牙的,,，大于初诊。,(镍铬合金烤瓷全冠修复前与修复,个月后复诊时对照牙各项牙周指数比较结果:复诊时对照牙的,,、,,，、,，、,,，与初诊对照牙比较，差别均无统计学意义(,,,(,,)，复诊时对照牙的,,、,,，、,，、,,，均与初诊时无差别。,(龈下菌斑中牙周可疑致病菌的检出情况:初诊患牙、复诊患牙、初诊对照牙、复诊对照牙龈下菌斑中,,的阳性率分别为,,(,,、,,(,,、,,(,,、,,(,,，复诊患牙与初诊患牙龈下菌斑中,,的阳性率差别有统计学意义妒,,(,,)，复诊时患牙龈下菌斑中,,的阳性率较初诊患牙高;复诊对照牙与初诊对照牙龈下菌斑中,,的阳性率差别无统计学意义(尸,,(,,)，复诊对照牙龈下菌斑中,,的阳性率与初诊对照牙无差别;初诊患牙、复诊患牙、初诊对照牙、复诊对照牙龈下菌斑中,,的阳性率分别为:,(,,、,,(,,、 ,(,,、,(,,。初诊患牙与复诊患牙龈下菌斑中,,的阳性率差别无统 计学意义(,,,(,,)，初诊患牙与复诊患牙龈下菌斑中,,的阳性率无 差别;初诊对照牙与复诊对照牙龈下菌斑中,,的阳性率差别无统计 学意义(,,,(,,)，初诊对照牙与复诊对照牙龈下菌斑中,,的阳性率 无差别;结论:镍铬合金烤瓷全冠修复对患牙牙周组织的影响客观存 在。镍铬合金烤瓷全冠修复后,个月，患牙菌斑指数与修复前无差异， 但患牙牙周探诊深度较修复前加深，牙龈指数、龈沟出血指数较修复 前增高。镍铬合金烤瓷全冠修复,个月后，患牙龈下菌斑中与牙周病 关系密切的牙周可疑致病菌魄的阳性检出率较修复前增高，但,,„的阳性检出率与修复前无差别。镍铬合金烤瓷全冠修复后,个月患牙 龈下菌斑中,,的阳性检出率增高，可能成为镍铬合金烤瓷全冠修复 后患牙继发牙周病变的风险因素之一。 关键词:镍铬合金;金属烤瓷;牙周健康;牙周可疑致病菌 ,,, ,,,,,,,;, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,, ;,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,;,:,,,,;,,,,,:,,,;,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ;,,,,(,,,),,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,;, ,,,, ;,,,,,; 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,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,？,,:,,, ,,,,,,,,;,,, ,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,，;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, , ,(,,、,,(,,、, ,(,,、,,(,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,, ,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,;,;, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,(,,,(,,)，,,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,(,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,;,;, ,,,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,,,,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,(,,,(,,)(,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,，,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,，;,,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,(,,、, ,(,,、,(,,、,(,,,,, ,;,,,,,,;,,,,, ,;,,,,,,;,,,,;,,,,,,,(,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,;,;, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,(,,,(,,)(,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,;,;, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,,,,,, ;,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,(,,,(,,)(,,,;,,,,,,,:,,, ,,,,,,,;, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,, ;,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,, ,;,,,,,,(,,,,, , ,,,,,, ,,, ,,,;,,,,, ,,,,—,, ,,,,, ,,,;,,,,, ;,,,,，,,, ,,,？