白虎追风胶囊的抗炎作用机理

白虎追风胶囊的抗炎作用机理 白虎追风胶囊的抗炎作用机理 72 r州中医药』=学学撤 J~malof(沁nILnlv~Jlyof.rmChln~eMc 文章编号:1007—3213{20C0)叭一0072—04 1一/0 '白虎追风胶囊的抗炎作用机理 ,… 摘要:为揭示白虎追风胶囊的抗更作用机理.研究了白虎追风胶囊对佐荆性关节炎(AA)大鼠滑膜白细胞 舟素一l(IL—J),肿瘤坏死因子a(哪一a)和前列膝素(PG)的影响,烈厦对AA大鼠血液中氧自 由基和NO的影响=结果显示:白虎追风胶囊能下调AA太鼠滑膜过度分泌的lIJ一1,哪一a和PG;能降 低^A太鼠过高的LPO和NO水平,使过低的SOD和GSH—Px增高.提示白虎追风胶囊的作甩机制可能与其 抑制滑膜分泌细胞因子和更症舟质,以厦抗氧化作用有关.之々磷锄屯毒I善拦 主题词:@白虎追风胶囊/药理学;白虎加桂枝汤/药理学;关节点,佐荆性/中药疗_击; 关节更,娄风湿/中药疗法;滑膜/分船;白细胞介素一1/分析;肿瘤坏死因子/分析 /分析;脂质过氧化作用/药物作用;谷胱甘肽过氧化酶/血液; 前列腺素E类 超氧化物歧化酶/血液;一氧化氪/血液 中圈分类号:R285.5文献标识码:A 白虎追风胶囊是在《金匮要略》白虎加 桂枝汤的基础上加减而成的有效制剂.主要 含有石膏,白芍,细辛,制川乌,桂枝等 药以往研究明该方对类风湿性关节炎 (队)具有较好的抗炎,消肿及镇痛作 用lJ.大鼠佐剂性关节炎(AA)是常见的 RA实验模型之一,常用于RA发病机制的 研究及抗炎药物的筛选J.本文通过观察白 虎追风胶囊对AA大鼠关节形态学,病理结 构,滑膜细胞功能和血液中氧自由基等的变 ,以求揭示其抗风湿的药理基础和作用机 化 制 l材料与方法 1.1材料 11.1实验动物Wistar大白鼠5O只,雌 雄符半,2—3月龄,体重180—220g,由广 州巾医药大学实验动物中心提供. 1.1.2实验药品及主要试剂?白虎追风 胶囊:由广州中医药大学药剂教研室提供, 每粒药粉(5/30mg)相当于5z生药的提取 量(包括挥发油和浸膏),实验时以蒸馏水 配成舯L溶液(低剂量)和160g/L溶液 (高剂量);?雷公藤多甙片:上海医科大学 红旗制药厂生产,批号9711201;?弗氏完全 佐剂(FCA),脂多糖(LPs),?型胶原酶 均为美国Sig~na公司产品;?胰蛋白酶(1: 250),Difco产品进口分装;?DMEM培养 粉,Gibco公司产品;?白细胞介素一l(IlJ — 1)B试剂盒,深圳晶美生物工程有限公 司提供,批号980717;?肿瘤坏死因子一a (TNF—)试剂盒,北京东亚免疫技术研究 所生产,批号980701;?前列腺素E, (Pc)试剂盒,苏州医学院提供,批号 9707i9;?一氧化氮(NO)测试盒,军事医 学科学院研究所提供,批号97i029. 收稿日期:1999—03—01: 作者简介:第一作者,男.1965午出生,副教授,医学硕士; 基金项目r采省中医药竹局资助曝题("4o964);广州中医药太学科研摹金资助课题 (o.97O34) ? 期, 第砌 年 第f期施拙进.等.自虎追风腔囊的抗蹙作用机73 12方法 1.2.1大鼠佐剂性关节炎(AA)模型制备 按照文献方法【J用弗氏完全佐剂于每只 太鼠右后足跖皮下注射0.In【j赛炎 1.2.2分组及给药方法将大鼠分为5组: 正常组,AA组,白虎追风胶囊高剂量组 (药高组),白虎追风胶囊低剂量组(药低 组),雷公藤多甙对照组,每组10只,雌雄 各半.造模后2d即开始灌胃,连续28d, 灌胃量为10mL/kg.正常组灌服生理盐水; 药高,药低组分别灌服白虎追风胶囊高,低 剂量溶液;对照组灌服雷公藤多甙混悬液. 1.2.3躁关节病理切片观察于致炎后3O d将大鼠处死,取大鼠右踝关节周围之软组 织及关节滑膜,置10%福尔马林中固定, 作常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜下观 察. 1.2.4大鼠滑膜细胞培养上清液的制备【J 于致炎后3od无菌取出大鼠双侧醵关节 滑膜组织,经?型胶原酶及胰蛋白酶消化 后,分离成单个滑膜细胞,用含有5—1L LPS的DMEM培养液配制滑膜细胞悬液(5 ×lo5/L),加入24孔培养板内,每孔1mI, 于37?,5qoCO2培养箱培养48h,收集上清 液,一柏?保存待测IL—l,TNF—q和 PGB等活性. I.2.5滑膜细胞培养上清液【l_一I,F—q, PGE'活性的检测IL一1活性采用ELISA法 检测,TNF—a,PGFa活性采用放射免疫法 检测,均按试剂盒说明操作. 1.2.6红细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性测定采用邻苯三酚自 氧化法J. 1.2.7全血谷胱甘肽过氧化物酶(glutathlone peroxldase,GSH—Px)活性洲定采用IYFNB 直接法l测定 1.2.8血浆丙二醛(malondialdehyde,MDA) 含量测定采用硫代巴比妥酸比色法【8l测 正. 1.2.9 书进行操作. 