[doc] 兔肌肉种植VX2瘤前后及发生转移后TNF、IGF、CA-50的变化

[doc] 兔肌肉种植VX2瘤前后及发生转移后TNF、IGF、CA-50的变化 兔肌肉种植VX2瘤前后及发生转移后 TNF、IGF、CA-50的变化 蝇眯2006年11,j笫26卷笫11期ClinicalMedicine,Nov.2006.Vo1.26.No.11 程巾也大多伴有CAM或配基的变化,其中包括选择素及其所 识别的配基.细胞粘附分子CDI5是选择素所识别的比较确定 的一个配基.研究证实,CD15的表达与许多肿瘤的侵袭,转移 及预后密切相父,被视为一些肿瘤预后不良的物.Togaya. chi等…研究认为CDI5的表达肺癌的发展,转移及预后有密 切关系.Ohyama等对小鼠进行肺痛细胞转染试验及CDI5 测定,研究证实CD15与肺癌的转移密切相关.Nakagoe等 的研究发现CD15的表达与结直肠癌患者的生存期相关,可作 为判断患者预后的有用指标.本组研究表明CD15与淋巴结是 -否转移有关,而与肿瘤的大小,类型,细胞分化程度等均无关. 当细胞的基因构成和表达发生异常改变时,肿瘤细胞结构糖复 .合物组成及配比会发生各种变异,表现为某些糖基成分的显露 或消失,或原有糖基成分数量与分布状态发生改变.肿瘤的转 移是一个复杂的多环节过程,肿瘤细胞在原发灶恶性生长并脱 离,是肿瘤转移的关键条件,『『l=f肿瘤细胞与内皮细胞,细胞外基 质粘附,又是癌m行转移不可缺少的环节.很可能CD15是通 过与其受体的相互识别促使肿瘤细胞易__f进入血管腔,导致转 移发生而CD15与MMPs之间的关系以前未见报道,本组研 究显永MMP一2,MMP,9与CD15的表达有关,推测是否与肿 瘤细胞与基质的粘附有关,还需要更深入的研究. MMPs/TIMPs,CD15在肺癌侵袭转移中的重要作用已被众 多研究证实,对它们的深入研究及进一步探讨不仅有助于加深 对肿瘤侵袭转移的认识,同时也为肿瘤治疗提f{}了一个极有希 埋的发展方向.谢建武等”用反义cDNA基因转染人肺巨细 胞癌细胞系BE1后发现MMP一9表达受到抑制,癌细胞的浸润 和转移能力大大下降.牛桂莲等构建r全长TIMP一3eDNA 的真核表达载体转入肺巨细胞癌细胞系BE1后发现转染后的 细胞侵袭和转移能力显着降低.目前,第?二代MMPs抑制剂 Marimastat已在美国,欧洲,加拿大等地用于肺癌的治疗,它和 其他人工合成的TIMPs制剂如Batimastat,BAYI2—9566, AG3340等有望成为手术,放疗,化疗等传统治疗措施的理想补 充.希望随着分子生物学的进展,人类对肿瘤侵袭转移将 有确切的认识,为开发防止肺癌转移和复发的新药提供新的思 路. - 79? 参考文献 lNomuraH,FujimotoN,SeikiM,eta1.Enhancedproductionofmatrixmet— ailoproteinasesandactivationofmatrixmetalloproteinase一2(gelatinase A)inhumangastriccarcinomas.IntJCancer,1996,69(1):9—16. 2JonbsJL,WalkerRA.Controlofmat!ixmetalloproteinaseactivityincane— er.JPathol,1997,l83:377. 3Gonz~ez—AvilaG,hurriaC,VadilloF,eta1.72一KD(MMP一2)and 92一KD(MMP-9)typeIVcollagenaseproductionandactivityindiffer- enthistologictypesoflungcancercells.JPathobiology,1998,66:5一l6. 4杨火运,丁翠敏,孙志学,等.革质金属蛋白酶一2及其抑制剂在肺癌 侵袭转移中作用的研究.围外学呼吸系统分册,2005,25:407—9. 5YlisimioS,HoyhtyaM,TurpeenniemiHT,eta1.SerumMMP一2,9and 2inlungcancer—TIMP,1asaprognosticmarker.AnticancerRes. 2000(2):1311—1316, 6ThomasP,KhokhaR,ShepherdFA,etal,1)ifferentialexpressionofma- trixmetallopmteinasesandtheirinhibitorsinnon——smMlcelllungcane. er.JPathol,2000,190(2):150—156. 