精液寥落细胞学[精华]

精液寥落细胞学[精华] 精 液 脱 落 细 胞 学 作者:www.yunyufuke.com 时间:2012-8-6 广义的精液脱落细胞学包括:精子动力学、精子功能学、精子形态学、生精细胞学、精液生物化学等内容;狭义的精液脱落细胞学包括“精子形 态学”和“生精细胞学”，主要以精子形态学为依据，包括:精子、生精细胞、粒细胞、红细胞、巨噬细胞、线索细胞、细胞骨架、结晶、细菌有形 成分。“精液脱落细胞学”的创立应用，显著提高了精子精液诊断的准确性和科学性，减少了治疗的盲目性。 精液脱落细胞学的临床应用 1、评估精子受精能力 精子顶体完整率反映精子穿卵、穿宫颈粘液的能力。顶体缺陷与男性不育密切相关，其对精子受精能力的影响依其缺陷程度而不同，如顶体缺失者没有受精能力;顶体不规则的精子很难穿透卵子透明带，受精能力也很低;精子缺乏后顶体鞘则不能与卵子结合，妨碍受精进行等。 精子没有顶体和顶体后膜常与尾部异常同时出现。在不育症患者的精液中，常见精子头部完全被胞质覆盖，精子顶体尖端内凹和尾部外周纤维内轴丝不规则。精子中段的胞质小滴，是精子细胞胞质的部分残余。含有中段胞质小滴的精子过多，明精子在附睾成熟过程中有病理过程，可能与生殖机能衰竭有关。如果禁欲时间太短，而精子上有大量胞质小滴，表示附睾功能不足。 正常精液中畸形精子少于20%,如>40%将影响精液质量,>50%常可导致不育。精索静脉曲张、感染、外伤、睾丸应激、高温、放射线、酒精中毒、yao物、激素失调或遗传因素均使畸形精子增加。但精索静脉曲张者的精子密度如>10×106/ml,一般不提倡手术治疗。 2、评估成年男子睾丸生精能力 过去多采用睾丸活检，不仅给患者带来痛苦，而且易使患者体内产生抗精子抗体。用精液生精细胞学检查取代睾丸活检有重要临床应用价值。无论生育与不育男性精液中均可能存在一定比例的精子和/或生精细胞。生育男性精液中，约25%的人可检出生理性生精细胞。不育男性精液中非精子细胞总量为正常生育男子精液的3.7倍，其中未成熟的生精细胞增加2.38倍。通过检测精液中精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞的量的异常和比例异常(指其中一种或一种以上生精细胞的比例超出正常范围)，可帮助临床评估睾丸生精损害程度和恢复能力，为睾丸性病因提供客观指标，为无精子症、少精子症的病因分析提供科学依据。同时，通过动态观察精液生精细胞的变化，有助于临床男性不育症治疗的疗效观察和预后判断。 3、鉴别诊断输精道梗阻性无精子症 无精子症病因包括两大类:一是睾丸生精障碍;二是输精道梗阻。因为生育男性与不育男性精液中均存在一定数量的生精细胞，病理状态下还可能存在非生精细胞(如支持细胞)，但双侧输精道完全性梗阻患者精液中，不可能出现生精细胞。所以，精浆中一旦出现生精细胞和/或支持细胞等，说明精道是通的，可排除梗阻，诊断为睾丸性生精障碍。反之，精液细胞学检查未见生精细胞，也无其他非精子细胞成分(如支持细胞等)，若睾丸大于12ml,质地正常，临床则可判断精道梗阻。结合精浆前列腺素D合成酶缺乏等可确诊。 4、鉴定精液白细胞 常规精液检查常把脱落的生精细胞误认为白细胞，导致临床抗感染治疗无效，延误了正确的诊断和治疗。当精液中白细胞数>1×106/ml时，称为白细胞精子症，应进行旨在确定是否有副性腺感染的微生物学检查，包括初尿、中段尿、前列腺按摩液和前列腺按摩后的尿的检查。 原因不明性男性不育症和支原体感染不育症者的精液中，非精子细胞的各种成分，除支持细胞外，均有增加。与正常生育者的精液相比，非精子细胞总量增至3.7倍，其中未成熟生精细胞增加2.38倍，白细胞增加5.6倍，多形核白细胞增加4.6倍，巨噬细胞增加5.2倍，而淋巴细胞则增加11.3倍，并且主要增加的是CD4+细胞。精液中大量出现的白细胞及其产物，主要通过干扰精子活动力、精子运动速度，以妨碍精子成熟、降低精子密度和影响穿透卵子的能力。