【doc】正常人和结石病人尿中不同分子量的分离物对草酸钙晶体的影响

【doc】正常人和结石病人尿中不同分子量的分离物对草酸钙晶体的影响 正常人和结石病人尿中不同分子量的分离 物对草酸钙晶体的影响 1994年第11卷第6 4一" 正常人和结石病人尿中不同分子量的 分离物对草酸钙晶体的影响? ?343? , .尸,.口2 辛殷旗'冯陶'窦长琪'沈绍基' _?_'一..''一 摘要尿中不同分子量的大分子分离物,由于分子量化学结构,化学性质的不同,对尿石形成的 作用也不相同.而分子量相同的大分子分离物,正常人和病人也有明显的差异作者认为这种差异是结 石形成的一十重要因素,也是我们进一步探讨尿石症发病机理的一十新突破口. 关键词皂!至星互垦中坌至筮直盟曼生长理劁塑錾晶体聚集抑制指数 本文用粒度分布Zeta电位测定技术,重 点研究了正常人和含钙结石病人泵中不同分子 量的太分子物质对草酸钙晶体形成的影响. 材料与方法 我们用超滤法将10例古钙结石病人及10倒正常 人24小时尿中的大分子物质按其分子量(Daltons)分 成了四组:5K~IOK}10K~80K'80K,llOK}>llOK. 一 , 粒度分布涮定在种晶体系下,参照Robert- a0n和Ryall的实验方法一以150ml预先配好的一水草 酸钙亚稳溶蔽,加入2.5ml草酸钙种晶(Ig/m1)作对 照组,各不同分子量的大分子物质为实验组.用粒度仅 测定零时刻的粒度分布,然后样品于37?恒温摇床中 孵育四小时,再测粒度分布.根据结晶的体积和数量的 变化,将Ryall的数学模型(见公式1,2),运用到Louts 软件及数据库软件中,计算中不同分子量的大分子物 质对草酸钙晶体形成的生长抑制指数Ig和聚集抑制 指数h.公式表达如下 Ig=—(V— c — -- — Vo)— -- =: (Vt— -- 一 Vo)×10OC1)————一 x1uo Ia一—(N— c— -- — N j o — )— -- —— (N— t — -- — N— o)×10O(2) Nc—No)……… 式中Vo,No分别为零时刻的粒子体积和总数} Vt,vc分别为孵育后实验组与对照组的粒子体积INt Nc分别为孵育后实验组与对照组的粒子总数. 二,Zeta电位铡定我们用超滤法将l0倒古钙结 石病人与1o倒正常人二十四小时尿的混合样,按上述 粒度分布实验的分组方法分成四组,参考Ctwreri和 Finlayson的实验方法,用DMP-I型微电泳便,在 1O人工尿的一承草酸钙悬液中.测其Zeta电位.具 体方法如下:将27mi一承草酸钙晶体悬液与3m!人工 尿混匀.搅拌10分钟后注入电泳槽,在仪器附带的显 散镜下测定15个粒子的电泳迁移率,经温度和电导率 的棱准,用公式(3)求出Zeta电位的均值 ?(印)一塑(3) 结果 一 ,粒度分布实验粒度分布实验得到了 孵育前后晶体粒子体积和数量变化的原始数 据,经数学模型及计算机软件处理后得到Ig与 Ia值.见表1. 表I正常人ON)与结石病人(s)尿中大分子物 质各组分生长抑制指数Ig,聚集抑制指数 Ia表 ? …, 一 lr 用2正常人(N)与结石病人(s)尿中大分子物 质各组分翼集抑制指数Ia 课暂国家自然基盘资助课露 '北京医科太学泌尿外科研究所100083 图l,2所示为正常人(N)与结石病人 (s)尿中大分子物质各组分生长抑制指数Ig及 聚集抑制指数Ia见图l,2. 二,Zeta电位实验利用公式(3)求出不 同分子量的Zeta电位值数据.见表2.' 衰2正常人(N)与结石病人(s)尿中大分子物 质的Zeta电位(zP)的敖据表 zP(一mv)空白对照5-10kdlO-80M80--110kd>11Old S24.9825.0912.0717.6821.72 5ld1….0'd10d'…(h01 _{:6卫^ 强3正常人(N)与结石病人(s)尿中大分子物 质的Zeta电位(ZP) 图三所示为正常人(N)与结石病人(s)尿 中大分子物质的Zeta电位图.