,, ,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,;, ,,,, ,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,，,,,,,,,, ,,,;,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,(,,,,, , ,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,,, ,,,;,,,,, ,, ,,—,, ,,,,,,,,;,,,,, ;,,,,，,,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,?,,,,,,,,,,,, ,,,？,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,, ,,,,,,(,,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,?, ,,,,,,,,,,, ,,,？,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,;, ,,,, ,,,,, ,,,,,(,,,,, , ,,,,,, ,,, ,,,;,,,,, ,, ,,—,,,,,,, ,,,;,,,,, ;,,,,，,,, ,,;,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,?, ,,,,,,,,,,, ,,,？,, ,,, ,, ,,, ,, ,,, ,,,, ,,;,,,, ,, ,,;,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,( ,,, ,,,,,:,,—,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,;,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,; ,,;,,,,, , (，,„(—,一 刖 吾 烤瓷熔附金属全冠(,,,;,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ;,,,,，,,, ;,,,,,)具有合金的强度、烤瓷的美观及良好的生物相容性等优点，是目前冠修复的常规形式【,,。,,,修复体的最终修复效果在很大程度上是依赖于牙周组织的健康水平嘲。但是,,,全冠修复后，由于所用材料、冠边缘的形态位置、修复体的外形、密合性等因素的影响，可能引起患牙牙龈炎、牙周炎、继发龋病。长期、大量的临床病例观察和统计学分析表明，牙周疾病是导致,,,修复失败的主要原因之一【,,,。 镍铬合金烤瓷全冠因抗折强度高，价格低廉，在我国应用较广。但由于镍铬合金烤瓷全冠的金属底冠中含有镍、铬、铍等贱金属元素，其生物相容性、化学稳定性相对较差。研究表明:镍铬合金烤瓷全冠底层金属冠中的金属离子析出可能导致牙龈边缘变色，各种烤瓷熔附金属全冠中，镍铬合金烤瓷全冠修复后发生牙龈变色的比例最高;其金属底冠中的镍、铬、铍等贱金属元素可能引起牙龈的变态反应，导致牙龈的非特异性炎症【,,,〕;底层 金属冠中所含的贱金属因其化学稳定性较差，对微生物生长繁殖影响较大，可破坏口腔原有的微生态平衡,,,。而牙周的微生态失调是牙周疾病发展的关键，某些微生物数量急剧增加或减少，破坏了菌群平衡，会导致牙周疾病的产生。因此，镍铬合金烤瓷全冠修复后对牙周组织健康的影响一直受到关注。 牙周病与细菌检出率的关系研究表明，龈下菌斑中优势菌群与牙周病的严重程度关系密切【,】。龈下菌斑中的牙周可疑致病菌具有显著的毒力或致病性，能够通过多种机制干扰宿主的防御能力，具有引发牙周组织破坏的潜能。牙龈卟啉单胞菌(,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,，,,)、伴放线放线杆菌(,;,,,,,,;,,,,, ,;,,,,,,;,,,,;,,,,,,,，,,)是两种目前公认的在牙周病的发生发展过程中起重要作用的牙周可疑致病菌【,(,,,。,,、,,的感染也被认为是牙周病的危险因素之一【,,,。,,是牙周病，尤其是成人慢性牙周炎病变区或活动部位最主要的优势菌，而健康的龈沟内很少，是目前重点研究的牙周病病原菌之一。,,是革兰氏阴性短杆菌，是近年来在牙周炎的细菌病因学研究中，讨论得最多和研究较深入的细菌之一。现在一般认为,,与侵袭性牙周炎关系密切。