7TogayachiA,KutoT,IkeharaM,eta1.Up—regulationofLewisenzyme (Fuc—T?)andplasma—typealpha,3fucosyhransferase(Fuc—TVI) expressiondeterminestheaugntentedexpressionofsialylLewisXantigen innon—smallcelllungClJYlccr.IntJCancer,1999,83(1):7O一79. 8OhyamaC,TsuboiS,FukadaM.DualrolesofsialylLewisXoligosaccha- tidesmetastasisand州ectionbynaturalkillercellsEMBOJ,1999,l8 (6):l5l6一l525. 9NakagoeT,FukushimaK,NanashlmaA,eta1.ExpressionofLewisa,sia— lylLewisa,LewisX,andsiMylLewisXantigensaspmgnosticfactorsin 760. patientswithcolorectalcancer.CanJGastr~nteml,2000,14:753— t0谢建武,方伟岗,李红梅,等.金属蛋门酶MMP,9反义蛙冈对转 移性肺细胞癌系的转染效应.【I1牛病理学杂志,1999,28(4): 2lO一2I1. 11牛桂莲,方伟岗,郑杰,等.TIMP一3基因转染抑制人肺煽细胞系侵 袭与转移的研究.叶1华病理学杂志,1998,27(6):421—424. 12WojtowiczPragaS,Clinicalpotentialofmatrixmetallopmteaseinhibi- tots.DmgsRD,1999,l(2):117—129. (收稿n期:2006,04—11) (本文编辑:靳云凤) ? ‘ 兔肌肉种植VX2瘤前后及发生转移后TNF,IGF,CA一5O的变化 高庆合刘建国袁来顺粱国琴 (山西省大同市第七人民医院普外科,大同037005) 【摘要】目的观察兔肌肉种植VX瘤前后及在肝,肺发生转移后肿瘤坏死因子(TNF),胰岛素生长因子(IGF), CA一50的改变情况.将健康雄性3年的新西兰大白兔8O只,分成两组,外照射,体外高频热疗组(治疗组),对照 组各40只.观察肿瘤直径,生存期,同时检测TNF,IGF,CA一50.在 VX2瘤种植前后和发生转移后的变化情况.结 果治疗组肿瘤直径小于对照组(P<0.01);治疗组兔生存期长千对照组(P<0.01);VX瘤移植成功后细胞因子的 变化为TNF,IGF,CA一50增高(P<0.01);肺,肝转移在治疗组中明显少于对照组(P<0.01);在发生肺,肝转移兔中 相比IGF,CA一50增高,TNF降低,与未发生肺,肝转移的兔相比,差异有统计学意义(P<0.O1).结论VX种植成功 后埘实验兔的TNF,IGF,CA一50产生影响,发生肺,肝转移后IGF,CA一50增高,TNF降低. 【关键词】VX瘤;种植;转移;细胞阗子 - 80-临床医学20o6年l】月第26卷第11期Clinica1Medicine.Nov.2006.Vo1.26,No.11 ChangesofTNF,IGFandCA-50infore—andaftVX2carcinomareplantedin rabbitsmuscleandafterhadbeenme- tastasizedGAOQ, 咖,HUJianguo,YUANLaishun,LIANGGuoqin.DepartmentofGeneralSttrg ery,theSeventhPeople~Hos- pitafofDatong,Datong037005,Shanxi 【Abstract】ObjectiveToobservethechangesofTNF,IGFandCA一50infore—and—aftVXcarcinomareplantedinrab- bitsmuscleandafterVX2carcinomahadbeenmetastasizedinliverorlung.MethodsEightymalewhitehealthyrabbitswerese- lected,anddividedthemintotwogroups.Therewere40rabbitsintreatmentgroup,treatedwithteletherapyandlocalhyperther- mia.Sowerethecontrolgroup.Tumorsdiameter,timeofsurvivalwereobservedand,changesofTNF,IGFandCA一50infore— and—aftVX2carcinomareplantedandafterVX2carcinomahadbeenmetastasizedinfiverorlungwereexamined.ResultsIn