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医学论文-单核细胞趋化蛋白1在牙髓中的免疫组化研究

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医学论文-单核细胞趋化蛋白1在牙髓中的免疫组化研究医学论文-单核细胞趋化蛋白1在牙髓中的免疫组化研究 论文关键词 单核细胞趋化蛋白1 牙髓炎 论文摘要 目的:探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在牙髓炎发生、发展中 的作用机理,为揭示MCP-1对牙髓炎性疾病发生、发展的作用提供依据。方法: 采用免疫组织化学方法检测正常人及急、慢性牙髓炎患者牙髓组织中MCP-1的表达。结果:MCP-1在正常牙髓组织中无表达,在炎症组织中有不同程度的表达。 检测标本来自长春市口腔医院2004年3~9月口腔内科门诊患者,急、慢性 牙髓炎各20例,健康牙髓20例(烤瓷牙需要拔髓者),患者年龄...
医学论文-单核细胞趋化蛋白1在牙髓中的免疫组化研究
医学论文-单核细胞趋化蛋白1在牙髓中的免疫组化研究 论文关键词 单核细胞趋化蛋白1 牙髓炎 论文摘要 目的:探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在牙髓炎发生、发展中 的作用机理,为揭示MCP-1对牙髓炎性疾病发生、发展的作用提供依据。: 采用免疫组织化学方法正常人及急、慢性牙髓炎患者牙髓组织中MCP-1的表达。结果:MCP-1在正常牙髓组织中无表达,在炎症组织中有不同程度的表达。 检测标本来自长春市口腔医院2004年3~9月口腔内科门诊患者,急、慢性 牙髓炎各20例,健康牙髓20例(烤瓷牙需要拔髓者),患者年龄18~50岁,所有患者2个月内无服用免疫抑制剂及抗菌药物史, 标本处理:标本用10%中性福尔马林浸泡,常规脱水,石蜡包埋,制备4~5μm厚切片,分别作HE染色和免疫组化染色。HE染色结果作为病理学分组, 主要试剂、仪器:MCP-1单克隆抗体(TBD公司),SABC显色试剂盒(武汉博士德公司),S-P超敏试剂盒(迈新 免疫组化染色:石蜡切片常规脱蜡水化,PBS冲洗3分钟×3次,高温加热修复抗原(加热至95?关火,室温放置自然冷却,蒸馏水冲洗3次,PBS浸泡5分钟);PBS冲洗3分钟×3次;滴加过氧化酶阻断溶液(试剂A)室温下孵育 15分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗3分钟×3次;滴加正常非免疫动物血清(试剂B),室温下孵育10分钟;除去血清,滴加第一抗体(稀 释浓度1?[KG-*2]50),4?过夜。PBS冲洗3分钟×3次;滴加生物素标记的第 二抗体(试剂C),室温孵育10分钟,PBS冲洗3分钟×3次;滴加链霉素抗生物素-过氧化物酶溶液(试剂D),室温孵育10分钟,PBS冲洗3分钟×3次;DAB显色,自来水冲洗,苏木素复染,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。阴性对照采用PBS代替一抗, 免疫染色结果显示,在健康牙髓组织中未见明显的MCP-1表达阳性细胞,在急慢性牙髓组织中MCP-1有不同程度的阳性表达,阳性染色细胞数量不均,阳性 染色程度不一致,阳性表达为分布于细胞浆呈棕黄色的颗粒状物。表达MCP-1的细胞主要是单核/巨噬细胞和血管内皮细胞,中性粒细胞,成纤维细胞。在慢性 炎症牙髓组织中还可观察到新生的毛细血管上有MCP-1表达阳性细胞。急、慢性 MCP-1在炎症性疾病中的作用:大量的炎性疾病中都发现了MCP-1的存在,与单核/巨噬细胞免疫作用有关的疾病大多有MCP-1 首先,MCP-1对单核/巨噬细胞具有激活和趋化的双重作用。实验证明MCP-1 促使嗜碱性粒细胞释放组胺的速度相当快,能在1小时内达到最高水帄。MCP-1在炎症反应时与单核/巨噬细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞的激活有关联,在免 疫应答中起重要作用,具有促炎的作用。 