2结果 2.1对大鼠关节形态学和病理结构的影响 表l结果显示,给药后7,14,21,28 d白虎追风胶囊组大鼠右足肿胀率明显小于 AA组,差别有显着性(P<0.05或P<0.01 ).表明白虎追风胶囊对AA大鼠原发性病 变有较好的治疗作用. 病理切片结果显示,AA造模组大鼠踝关 节周围软组织内见大量淋巴细胞,单核细胞 浸润,并可见大量类上皮细胞反应,部分区 域类上皮细胞聚集成团,形态颇似结核结节, 类上皮细胞团周围有大量淋巴细胞,单核细 胞聚集.滑膜巴皮细胞增生,肿胀肿胀之 滑膜上皮细胞呈立方形,低柱状甚至成复层, 上皮下见少量淋巴细胞及单核细胞浸润.白 虎追风胶囊组滑膜上皮增生程度较轻,上皮 及周围软组织内浸润之炎症细胞亦较造模组 少,说明白虎追风胶囊对AA大鼠病变关节 的病理组织结构有一定的改善作用. 2.2对AA大鼠滑膜细胞分泌IL一1,TNF— n和r'GF~的影响 表l白虎追风胶囊对AA大鼠足跖 肿胀的影响(?J AA组1064l?275 药低组10柏.1?1I3' 药高组1040.0?1I2' 雷公藤组42.8?【53' 6l5?笠.B647?2BI425?153 ?.7?21)64D6?l8.0248?l6.B' 34.B?【2336?119''236?125 41I?171'艚9:t-1t4213?125 *与AA组比较P<O舾.**P<O01 表2白虎追风胶囊对AA大最滑膜, PF一.和P的影响(雾? 血清NO含量测定按测试盒说明P0?,??Pc0010001*与正常组比较:p<..tP<; ?与M蛆比较 74广州中医药大学2000年第】7卷 表2结果表明,AA大鼠滑膜细胞分泌 lL—l,TNF—n和PGE2的含量较正常组大鼠 明显增高(P<0.01),白虎追风胶囊高, 低剂量均可降低AA大鼠异常增高的IL一1, TN}l_a活性和PGE2含量,使其接近或恢复 正常水平 2.3白虎追风胶囊对AA大鼠血液中LPO, SO1),GSH—Px和NO的影响 各组动物于造模后30d眼球取血,分别 检测红细胞SOD活性,全血GsH.P)【活性, 血浆MDA含量和血清NO含量.结果证明白 虎追风胶囊组可以降低从大鼠过高的LPO, NO水平,同时还使其过低的SOD和GSH— Px活性增高或恢复正常(见表3). 3讨论 白虎追风胶囊是由桂枝,白芍,知母, 石膏,白芷,薏苡仁,制川乌,细辛,黑老 虎等药组成,具有清热祛湿,驱风通络止痛 的作用.实验结果表明白虎追风胶囊对大鼠 AA有良好的治疗作用,对AA大鼠病变关 节的病理组织结构有一定的改善作用. 细胞因子在RA的发病过程中起重要作 用,其中以IL一1和F的作用较为突出. 细胞因子刺激滑膜成纤维细胞,毛细血管内 皮细胞高度增殖,构成RA特征性血管翳; 刺激软骨细胞,破骨细胞产生前列腺素E, (pGE2)以及胶原酶等多种蛋白水解酶;激 活中性粒细胞释放溶酶体酶,自由基等炎症 介质,成为引起关节软骨,骨质等组织破 坏,导致关节内粘连以及后期关节畸形的关 .实验结果表明,键因素_9J白虎追风胶囊 可降低AA大鼠异常增高的IL一1,F—a 活性和PcE2含量,提示其对AA大鼠的治疗 作用可能与其抑制滑膜分泌的细胞园子及炎 症介质有关 文献报道?,氧自由基(OFR)和一 氧化氧(NO)参与类风湿性关节炎和佐剂 性关节炎的病理损伤过程.本文检测AA大 鼠脂质过氧化物产物MDA含量可代表LPO 水平,LPO水平不仅反映自由基产生的程 OD清 度,而且还提示对机体损伤的强度.S除,减少H2的生成,是代表机体内抗氧 化能力的重要指标.GSH—P)【清除H'o), 防止H2被进一步氧化为毒性更强的 OH一.研究表明白虎追风胶囊可降低血浆 LPO及血清NO水平,并提高机体内源性的 抗氧化酶SOD,GSH—Px的活性.提示其对 大鼠AA的治疗作用也可能与其提高机体抗 氧化系统能力,清除过多的LPO及NO,减 少自由基对机体的损伤有关. 参考文献: [1:施旭光,高汉彝.何国粱白虎追风丸治疗早期 '摸风关43倒[J]江苏中医,1998,(痛证专 辑):142 [2傅益群,赖无松,高汉森,等.白虎追风丸对痹证 模型的血液流变学及形态学的影响[J].中国中西 医结合风湿病杂志1998,7(3):148 【3JPBr10l蚓蛳N.HepterS,PoberJ,dHlmaamland cellulartmmm'Mogiep日0fuand?u?en arthritisinrat【JJl~laeol,19'86,8:347 [4]撩叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M] 北京:^民卫生出版社,1985723 [5]王斌陈教璩,特叔云天鼠滑膜细胞的分离和培 养[J]中国药理学通报,1994,10(I):73 裹3白虎追风胶囊对从大鼠血液cI,』50D,J母.