thediametersoftumorsortheirtimeofsurvivalintreatmentgroupwassmallerorlongerthancontrolgroup(P<0.O1);Therate ofliverorlungmetastasisintreatmentgroupwaslowerthancontrolgroup(P<0.O1);TNF,IGFandCA一50werehigherin. fore—and—aftVX2carcinomareplanted(P<O.O1);IGFandCA一 50weregottenhigher,TNFwasgottenlower(P<O.O1), andtherewasstatisticallysignificantdifferencebetweenthedivertedrabb:itsandotherrabbits+ConclusionVX2carcinomare- plantedobviouslyinterferedtheirchangesofTNF,IGFandCA一 50;AfterVX2carcinomahadbeendivertedinliverorlung,IGF andCA一50weregottenhigher,butTNFwasgottenlower. 【Keywords]VX2carcinoma;Planting;Diversion;Cytokine VX:瘤是Shope病毒诱发的乳头状瘤恶变后经兔传代而 取得的实验性肿瘤,近似于人的实质器官原发恶性肿瘤,将其 接种于兔的肝脏进行动物实验研究模型的制作,迄今有报 道.但将其种植于肌肉以及肺,肝的转移情况在国内尚少 见报道.现将我们的实验情况报道如下. 】与方法 1.1一般资料:动物模型制作:选用动物为健康,雄性,3年的 新西兰大白兔8O只,实验动物由山西医科大学大同医学院动 物饲养中心提供,体重5kg[(5?0.35)kg],随机分为外照射, 热疔组(治疗组),对照组各40只.中国医学科学院细胞中心 提供VX瘤大白兔,断颈处死带瘤兔,在无菌条件F取出肿瘤, 机械匀浆制备成单细胞悬液(每毫升含1O个细胞),选择大白 兔的右后肢肌肉内注射已制备好的单细胞液lml.接种后1O一 12d,实验动物均可触及2.5—3cm的肿瘤为种植成功. 1.2方法: 1.2.1外照射采用SIEMENSPR1MUS—M直线加速器产生的 6MV—X射线,将野中心对准兔右腿处肿瘤采用SSD照射, 野边界在肿瘤边缘外方3,5cm,照射剂量200cGy/f, DT2000cGy/10f/20d.常规分割治疗,将动物固定于木板之上. 1.2.2热疗采用珠海产的HG一2000型体外高频热疗机,输入 电压220V,温度控制在42.5—43.0?,机控输入功率在90%一 95%,}f算机控制与其温度相关,大于此值温度达45?,小于此 值温度低于42?.每次热疗lOmin,1次/d,共15d. 1.2.3放射免疫监测:分别于移植前24h,种植成功后(移植 后),治疗后第4周空腹状态_F抽耳缘静脉血分离血清,检测项 目为:TNF,IGF,CA一50. 1.2.4放射免疫测定药盒及设备:细胞因子放免测定试剂由 九鼎医学生物有限公司提供;使用上海原子能研究所日环仪器 ‘ 厂SN~695B型智能放免一测量仪,测定均严格按照试剂 说明书进行操作. 1.2.5对照组未行任何治疗. 1.3统计学处理:计箭资料以均数-1-差(?s)表示,结 果采用t检验,计数资料采用卡方检验. 2结果 2.1肿瘤大小及转移,死亡情况: 2.1.1肿瘤大小:治疗前各组肿瘤直径大小比较差异无统计 学意义(P>0.05),有可比性.治疗结束后比较各组肿瘤直 径,治疗组肿瘤直径为(4.94?1.67)em,对照组肿瘤直径为 (11.23.4-2.79)cm,肿瘤张比较高.有的已破溃(两组肿瘤直 径比较.t=4.98.P<0.O1,差异有统计学意义). 2.1.2生存及转移情况:治疗组生存天数为(63.55?5.35)d; 对照组生存天数为(41.76.4-3.43)d.