蛋白质含量的测定

蛋白质含量的测定 生技11314 24/4 1-2 实训 蛋白质含量的测定 实际操作 ,一,药剂准备及蛋白质的消化 1、器皿清洗烘干, 以端正与科学严谨的态度～熟2、药剂的配制, 悉常规药剂的配制及器皿的洗涤3、蛋白质的消化 技术～熟悉蛋白质消化仪的使用～ 掌握蛋白质消化原理及方法。 清洗液的配制及洗涤技术,药剂配制方法及不同药剂配制注意事项～ 蛋白质的消化及消化仪的使用方法 消化过程中异常现象的处理,消化温度与消化结果好坏这间的关系 《农产品检验技术》、《食理化检测技术》、《化学手册》、食品网 站 姜放军 生技11314 24/4 3-4 实训 蛋白质含量的测定 实际操作 ,二,药剂准备及蛋白质的消化 1、蛋白质的消化, 以端正与科学严谨的态度～熟2、蒸馏装置的准备及安装, 悉常规药剂的配制及器皿的洗涤3、滴定装置的准备 技术～熟悉蛋白质消化仪的使用～ 掌握蛋白质消化原理及方法。 药剂配制方法及不同药剂配制注意事项～蛋白质的消化及消化仪的使 用方法 消化过程中异常现象的处理,消化温度与消化结果好坏这间的关系 《农产品检验技术》、《食理化检测技术》、《化学手册》、食品标准网 站 姜放军 生技11314 24/4 5-6 实训 蛋白质含量的测定 实际操作 ,三,蒸馏、吸收与滴定 1、消化液的稀释, 以端正与科学严谨的态度～熟2、消化液的蒸馏、吸收, 悉蛋白质蒸馏、吸收装置的使用3、吸收液的滴定, 及原理～进一步熟悉滴定技术。 4、单的填写 蛋白质的蒸馏与吸收装置的使用及注意事项～吸收液的滴定 蒸馏过程中异常现象的处理,蒸馏时间及加入碱液量的控制 《农产品检验技术》、《食理化检测技术》、《化学手册》、食品标准网 站 姜放军 检测项目 蛋白质含量的测定(婴儿奶粉) 检测任务: 四人一组，以组为单位，每组完成婴儿奶粉中总蛋白质含量的测定。并填写一份报告单。 检测标准:GB 5009.5-2010 技能培养: 1、 掌握微量凯氏法测定蛋白质总氮量的原理及操作技术; 2、 掌握凯氏微量定氮仪的使用; 3、 进一步熟悉天平的称量及试剂的配制操作。 实训内容: 一、原理(凯氏定氮法) 食品经加硫酸消化使蛋白质分解，其中氮素与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后，再用盐酸或硫酸滴定根据盐酸消耗量，再乘以一定的数值即为蛋白含量。 二、试剂与仪器: 1、硫酸钾; 2、硫酸铜;3、硫酸;4、2,硼酸溶液 5、40,氢氧化钠溶液 6、混合指示剂 7、0.O1N HCL标准溶液或0(01N硫酸标准溶液。 8、凯氏微量定氮仪一套。9、凯氏烧瓶100m1或50ml一只。 10、三角瓶150ml 3只。11、量筒50ml、lOml、lOOml。 12、吸量管10ml只。13、酸式滴定管1支。 14、容量瓶100毫升1只。15、小漏斗1只。 四、操作方法: 1、 样品处理:精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品(约相当氮30-40mg)，移入干燥的100ml或500ml凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内 液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗凯氏烧瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵用同一方法做试剂空白试验。 2、 装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 3、在接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。 同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。 五、结果计算: (V- V)×C×0.014×10 12 X, ×F m X:样品中蛋白质的含量，%; V:样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml; 1 V:试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml; 2 N:盐酸标准溶液的物质的量浓度;0.014:1N硫酸或盐酸标准溶 液1ml相当于氮克数; m:样品的质量(体积)，g(ml); F:氮换算为蛋白质的系数。 注: (1)样品应是均匀的，固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。 (2)样品放入凯氏烧瓶内时，不要沾附瓶颈上，万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。 (3)消化时如不容易呈透明溶液，可将凯氏烧瓶放冷后，慢慢加入30%过氧化氢2-3ml，促使氧化。 (4)在整个消化过程中，不要用强火，保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏烧瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。 (5)如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用，因此当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。 (6)加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。 (7)混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。 (8)氨是否完全蒸馏出来，可用PH试纸试馏出液是否为碱性。 (9)吸收叶也可以用0.01当量的酸代表硼酸，过剩的酸液用0.01N碱液滴定，计算时，A为试剂空白消耗碱液数，B为样品消耗碱液数，N为碱液浓度，其余均相同。 (10)以硼酸为氨的吸收液，可省去标定碱液的操作，且硼酸的体积要求并不严格，亦可免去用移液管，操作比较简便。 (11)向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀物，这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分解生成氧 +化铜的沉淀。有时铜离子与氨作用，生成深兰色的结合物[Cu(NH)] 34