其次,由于MCP-1的缺失可以导致IL-4、IL-5、IL-10分泌受抑制,从而导致Th2型免疫反应受抑制,MCP-1在Th2型细胞因子的定位方面具有重要作用, 促进巨噬细胞选择性激活途径的抗炎过程,是Th2型免疫应答必不可少的重要因 素[1]。而正是Th1细胞向Th2细胞的不断转化导致巨噬细胞选择性激活,抑 制经典激活的巨噬细胞的抗原提呈作用和促炎因子的分泌,并通过分泌血管生成 因子和成纤维因子促进组织的愈合,从而避免炎症反应过度对组织造成的损害。 这证明MCP-1 MCP-1在炎症牙髓中表达的意义:在本实验中观察到,急、慢性牙髓炎症组 织中存在MCP-1阳性表达,正常牙髓组织中没有表达,这证明MCP-1作为一种诱导性表达趋化因子,在牙髓炎中存在的内毒素、细菌释放的各种酶、代谢产物、 炎症介质及其他损伤因子的刺激和诱导下上调表达,参与了牙髓炎症反应。由 于 MCP-1对单核/巨噬细胞的强烈趋化作用,MCP-1在炎症牙髓中的表达为炎症区单核/巨噬细胞的存在提供了机制性解释,同时趋化的单核/巨噬细胞再度表达MCP-1能够再趋化和激活更多的单核/巨噬细胞到炎症部位,在炎症反应中起到 一种级联放大的作用。实验中观察到,慢性牙髓炎组织中MCP-1的表达比急性组略有增高,同时慢性组的单核/巨噬细胞数量也比急性组高,这说明MCP-1是单核/ 在慢性炎症组织中观察到,除一些 炎症细胞表达MCP-1外,血管内皮细胞和成纤维细胞也表达MCP-1,并且在新生的毛细血管上有MCP-1阳性表达,这说明MCP-1参与了慢性炎症的恢复过程。 MCP-1在血管内皮细胞中的表达,提示MCP-1有助于单核细胞穿越血管内皮细胞, 到达炎症部位。MCP-1可以调节单核细胞表面特异性黏附分子CD11c、CD11b的表达,激活血管内皮细胞黏附分子的表达,导致单核细胞与内皮细胞紧密接触, 在部分炎症组织中,我们观察到中性粒细胞有阳性表达,这与以往报道不同。 Johnston B[2]等在观察小鼠慢性脉管炎模型时也发现,在由MCP-1引起的募集的白细胞中,不是单核细胞而是中性粒细胞占大多数。流式细胞分析显示,CC趋化因子受体CCR1、CCR2在小鼠慢性诱导脉管炎炎症部位聚集的中性粒细胞上 有异常表达。Raffaella[3]等也有类似的发现。这些实验都从不同的角度提示, 在炎症的具体条件下,趋化因子受体的表达可能发生调整,而趋化因子(包括 MCP-1)主要通过与相应的受体高亲和结合发挥生物学功效。因此对趋化因子受 体的进一步研究将有助于进一步解释炎症条件下各趋化因子的“行为”,也可以 目前,在各种炎性疾病的治疗领域针对MCP-1的治疗方法越来越多,其中肌 肉注射含有MCP-1拮抗剂7ND基因的质粒抑制动脉粥样斑块的形成,正处于临床 应用阶段,试验证明是安全的,有望成为比药物治疗更有效的治疗方法。可以预 见,通过对给药方式、给药途径的改进,针对MCP-1的治疗将为恢复牙髓炎症提 1 WimNo?l Infection Stage-Dependent Modulation of Macrophage Activati on in Trypanosoma congolense-Resistant and -Susceptible MiceInfect Im mun,2002,70(11):6180-6187. 2 Brent Johnston.Chronic inflammation upregulates chemokine receptors and induces neutrophil migration to monocyte chemoattractant protein -1.J Clin Invest,1999,103(9):1269-1276. 3 Raffaella Bonecchi Up-Regulation of CCR1 and CCR3 and Induction of Chemotaxis to CC Chemokines by IFN-γin Human Neutrophils.The Journal of Immunology,1999,162:474-479.
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