两组生存天数比较差异 有统计学息义(t=8.92,P<0.01).肺,肝转移情况:治疗组 肺,肝转移比例为6/40;对照组肺,肝转移比例为32/40.两组 肺,肝转移比较差异有统计学意义(×=33.88,P<0.O1).发 生转移者和未发生转移者TNF,IGF,CA一50的变化情况见表1. 表1发生肺,肝转移和未发生转移者TNF,IGF, CA一50的变化比较(?) 2.1.3肌肉移植前后TNF,1GF,CA一50的变化情况,见表2. 表2移植前后TNF,IGF,CA一50的变化情况(4-s) 3讨论 兔VX瘤模型足一个成熟,稳定且应用广泛的肿瘤实验模 型,种在兔大腿f的VX瘤,一般用作传种之瘤株,兔大腿肌肉 血运丰富,VX瘤易于成活和观察,因此选择在兔大腿处接种. 在移植前和种植成功后,所观察的细胞因子(CK)变化表现在 TNF,IGF,CA一50均增高.TNF是迄今发现的抗肿瘤活性最强 的细胞因子,可以引起肿瘤组织出血坏死,TNF的抗肿瘤作用 已在动物转移瘤和人体肿瘤得到证实.恶性肿瘤病人PBMC产 生_rNI能力增强,血浆TNF水平升高,与本实验结果一致. 本次实验还观察到发生肺,肝转移的TNF明显低于未发生肺,肝 转移者,这也可能与TNF的抗肿瘤作用有关. IGF及其受体(IGF一1R)与肿瘤的关系是近年研究的热点, 研究表明,IGF是促肿瘤生长因子,而IGF的活性主要是通过 IGF一?R介导的,且IGF—lR在许多恶性肿瘤中表达上调. 术,:2006q-:11JJ第26卷第l1崩CIiniealMedicine,Nov.2006.Vo1.26,No.11 IGF一1R通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡与其他牛长因子如 VEGF—C的信号传通路相瓦作用实现促瘤作用,与诱导和保 持肿瘤细胞的表型及浸润,转移密切相关J.这也可能与发生 肺,肝转移兔IGF明显增高有关. CA一50是以唾液酸脂和唾液糖蛋白为主体成分的糖类抗 原,是一种普遍存在的肿瘤标志相火抗原,而不足特指某个器官 的肿瘤标志物.所以住兔移植成功后CA一50明显升高,发生 肺,肝转移者的CA一50也明显高F未发,I肺,肝转移者 参考文献 1柳峨,乍欣,赵俊功,掌,免VX肝癌模制n及综l八膨像评价,实川 - 8l? 放射学杂志,2002,馆:132—134. 2邵罔良,周康荣,F缱华,等.介入治疗研究【fJ免VX卅q带模刑制作的 改进和cT评价.临床放射学杂志,2002,19:653—654. 3陆琰档,曹纬,喻德洪.肿州坏死fq了在肿瘤研究和治疗领域中的新进 展.1lI肿瘸生物治疗杂忠,2002,9(4):297—299. 4陈琳,张绍仪,贤战生,等.帅瘾患辑mslL,一2R和TNF—oL的检测 及LL,{OiJ术意义.实川刖熘杂志,1995,1o(4):207—209. 5肖君,孙维佳.IGF一1RJN’N父系的研究进腱.通外科杂志, 2004,13(3):220—223.(收稿I}IJ:2006—03—30) (本文编辑:朱耐婷) t’53和P63在胰腺肿瘤中的表达及其意义 钱海龙贺夫林 (浙江省宁波市解放军一一三医院普外科,宁波315040) 【摘要】目的研究P53,P63基因在胰腺肿瘤巾的表达及其意义;P63基因表达与P53,增殖细胞核抗原(PCNA),PI6表 达的关系及意义.方法通过免疫组化方法对63例胰腺肿瘤和6例慢性胰腺炎手术标本进行了P53,P63,PCNA,PI6蛋 白的表达研究,探讨它们之『H】的联系和它们与胰腺癌临床分期,病理分型,预后及转移等生物学特性的关系.结果P63在 胰腺导管腺痛巾表达,在腺鳞痛中高表达,6例腺鳞癌有5例P63染色阳性,阳性率为83.3%.P63在腺鳞癌中的高表达 伴有胰腺抑癌垡凼P16的缺失,同时伴有PCNA的高表达,即伴有细胞增殖度的升高,但P63在腺鳞癌中的高表达与P53基 因突变_兀显着相炎性.住胰腺组织巾叮见r泛的胰岛细胞P63染色阳性,染色部化主要位于细胞胞浆.突变型P53蛋白 在胰腺痛中的表达-j胰腺痛病理分型,临床分期,转移及坝后无明相关性.结论P63基表达是胰腺腺鳞癌的重要组 织:特征,P63的表达在腺鳞癌发病过程巾起了罩要的作用.P53基凶突变是胰腺癌发生发展巾的一个晕要事件. 