部分研究资料表明伴放线放线杆菌感染可能在慢性牙周炎的牙周组织破坏中起着重要作用„,,】。一 目前关于镍铬合金烤瓷修复对牙周健康影响的研究主要集中在镍铬合金烤瓷修复后牙龈变色、牙龈附着水平、龈沟液、龈沟液中的炎症性介质、酶的变化及患牙各项牙周指数的变化等方面。而镍铬合金烤瓷修复后患牙龈下菌斑中与牙周病关系密切的牙周可疑致病菌变化的研究尚少。 本研究通过?鄄炷 鹾辖鹂敬扇 谛薷春螅陡鲈禄佳栏飨钛乐苤甘 谋浠 治瞿 鹾辖鹂敬扇 谛薷炊曰佳姥乐芙】档挠跋欤煌ü 冉夏 鹾辖鹂敬扇 谛薷辞昂托薷矗陡鲈潞蠡佳丽赶戮 咧杏胙乐懿」叵得芮械难乐芸梢芍虏【 校纭?粒峒斐雎实牟畋穑 教帜 鹾辖鹂敬扇 谛薷从牖佳兰谭?乐懿”渲 涞墓叵怠?材料和方法, 材料 ,孔高速手机(,,,公司，日本) 金刚砂车针(,,,,,，日本)(,,号、,,号、,,号、光滑车针) “,,”排龈线(,,,,,，,,,,,,,) 藻酸盐印模材料(登士柏，天津) 超硬人造石膏(贺利氏) 镍铬烤瓷合金(含镍,,(,,,、铬,,(,,、铍,(,,,、锰,(,,,、铝,(,,,、钴,(,,,)(,,,,,,,,，,,,) 瓷粉(松风公司，日本) „玻璃离子粘固剂(,,,,，,,,,,,,),主要实验试剂 ,，,,,,, ,,;,,,,,细菌基因组,,,提取试剂盒(,,,,,,,产品) ,,,,？ ,,, ,,,,,,,,,(,(,, ,,？ ,,,,,,,,,,,，,,，,,,,, ,,,,,,;,，,,,, ,,,,(,;, ,,,(,，, ,,,, ,;,，,,, ,,;,,)(,,,,,,,产品) ,,;,,(,,,,,,产品) 琼脂糖(,,,,,,,,，,,,,,) 无水乙醇(国产分析纯，上海) 溴化乙锭(,,,,,,,, ,,,,,,,，,,,,,，,,,) , ,,,,缓冲液(,,,,,,产品) 溴酚蓝(,,,,,,, ,,,,,,，,,,,,,,产品) ,,, ,,,,,,(,,,,,, ，，,,,,,,,产品) ,,: ,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,一,?(,,,,,) ,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?(,,,,,,,,,) ,,,扩增产物长度为,,, ,, ,,: ,?一,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?(,,,,,)， ,?,, , ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,一,?(,,,,,,,,,) ,,,扩增产物长度为,,, ,, 本实验使用的被检测细菌引物均为以该细菌的保守基因序列,,,,,,,为模版的菌种特异性引物，引物序列参照文献〔,,,,,】。由上海生工生物技术服务有限公司合成。细菌标准株,,(,,,,,,,,,)、,,(,,,, ,,,,,)由四川大学华西医学中心口腔医学院口腔生物医学工程重点提供。,主要实验仪器 ,,,;,,龈下刮治器(上海医疗器械九厂)? 快速混匀器(,,,,(,，姜堰新康医疗器械有限公司) 电子分析天平(,,,,,，梅特勒一托利多仪器上海有限公司) 超净工作台(苏净集团安泰公司) 低温高速离心机(,,,,,,，,,,,,,,) 微量移液器(,,,,,,,,,，,,,,,,)(,(,—, ,，，,,，,,,,,,，,,,?, ,,,,,) ,,,，,，,, ,,, ,,,,凝胶成像与分析系统(,,,，,，,,，,,,,,) 恒温水浴箱(,,,(，，北京医疗设备厂) 格兰仕微波炉(,,,,,,,,,(,，广东格兰仕集团有限公司) 纯水仪(,,,,,,,,,，,,,) 水平电泳仪(,,,,,,,型，北京六一仪器厂) 低温冰箱(,,,,,，,,,,,) 紫外光透照仪(,,(,,,,，上海晴桑电子科技有限公司) 核酸测定仪(,,,,,,,,, ,,,，,,,) ,,,仪(,，,—,,,，,,,),研究对象,(, 病例选择 随机法抽取,,,,年,月到,,,,年,月期间在泸州医学院附属口腔医院修复科对第一磨牙行镍铬合金烤瓷全冠修复，且牙周健康的患者,,例;男性,,例，女性,,例，平均年龄,,(,,,,,(,岁，其中上颌第一磨牙,,例，下颌第一磨牙,,例。,(,纳入标准 (,)进行镍铬合金烤瓷全冠修复的患者应无牙周病史，从未戴过任何修复体。因龋坏、隐裂、牙髓病治疗后行保护性修复或牙釉质发育不良等需要进行镍铬合金烤瓷全冠修复。 (,)进行镍铬合金烤瓷全冠修复的患牙均为第一磨牙。 (,)进行镍铬合金烤瓷全冠修复的患牙要求无明显松动，牙龈基本无炎症(牙龈指数?,)，牙周组织正常，牙周探诊深度弋,,,,，牙槽嵴无明显吸收，并且无根尖周病变，口腔卫生良好(菌斑指数?,)。 (,)进行镍铬合金烤瓷全冠修复的第一磨牙对侧同名天然牙和对颌牙为健康的天然牙。 (,)所有镍铬合金烤瓷全冠均由同一义齿加工制作中心制作完成。修复体制作完善，没有缺陷、砂眼、缩孔等;修复体形态参照对侧同名天然牙，正确的恢复患牙的颊舌面突度和牙合面形态。 (,)修复体经试戴调整边缘密合无间隙、台阶、悬突(探针能在修复体边缘与肩台之间无障碍移行)，邻接关系良好、形态色泽满意、固位力良好、不翘动、与对颌牙形成良好的咬合关系、正中及非正中咬合均无早接触。 (,)患者在镍铬合金烤瓷全冠戴入,个月后复诊。,(,排除标准 一 (,)标本相应的临床和检查资料不全。 (,)有全身系统性疾病，或干燥综合症等口腔系统疾患。 (,)有近期服药史(,个月内)。 (,)不愿意参加试验者。,(,条件控制 (,)修复前对患者口腔余留牙的龋病和牙周情况进行一次全面的检查和治疗，并进行超声龈上洁治术，使各项口腔卫生指数达到较低水平。 (,)所有患者均在龈上洁治后,(,周再进行镍铬合金烤瓷全冠修复。 ? (,)复查期间的近,个月内未进行牙周洁治，没有服用抗生素和类固醇药物。不吸烟，妇女不处于妊娠期。 (,),,,腔的清洁除牙膏(含抗出血成分的牙膏除外，如云南白药牙膏等)和自来水外不使用含抗生素或其它化学物质的清洁剂或含漱液。 (,)戴义齿时认真给患者讲清楚义齿使用及保护 的相关注意事项，在观察期内不做专业性的口腔卫生指导和特殊预防。,(,牙体预备 牙体预备方式同常规，参照巢永烈主编的《口腔修复学》【?。牙体预备之前用“,,”排龈线排龈，尽可能减少牙体预备过程中对牙周组织的损害。肩台的位置设于龈下,(,,,(,,,，冠边缘的位置不超过或到达龈沟底。唇侧颈缘预备成宽,(,,,(,,,，与根面角度为,,,,的凹面肩台。舌侧颈缘制备成,(,,,(,,,宽的凹型肩台。各面颈缘连续，形成一整体，肩台内角圆钝边缘光滑。牙体预备完成后用“,,??排龈线排龈、藻酸盐印模材料取模、超硬石膏灌注模型、,,,,比色板比色、送义齿加工制作中心完成修复体制作。,(,修复完成 所有的镍铬合金烤瓷全冠均由成都口口义齿加工中心制作完成。经试戴调整边缘密合无间隙、台阶、悬突(探针能在修复体边缘与肩台之间无障碍移行)，邻接关系良好、形态色泽满意，固位力良好、不翘动、与对颌牙形成良好的咬合关系、正中及非正中咬合均无早接触。修复体调改完成后用烤瓷专用抛光轮抛光、隔湿、,,,酒精消毒修复体和牙面、吹干、,,,,玻璃离子粘固剂粘固。待粘固剂硬固后去尽多余的粘固剂。戴义齿时认真给患者讲清楚义齿使用及保护的相关注意事项，在观察期内不做专业性口腔卫生指导和特殊预防。修复完成后有修复后疼痛或不适的患者应及时就诊并予以调改。, 实验方法,(,口腔检查 在患者进行镍铬合金烤瓷全冠修复前记录患牙和对侧同名天然牙的各项原始牙周指数，包括菌斑指数(,,,？,, ,,,,,，,,，)、牙周探诊深度(,,,,,,, ,,,,,，,,)、牙龈指数(,,,,,,,, ,,,,,，,，)、龈沟出血指数(,,,;,, ,,,,,,,, ,,,,,，,,，)。各牙周指数的记录标准参照文献【,,,。同时收集患牙及对侧同名天然牙的龈下菌斑标本。患者在镍铬合金烤瓷全冠粘固后,个月复诊。复诊时详细记录每位患者的患牙及对侧同名牙的各项牙周指数，收集龈下菌斑标本，同时记录患者的口腔卫生习惯。,(,龈下菌斑的采集 受试者用温水漱口，去除口腔食物残渣，灭菌棉卷隔湿，灭菌干棉球擦净牙面，用灭菌,,,,,,龈下刮治器伸入龈沟最深处刮取龈下菌斑，然后立即将所获得的龈下菌斑置入盛有,(,,,生理盐水的无菌,,管中。标本在(,,,,低温保存备用。待阶段取样结束后再进行实验室检测。,(,龈下菌斑中,,、,,的检测,(,(, 聚合酶链式反应(,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,,，,,,)模版的制备 龈下菌斑样本和细菌标准株,,,的提取:按照,，,,,,,细菌基因组,,,提取试剂盒说明进行操作:,(标本在室温解冻,,分钟，, ,,,,,,,离心，去尽上清液，加入,,,,,,,缓冲液,,，振荡至菌体彻底悬浮;加入,,,乩,蛋白酶,，混匀。,(加入,,,,,缓冲液,,，振荡,,秒，,,,,水浴,,分钟。,(加入,,,,,无水乙醇，充分振荡均匀，将得到的所有液体全部加入带有收集管的吸附柱中，,,,,,,,,离心,,秒，倒掉废液。,(在吸附柱中加入,,,,,,漂洗液，,,,,,,,,离心,,秒，倒掉废液。,(重复步骤,一次。,(将吸附柱放回收集管中，,,,,,,,,离心,分钟，倒掉废液，并将吸附柱置于室温中放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。,(将吸附柱转入干净的,,管中。向吸附膜中间部位悬空滴加,,,,,洗脱缓冲液,,，室温放置,分钟，,,,,,,,,离心,分钟，将含,,,的溶液收集到,,管中。,(用核酸蛋白测定仪检测,,,的含量和纯度，浓度为,(,—,(,,‖山，,,?,,,,为,(,—,(, 者可用作,,,扩增反应的模板。,(符合,,,扩增反应的模板要求者(,,,,保存，备用。,(,(, ,,,扩增反应 ,,,反应体系为,,,,,,,,,,？ ,,, ,,,,,, ,,, ,,(,,,、模板,,,样品,,,、引物各,,,(浓度为,,,,)、,,,,,补充体积至,,,,,。,,,反应扩增条件如下:,,,,预变性,分钟、,,,,变性,分钟、,,,,退火,,秒、,,?延伸,分钟，,,个循环，最后的一次循环,,?延伸,分钟。 每次反应均加入,,或,,标准株作为阳性对照，加入双蒸水作为空白对照。 所有操作在超净工作台上完成，在冰上进行加样，严格加样顺序，.