谈HPLC法测定接骨定痛丸中士地宁的含量.doc

谈HPLC法测定接骨定痛丸中士地宁的含量.doc 谈HPLC法测定接骨定痛丸中士地宁的含量 士地宁是马钱子中的一种生物碱，马钱子始载于《本草纲目》，系《中国药典》收载品种。士地宁是一种剧毒成分，也是具有生理活性的成分。用于偏瘫、瘫痪及因注射链霉素引起的骨骼肌松弛、弱视症等。试用于白细胞减少症和再生不良性贫血，有一定的疗效。近年研究发现士地宁对脊髓、延髓、大脑皮质等神经系统及消化系统有一定的药理作用。过量可使中枢兴奋作用增强，导致全身骨骼肌挛缩，以至发生强直性惊厥。本文采用HPLC法测定接骨定痛丸中士地宁的含量，是控制其质量的重要环节。 1 仪器与试药 HPLC1100(安捷伦):二元泵，紫外检测器，自动进样器;士地宁对照品(中国药品生物制品检定所 批号:110705~200306，纯度为97%);样品由吉林省德惠市万宝镇骨伤医院 提供批号:070901，070902，070903 (规格每丸9 g);乙腈为色谱醇，庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾为分析纯;实验用水为超纯水。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液及样品溶液的制备 2.1.1 士地宁对照品溶液:精密称取士的宁对照品10 mg，置25 mL量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含士的宁0.048 mg)。 2.1.2 样品溶液制备:取重量差异项下的本品适量，剪碎，取约11 g，精密称定，加浓氨试液3 mL混匀，放置30 min，精密加入三氯甲烷50 mL，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2 h，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，精密量取续滤液20 mL，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5次，每次15 mL，合并硫酸液，加浓氨液调节pH值至9~10，用三氯甲烷提取5次每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2.1.3 阴性对照样品溶液的制备:按处方制备不含马钱子粉的阴性对照样品，按样品溶液制备方法制成相应的阴性样品溶液，精密量取溶液10 μL，注入液相色谱仪，色谱图无相应的吸收峰。 2.1.4 溶剂空白试验:取含量测定项下所用的溶剂甲醇，按正 文色谱条件测定。测定结果，在与士的宁相应的保留时间附近无干扰峰检出。 2.2 色谱条件与系统适用性试验。色谱柱:Aglilent SB C18柱;流动相:A:0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH值2.8)，B:乙腈，A?B(21?79)为流动相;检测波长为260 nm;柱温为30 ?;流速为1.0 mL/min;进样量10 μL。理论板数按士的宁峰计算应不低于3000。士的宁与相邻杂质峰分离度>1.5。在此条件下，溶剂空白、阴性对照、对照品和样品色。 2.3 线性关系考察:精密称取士的宁对照品10 mg，25 mL量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照品溶液(每1 mL中含士的宁0.048 mg)。精密吸取2.0、5.0、7.0、10、15、20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，测得回归方程为Y=3549.6X+10.362，相关系数r =1.000(n=6)。结果表明，士的宁进样量在196.8~426.4 ng范围内，具有良好的线性关系。 2.4 精密度试验:精密量取系统适用性试验项下供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续测定6次，RSD为1.1%，重复性试验 结果结果表明，本法精密度良好。 2.5 最低检测限测定:按信噪比等于3(S/N=3)，作为最低检测限，测得接骨定痛丸中士地宁的检测限为48 ng/mL。 2.6 重现性试验:取同一批号的样品，精密称定6份，分别依法提取制成供试液。按正文方法测定其含量。RSD为0.7%，重复性试验结果结果表明，本法精密度良好。 2.7 稳定性试验:照系统适用性试验项下制备供试品溶液，每隔2 h进样测定一次，共测定12 h，计算含量，RSD为1.4%，稳定性试验结果，供试品溶液在12 h内基本稳定。2 . 8 供试品回收率试验: 精密称取批号为0 7 0 9 0 1 ( 已知含量0.11291 mg/g)的样品6份，每份约10 g，分别精密加入对照品贮备液(0.3735 mg/mL)3.0 mL按正文方法制备及测定，计算加样回收率，测得6次平均回收率为98.6%，RSD为1.8%，试验结果表明:供试品回收率较高，RSD在规定范围内。 2.9 样品的士地宁测定:取样品10批，按正文方法进行测定，记录色谱图至柱峰保留时间的2倍，计算十批含量，RSD为1.2%。 3 讨 论 马钱子有较明显的疗效，但因马钱子治疗剂量与中毒剂量较接近，不良反应较多，限制马钱子的广泛应用，目前对马钱子及提取物中主要成分的测定进行了广泛的研究，同时对复方药中马钱子也进行了研究，研究证明用试剂三氯甲烷，采用加热回流法提取完全。 本文采用，加热回流法提取，应用HPLC进行测定接骨定痛丸中士地宁的含量，实验表明色谱条件和系统适应性实验均符合，本方法灵敏度高，方便可行，可作为接骨定痛丸中马钱子的士地宁的含量测定方法，即控制其毒性和保证疗效。