和cNo的影响(i? 与AA组比较P<005,**P<0OI;?与正常组比较P<005.??P<001 第l期施旭光.等.白虎追风腔囊的抗炎作用机理75 [6 [7 袁勤生.乇志友.翁清清,等邻苯==二酚自氯化法 测定超氧化物歧化酶的话性[J]医药工业,1983 (1):16 夏奕明.朱莲骖血和组织中谷魄甘肤过氧化物酶 恬力的测定方法一町B直接法[J卫生研究, I987.16(4):29 钟福孙,胡文尧,冯驰硫代巴比妥酶比色法测定 血清过氧化脂质[JJ临床榆验杂志,1986,4 (3):129 Cd0M,S—oM.Y~akaH,dalSpont~ [10 [儿 ptoducti~of衄mt~leukm1-likefactorbyd加e1eu瑚一 talds~novialceilsin]ong-t~l【JJ.JCAin[nve~. 1987.舯(3):786 GitierBD.【一SL.Seheet~MEQf札iof h,mlanmlwftbmblz.staclivo口byIL-IandF— [J]lnmmulo~,,1989,66(2):196 O'~anaguiYNitreoxideBrIdsnpemxJderadicalain— volved/nbahinltiafi~anddeve]ccamentofadiuvam ar~tksintat[J]uSe[,1994.54(17o):285 Anti-intlammatoryMechanismofBailIuZhu~fengCapsule SHIXuguang,ZHOU皿.,船‰Z' 'IDol"TradJli~malcMedial~eFormula,GIIa?嘎IUnivemfiyofTCM,0嘎 I510405,China;2GIadua躅of Grade96,6llIUalvem[ty0rM,曲曲510405.Claim) Ahslract:Torevealtheanti—iaflar~m3atorymechanismofl~ihuZhuifengCapsule(BZC), ?1eeffectsof BZConsynovialinterleukin-1(?,1),alpIlatmnornecrosisfactor(F?)andpr,~taglandinE2 (PGE2),andbloodoxygenfreeradicalandniricoxide(NO)inratswithadjuvantarthritis(AA) were observed,TheresultsshowedthatBZCcouldreducethehypersecretionofIL一1,F? andPGE2, decreaseseFulnlipidperoxidesandNOcontentsandincreasesupemxidedismutaseandgluta thionepemx— idaselevels.ItisindicatedthatthemechanismofBZCisprobablyrelatedtotheinhibitionofsy novial cytokinesandinflammatorymedialorandtheantioxidation, Keywords:@BAIHUZHUIFENGCAPSULE/phammcology; ARTHRITIS,M)JUVANT/TCDther.;AR唧rI1s.RHEUm.IDlD厂rcDther,; SYNOVI_AIMEMBRANE/secmt.: TUMORNECROSISrACTOR/~a.; LIPIDPEROXIDATION/drugeft.; SUPEROXIDEDISMUT^SE/bl00d: INTERLEUKIN一1/anal; PROSTAGLANDINSE/ana1.; GIX1TAHIONEPER0XlDASE/blood NrIR?ES/blood 《中国基层医药》2OOO年征订启事 《中国基层医药》杂志是一份集政策法规,卫生管理,学术交流,继续教育于一体的综合性医药卫生学 术刊物(双月刊),国家卫生部主管,为国家级医学科技期刊.刊号;ISSN1008—6706,CN34—1054/R.主 要读者对象是广大城镇,多村,厂矿,部队基层医药卫生工作者;主要栏目有;临床医学,特诊医学,护 理学,传统医药,药物与临床,综述,讲座,医药新进展,基层卫生.妇幼保健,卫生管理等. O3年全新奉献,双月刊,8o页,太16开本,每期订价500元,年价3o?元,为本刊2O 同类刊物最低 定价:本刊在国内外公开发行,邮发代号82—948,可在当地邮局订阅.同时,本刊自办发行,可随时从邮 局汇款至中国基层医药杂志社订阅(不收邮寄费),款到即寄收据并按时发送刊物. 杂志杜地址:安徽省淮南市田家庵区人民南路西40号.邮政编码:232007.联系电话:0554— 2670100.2685449(传真).