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第一次 微生物学实验准备工作及微生物接种技术 细菌革兰氏染色法 第二次 细菌芽孢及荚膜染色观察 第三次 细菌的运动性观察及细菌鞭毛染色法 第四次 常见放线菌及霉菌观察 一、微生物接种技术 一）、实验目的 学习微生物接种工具的使用，掌握无菌操作方法，建立有菌概念。 二）、实验原理 在微生物学实验或科研生产中，要经常地把一定种类的微生物菌种接种或移植到新鲜培养基中。由于我们接种的微生物都是纯种的，所以接种工作都必须在无菌环境下（在无菌室或超净工作台）进行，并严格遵守无菌操作技术。利用接种工具（如接种环、接种铲等）进行菌种的移植。因此无菌操作是接种培养微生物的关键。 三）实验用品 接种环等接种工具、斜面培养基、酒精灯、酒精棉球 四）实验步骤： 1、接种工具的介绍 接种环、接种钩、接种针、接种圈、接种锄、玻璃涂棒、其他接种工具 2、无菌操作要点 1）、要求建立“有菌概念”。 2）、接种时要有一个洁净的环境，整个操作过程必须在火焰旁进行。 3）接种环，棉塞一定要拿在手上，不能随便乱丢。 3、微生物接种技术 1）、斜面接种技术 从斜面菌种将菌移接至另一斜面培养基的方法，叫做斜面接种。 接种方法： A、接种前用酒精棉球擦净桌面； B、将试管贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等，然后用酒精棉球擦手消毒； C、点燃酒精灯以后，在火焰旁将每一支试管内的棉塞稍微转一下，使其松动，以便在接种时易拔出，并将试管放在试管架上，放在接种台的右前方； D、将菌种和斜面培养基的两支试管，用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间的部分，斜向上，并使他们呈水平位置，也可将试管横放在左手掌中央，用四个手指托住试管，大拇指压在试管上，斜面向上； E、右手拿接种环，在火焰上将环的部分烧红灭菌，环以上凡在接种可能进入试管内的部分，均应通过火焰灼烧。（见图4） 图4 接种环灭菌 以下操作，需要使管口靠近火旁 F、用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞； G、以火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口，使试管口沾染的少量菌得以烧死； H、将烧过的接种环伸入菌种试管内，先将环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的菌体，然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种环抽出试管（图5），注意尽量不要使环的部分碰钉子到管壁，取出后不可使环通过火焰； 图5 从一个试管移种到另一试管 I、迅速将接种环在火焰旁伸进另一试管，在斜面培养基上从底部划线到顶部，但不要把培养基划破，也不要使菌种沾染管壁； J、取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上，不要用试管去迎棉塞，以免试管在运到时灌入不洁的空气， K、将接种环在火焰上再灼烧灭菌，放回原出后，再腾出手来将棉塞塞紧，将新接种的斜面试管放在试管架上； L、接种后的斜面培养基，放在恒温箱内培养。 2）、液体接种方法 3）、穿刺接种方法 4）、平板接种方法 图6 穿刺接种 作业： 1、培养微生物的试管为什么要塞上棉塞？ 它的作用是什么？ 2、无菌操作的要点是什么？