其中Zp:一 24.98my为空白对照组的Zeta电位.见图3. 讨论 本实验中,分子量为5k,10k组,病人与 正常人尿中分离物对草酸钙晶体的生长与聚集 都有抑制作用.这可能是对尿石有抑制作用的 酸性粘多糖(GAGs)单体的分子量大致都在这 一 区间所致.在10k~80k组.正常人和结石病 人则有显着不同,前者尿中大分子物质对草酸 钙晶体的生长和聚集都有较强的抑制倾向,而 后者则显示出明显的促进作用,从分子量看,这 里主要包括了TH蛋白的单体(80kd)以及近 年来发现的肾钙素(14kd),这表明正常人和结 石病人尿分离物的成份有明显质的差异.分子 量为80k,ll0k组,两者的h,Ig都反映出抑 制倾向,但正常人的这种抑制倾向明显高于病 人组.进一步的分析证明这一组主要成分也是 19年第11卷第6 TH一蛋白单体.说明两组之间存在量的差异. 在分子量大于l10kd组,两组都显示出明显的 促进作用.这很可能是大分子物质聚合后所导 致的结果. Zeta电位测定反映了大分子物质吸附后, 晶体粒子表面电荷密度的变化.Zeta电位负值 的升高,表明粒子间排斥力的加大,聚集抑制 作用的增强.而负值的降低,则表明晶体粒子 聚集倾向加大.图3可以看出.其结果基本与 粒度分布实验所得结果相一致.只是在10k, 80k组结果有些差异.这可能是由于Zeta电位 实验为l0例病人的TH蛋白混合在一起,而综 合地表现出更明显的促进作用所致. 结果表明:相同分子量的大分子物质,正 常人和病人对寄馥钙晶体的作用有明显的不 同,前者更多的对其生长和聚集起抑制作用.而 后者相反起促进作用.我们认为这是结石形成 的一个重要因素. 参考文献 1.RyaURL,t~g[eycJ,Marsh.allVmlpent?脚m衄t of,growthandaggreti?ofcalcium"山cr3~sta]s uslngtheeoulte~caI】me^InvestUrd,191~1,18I4(11? 2.Na~awaY,AbramV,P盯hJIttetal?uneglycopmt1 crystalgrowthinhibitors1eenceforamolecularabn. ma[ityincalciumox~laten印olithiasi~-Jch1nl~vest, 1985.76?1455 3.Nish~s,AbeY,wakatsukiA,且1.Matrixgcosamln~ )'caminurinary-幻ne.Jur.l,1985,134I5(13? 4.~rensonS,HansnK,:BakS,亡tal-^nu盯Anidemitied?lacro_ ?olecul~inhib~toryconstitute0fe~lium~xa[atecrystal grower.mhumanu而.UrolRes.1990t18t37 5.Robert.on"fiG.sc啦璐.Modifiersof曲m嘣hte坤s_ mlli~tnf0undint.LSeadi~tbac0ndntlaI?crlrs. ~lllzeruBlgannrt~ieialmine.JU砌,1986,135I1327 6.HaIlsonPC,IseGAUroi幽andi地stonef0rr?a. tiot~.Lancf1979,1:1000. 7.Meyer儿tSmithLH.Growth.fc~leium0瑚lateer~ta[s IInhibitionbyl~tura]?ary叮rm1growthinl1tars. ItUI.1.1975.13I3 (收穑1993—12—29,修面1994—05—25)