这个是急性单核白血病细胞,悬浮的(如果养的时间很长了有的会贴壁),培养基用普通的1640就可以了,这里是这个细胞株的详细资料供参考。
THP-1: human acute monocytic leukemia
Origin: established from the peripheral blood of a 1-year-old boy with acute monocytic leukemia (AML) at relapse in 1978; the cells can be used for induction of differentiation studies; the cells were described to produce lysozyme and to be phagocytic; carries t(9;11)(p21;q23) leading to MLL-AF9 fusion gene
Morphology: round, single cells in suspension, partly in clusters
Medium: 90% RPMI 1640 + 10% FBS
Subculture: maintain at 0.1-1.0 x 106 cells/ml; split 1:2 to 1:3 every 3-4 days; seed out at ca. 0.5 x 106 cells/ml
Incubation: at 37 °C with 5% CO2
Doubling time: ca. 35-50 hours
Harvest: saturation density at about 1.0 x 106 cells/ml
Storage: frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 5 x 106 cells/ml
Mycoplasma: contamination was eliminated with Ciprobay (ciprofloxacin), then negative in DAPI, microbiological culture, PCR assays
Immunology: CD3 -, CD4 +, CD13 +, CD14 (+), CD15 +, CD19 -, CD33 (+), CD34 -, CD68 +, HLA-DR +
Fingerprint: multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile
Species: confirmed as human with IEF of AST, MDH, NP
Cytogenetics: human near-tetraploid karyotype - 94(88-96)<4n>XY/XXY, -Y, +1, +3, +6, +6, -8, -13, -19, -22, -22, +2mar, add(1)(p11), del(1)(q42.2), i(2q), del(p21)x2-4, i(7p), der(9)t(9;11)(p22;q23)i(9)(p10)x2, der(11)t(9;11)(p22;q23)x2, add(12)(q24)x1-2, der(13)t(8;13)(p11;p12), add(?18)(q21) - carries t(9;11) associated with AML M5
Viruses: ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -, HIV -, HTLV-I/II -
THP-1单核细胞是悬浮生长的细胞,用1640+10%FBS是很容易养的,但复苏的细胞可适当加量至20%FBS。国产与进口的血清都行。培养用的血清必须用胎牛血清,小牛血清中含有微量的胆红素对THP-1单核细胞影响较大。培养基中最好能够加入足够的L-GLn和丙酮酸,以及非必需氨基酸,特别是前两者对于细胞的状态至关重要。尽量使用一次性培养瓶,如果没有条件,重复使用的培养瓶一定要洗干净,切记,切记,否则THP-1单核细胞吞噬杂质后很容易活化死亡。THP-1单核细胞喜欢酸性环境,记住这一点宁酸勿碱。倍增时间小于24小时。THP-1细胞可以传很多代,因此不要担心细胞活性问题,只要耐心及细心。
我正在培养两种人B淋巴细胞,L721.221, Raji。对细胞状态好坏的鉴别有一点心得,希望和大家讨论。
我们的配方是: (2x1000ml)
RPMI Medium 1640, 10.4g, 2x1袋
L-Glutamine, 2mmol/L, 2x300mg
2-Mercapto-ethanol, 50umol/L, 2x3.9ul
Pyruvic acid, sodium salt, 1mmol/L, 2x110mg
Hepes Free acid, - 2x1.5g
Sodium bicarbonate, - 2x1.5g
Gentamyoin sulfate injection,50 U/ml, 2x50000 U
DDW ==>2x1000ml
pH ==>7.2
立即,0.22um 滤菌==>4度密封保存
用前加10%NBS。
一到两个月,需要往保存的1640中加原量的L-Glutamine(分解了)。
长的好的细胞有下面几点特征:
1. 培养液:澄清,能很快变黄(5%CO2培养箱,12h之内),说明增殖快
2. 低倍镜(10X10): 细胞透亮,“晶晶亮”,大小均一,其中还有个别“超级大个子”,是处于分裂前期的细胞,胞膜完整,不是细胞肿胀。
3. 低倍镜(10X10): 聚集悬浮生长的细胞,通常能看到一簇一簇的细胞群,应该就是一个个“克隆”吧。
4. 低倍镜(10X10): 细胞容易悬浮,容易随培养液“四处飘荡”,即使形成较大的细胞簇,也是“飘飘荡荡”的。
5. 高倍镜(10X40): 大小钧一,形态规则,胞膜完整。
长得不好的细胞正好与前面相反:
1. 培养液: 有浑浊感,不变黄(几天甚至几星期都是红的),细胞根本不在呼吸代谢。
2. 低倍镜(10X10): 细胞黯淡无光,几乎看不到“大个头”的细胞。
3. 低倍镜(10X10): 很少有小簇细胞群,(若是细胞密度过大造成细胞状态不好,只有很大的细胞群,没有新生的细胞“小”克隆)。
4. 低倍镜(10X10): 细胞不容易“飘荡”,似乎很“重”,粘在瓶底,还可以在瓶底看到细胞的残骸(淡淡的细胞样的痕迹)。
5. 高倍镜(10X40): 大大小小,深深浅浅,没有固定的外形,(能看到各种怪样子),是细胞凋亡皱缩,或崩解造成的。