但精液白细胞与感染间的关系存在争议，需作具体分析。白细胞对精液质量的影响，取决于它进入精浆的部位、白细胞类型以及它们的活性状态。鉴于人精子对氧化反应的敏感性，嗜中性白细胞很可能具有破坏性，尤其是细胞浸润发生在睾丸网或附睾水平。 反之，在射精瞬间由前列腺和精囊腺进入的白细胞的有害作用可能较弱，因精浆具有强抗氧化作用。精液中的单核/巨噬细胞很可能发挥一些正常生理功能，如抵抗外来微生物感染，吞噬退化的细胞残体，破坏并清除死亡或未成熟的精细胞等都是有益的。这就要求对精液中发现的圆细胞，不仅要确定是不是白细胞，还要进一步作白细胞分类，以明确精液白细胞的临床意义，这正是精液细胞学检查的优势所在。但需注意，无白细胞并不能排除副性腺感染的可能，解释要慎重。 “精液脱落细胞学”检查 1、方法 手淫法留取精液并液化;取液化精液离心(500-2000r/min)10min;沉淀用PBS液或等渗盐水洗涤3次(每次500r/min，离心5min);配制5×106/ml浓度的精子悬液(无精子症除外);采用“拉薄”技术制片，95%乙醇固定30分钟，自行干燥;用瑞一姬染液(10:1)染色30,60s(随室温变化而定);加等量pH6.9磷酸盐缓冲液染色10min;自来水冲洗，自然干燥;光学树脂封片，油镜镜检;计数200条精子、200个生精细胞，分别行精子顶体完整率计算，精子细胞形态、生精细胞形态分类。在精液中如发现其它细胞成分，如支持细胞、尿殖道上皮细胞、外周血细胞、阴道毛滴虫及病原微生物(念珠菌、芽生菌、球孢子虫、隐球菌)等均应按相关检查要求作好记录。 2 、参考值 ?精子顶体完整率(%)=(顶体完整的精子数 / 精子总数)×100%;生育男子精子顶体完整率为90.5?6.1%，不育男子精子顶体完整率为84.8?11.3%。 ?精子形态:张秀成报告生育男子正常形态精子为61-94%，平均80.7?9%，低于70%的仅占2%左右，一般认为畸形精子<20%;但WHO定为正常形态精子>30%，且要求精子头部正常即可。 ?生精细胞分类:正常生育男性精液中，非精子细胞占精液细胞总数的1.88%，其中未成熟生精细胞为大多数，占85.8%。常见的有精子细胞70%、初级精母细胞8.0%、次级精母细胞7.0%，精原细胞较少见0.8%;而不育男性精液中，各生精细胞平均值为精原细胞6.0%，初级精母细胞8.8%，次级精母细胞9.5%，精子细胞75%。 ?正常精液圆细胞数<5×106/ml;白细胞数<1×106/ml，占非精子细胞总数的9.1%,其中多形核白细胞占5.4%，巨噬细胞占2.6%，淋巴细胞占1.1%。在淋巴细胞中主要是T细胞，以CD8+T细胞居多，T细胞:B细胞为16.5，CD8+细胞:CD4+细胞为3.6。 来源:www.xsdyy.com “精液脱落细胞学”注意事项: ? 用液化精液直接涂片，背景不清晰，染色效果差; ? 离心速度不宜超过2000r/min，时间不宜超过10’，以免破损精子及细胞; ? 瑞一姬染液宜临用前(10:1)配制，不能渗入水，以免出现沉渣; ? 染色时间随温度变化而改变。 “精液脱落细胞学”四大优势 1、创伤小，痛苦小，无并发症。 2、能大幅提高治愈率。男性不育病因复杂，不能尽可能准确地判明病因，凭经验进行治疗，是不育症疗效不佳的主要原因。对症治疗，自然能大幅提升治愈率; 3、“互证诊疗”，良性循环。“精液脱落细胞学”为临床治疗提供依据，治疗结果反过来又过诊断结果进行验证，两者相互促进，使“诊”、“治”进入良性循环状态; 4、判断疗效，确定疗程。“精液脱落细胞学”在判明治疗效果上，也有特殊的作用:如拥有“生精细胞”的无精症患者，疗程比较长，很难在短时间内产生精子，传统的精液检查自然看不到精子，无法判断治疗效果，而如果做“生精细胞分析”，根据生精细胞数量及形态的变化，判断疗效，确定疗程，大大提高患者的信心。