【关键词】P53;P63;增殖细胞核抗原;P16;基因突变;免疫组化 ExpressionofP63andP53inpancreaticneoplasmsQIANHailong,HEF~lin.DepartmentofGeneralSurgery.thePIl3 Hospital,Ningbo315040,Zhejiang 【Abstract】 ObjectiveTostudytheexpressionof1~63andP53,therelationbetweentheexpressionofP63,1953andPCNA,P16 inpancreaticneoplasms.MethodsTheexpressionofP63,P53,PCNAandP16aredetectedbyimmunohistochemistryin63pa— tientswithpancreaticneoplasm,including42casesofductaladenoeareinoma,6casesofadenosquamouscarcinoma,8casesofmalig— nantchangesincystadenomaand7casesofcystademoma,comparedwith6casesofchronicpancreatitis.ResultsI)63gene(1idnot expressinthepancreaticductadenocarcinoma,butexpressedhighlyintheadenosquamouscarcinolna.TheexpressionofP63genein theadenosquamouseareinomaaccompaniedwiththedepletionofP16geneandthehighexpressionofPCNAwhichmeanedthestep — upofcellproliferation.Buttheexpressionof1)63hadnorelationwithP53P63expressedintheisletsofpancreas.Themutant 1”53hadnocorrelationwiththepathologytype,clinicalstage,metastasisandprognosisofpancreaticneoplasm.CondusionItis showedthattimexpressionofP63geneistheimportanthistologicalcharacter ofpancreaticadenosquamouscarcinoma.Theexpres— sionofP63maybeplayanimportantroleintheoccurrenceofpancreaticadeno squamouscarcinoma.Buttheexpressionof1)63has norelationwithP53.Thenmtationofp53genefacilitatetheproliferationofpa ncreaticneoplasm. 【Keywords】P53;P63;PCNA;P16;Genemutation;lmmunohlstochemistry ?P53作为一种人类肿瘤中广泛发生突变的抑癌基,一直是 肿瘤研究领域的热点.1998年,Osda等发现J,P53家族一成 ?员P63,P53,P63,P73共同组成J,P53家族.研究发现,P53家族 成员都能激活P53卡H关靶基【大1,引起细胞周期停滞及细胞凋 亡,fllI进一步研究发现,它们的结构和功能并不完全相同,P63 及P73fJl起细胞凋r的途径也不完仝i-jt-’53相,P63不象 1-’53那样是一个标准的抑痛基因.研究表明,P63与上皮源性肿 瘤的发生发展关系较为密切.因此,本文采用免疫组化S—P法 和Envision法测定J,P53,P63,增殖细胞核抗原(PCNA)及P16 在胰腺肿瘤中的表达,并对其与胰腺癌病理学分型,临床分期, 转移及预后等肿瘤牛物学指标问的关系作,,以进一步探 讨P53家族在胰腺肿瘤发病机制中的意义及其临床价值. I材料与方法 I.I标本:69例胰腺标奉均取自第?军医大学长海医院1996一一 2001年手术切除后标本,Itt废院病理科取材,固定,石蜡包埋. 1.2临床资料:1996,2001年间长海院胰腺肿瘤患者63例, 其中男性43例,女性20例,年龄3l,86岁,,均67岁,【fJ位值 为64岁.另外,我们采用同期手术的6例慢性胰腺炎标本作对 照.其中男性4例,女性2例,年龄41—52岁平均46岁.63例 胰腺肿瘤中包括了42例胰腺导管腺癌(5例胰腺粘液腺癌,l3 例高分化胰腺腺癌,13例中分化胰腺腺癌,11例低分化腺癌),7 例胰腺囊腺瘤,8例囊腺瘤癌变,6例腺鳞癌(包括1例胰头导管