干粉染色法计数网织红细胞的研究

干粉染色法计数网织红细胞的研究 现代检验医学杂志2004年1月第19卷第1期 JModLabMed,January2004,Vo1.19,No.135 干粉染色法计数网织红细胞的研究 李红军,袁运菊,陈建娜,邬爱玲,李园,陈家芬,汪华.,汪亚洲. (1.湖北宜昌市第一医院;2.宜昌市中心医院; 3.葛洲坝中心医院,湖北宜昌443000) 中图分类号:R446.113文献标识码:A文章编号:1671—7414(2004)01—035—01 网织红细胞计数在血液病的诊断与疗效观察中有着十 分重要的意义,但由于传统的计数方法有着一些小的缺陷, 所以结果常常有着较大的误差.笔者在玻片法的基础上将 建立一种简便,快速,稳定的干粉 染色液烘干形成干粉状, 染色法,我科自1999年以来一直采用此法,较大地提高了 网织红细胞计数检测的准确性,收效甚好. 1材料与方法 1.1材料?10g/L煌焦油蓝洒精溶液;?10g/L煌焦 油蓝生理盐水溶液;?普通光学显微镜;?一次性带盖塑料 离心管;?日本希森美康株式会社提供XE一2100全自动血 细胞仪;?日本希森美康株式会社提供网织红细胞专用试 剂和质控品;?EDTA—K抗凝剂. 煌焦油蓝酒精溶液约0.1ml 1.2方法取试剂10g/L 于一次性带盖离心管内,置37?烘干后将盖盖紧即为工作 管,备用.采静脉或指血约0.1ml于工作管内,迅速混匀约 15次,加盖后静置15,20min,轻轻混匀后即可推片,待 干,显微镜下计数1000个红细胞内的网织红细胞,以百分 率计算. 2结果 2.1方法学的选择 2.1.1染色液浓度的选择:1O份标本用l1种浓度通过干 粉染色,制片,镜下观察对比,10g/L煌焦油蓝酒精溶液的 染色效果好,容易推片,沉渣少,抗凝效果好,优于其它浓 度. 2.1.2最佳染色时间:采静脉或指血约0.1ml于工作管 内,迅速混匀约15次,加盖后静置15,20min,每半小时观 察一次至6h,染色效果一致,可稳定6h. 2.1.3染色效果:网织红细胞的蓝绿色网状结构着色较 深,清晰,细致,易辨.干粉染色法与生理盐水法,玻片法比 较,光镜下效果优于生理盐水法与玻片法. 2.1.4工作管效期观察:每月与新鲜配制工作管同时做试 验至一年,效果一样. 2.2方法学 2.2.1同时用干粉法(本法)和煌焦油蓝生理盐水法(A ,经t检验,本法与A法 法)及玻片法(B法)计数标本87例 结果无显着性差异(P>0.01),本法与B法结果有显着性 差异(P<O.01),差异大,干粉法计数结果与A法无显着 性差异,但明显高于B法,说明B法可使结果偏低,误差较 大,这与《全国临床检验操作规程》[】]的一致. 2.2.2干粉法与仪器法的相关性试验:两种方法同时检测 标本2O例,两法结果高度相关,回归方程为Y一0.113+ 0.94X,r一0.99,与有关文献报道一致口]. 3讨论 3.1笔者认为:A法因稀释血液,对于严重贫血患者,在制 片计数时,容易造成网织红细胞分布不均,产生较大的人为 误差.且此染液保质期较短,如染液放置时间过长,网织红 细胞的网状结构不如新鲜配制时细致清晰,计数时易与红 细胞上的染料沉渣相混淆而产生误差.采用本方法可以避 免这些缺陷,本方法的工作管可在室温环境中干燥保存一 年,染色液可以存放二年左右,染色效果依然细致清晰,恒 定,抗凝效果好. 3.2笔者以为:B法因要等酒精完全挥发后才能使用,染 色时间要充足.如染色不充分,造成结果下降,染色时间稍 长,水分容易挥发,不易制片,且易产生沉渣,不易辨认,导 致结果产生误差.这些因素都不易掌握.而本法工作管带 盖,可充分混匀样本,且能防止水分挥发,染色15min6h 内制片,效果依然良好. 3.3本法集中了A,B两法的优点,且弥补了A,B两法的 不足之处,使网织红细胞染色充分,着色清晰,制片流畅,操 作简便. 3.4大型医院对网织红细胞计数采用的是目前国际上最 先进的仪器一流式细胞仪,但价格昂贵,与之配套的试剂全 部依赖进I=I.大多数医院在无细胞仪的情况下,网织红细胞 干粉染色法计数网织红细胞,操 计数沿用的是A,B两法. 作简单,染色效果清晰细致,结果准确,价格低廉,此法工作 管每人份独立包装,可批量配制,保质期长,适用于基层医 院. 参考文献: Ell叶应妩,王毓三,等.全国临床检验操作规程[M].第2版. 南京:东南大学出版社,1997:15. [21李永红,郭希超,钟步云.激光散射法测定网织红细胞的临 床应用[J].中华检验医学杂志,2000;23:296. 收稿日期:2003—07—17 +基金项目:本课题获湖北省宜昌市科学技术成果奖(登记号:YK03028) 作者简介:李红军(1953一),女,中专,主管检验师.