【精品论文】温度pH激活剂抑制剂对酶活性的影响实验教学中心

【精品论文】温度pH激活剂抑制剂对酶活性的影响实验教学中心 温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 (间接碘量法) (effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme) 一、目的 1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 2.学习酶活性的判定 二、原理 酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。酶活性大，反应速度就快。反之则慢。酶促反应速度受多种因素的影响。如温度、pH、激活剂、抑制剂等。 本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。借以验证各种因素对酶活性的影响。 唾液中含有唾液淀粉酶，此酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。麦芽糖具有还原性。根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量(即还原性麦芽糖的多少)判定酶活性的大小。用碘的反滴定法测定还原物的量，还原物多，酶活性大。 具体反应如下: 1、试剂成分(S、H、S试剂):CuSO、NaCO、NaHCO、KI、KIO、42333酒石酸钾钠、草酸钾。 2、判定酶活性大小的化学反应过程: NaCO，2HO —? 2NaOH ， HCO 22323 CuSO ，2NaOH —? Cu(OH)?， NaSO4224 5KI ，KIO， 3HSO —? 3I，3KSO，3HO 24224 23 酶 +++淀粉 ———?麦芽糖 麦芽糖，Cu —?麦芽糖氧化产物，Cu -+++ Cu ， I —? Cu， 2I 2 - - COO草酸钾COO ++Cu，| —————? | >Cu - - COO防止逆反应 COO - 剩余I， NaSO —? 2I， NaSO 2 223246 (与淀粉呈兰色 ) (与淀粉无色 ) 3、判定酶活性大小的标志 + 酶活性大 ? 麦芽糖多 ?Cu生成量多 ? I消耗量多 ? 2 剩余I少 ? NaSO消耗量少 2 223 酶活性越大，NaSO消耗量越少。空白实验无酶活性，因此NaSO消耗量 223223 最多。与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。 1 三、实验用品: (一)器材 1.中试管16支。 2.试管架1个。 3.恒温水浴箱1台。 4.温度计1支。 5.50ml量筒1个。 6.吸管:0.5ml 1支，1ml 2支，2ml 1支 ，5ml 1支，10ml 1支。 7. 25ml、100ml烧杯各1个。 8.电炉子一个。 (二)试剂 1.2% 淀粉溶液 2.1N NaCl溶液:称取58.5gNaCl，溶于1000ml水中。 3.磷酸盐缓冲液 甲液:称取NaHPO?12HO 23.9g溶于1000ml水中，既为M/15 NaHPO溶液，24224 此溶液pH为8.5。 乙液:称取KHPO9.08g溶于1000ml水中，既为M/15 KHPO溶液，此溶液2424 pH为4.5。 取甲液37.5ml，乙液62.5ml，两液混匀后既为pH 6.6磷酸盐缓冲液。 . 0.01% HgCl4 2。 5.1N HSO溶液:取水约250ml，加入浓HSO 28ml，稀释至1000ml。 24 24 6.Shaffer-Hartman-Somogyi试剂(S、H、S试剂) 溶液A:结晶硫酸铜(CuSO.5HO)6.5g溶于100ml水中。 42 溶液B:酒石酸钾钠12g，无水碳酸钠20g，碳酸氢钠25g溶于500ml水 中。 溶液C:碘化钾10g，碘酸钾0.8g，草酸钾18g溶于300ml水中。 将溶液B倒入溶液A中混匀，再倒入溶液C混匀后定容至1000ml。 7.0.005N NaSO溶液:取硫代硫酸钠(NaSO.5HO)25g溶于1000ml2232232 水中。此溶液浓度约为0.1N ，其准确浓度须用碘酸钾标准方法标定。(方法略) 取已调整至0.1N 标准NaSO溶液50ml稀释至1000ml即为0.005N。 223 四、实验步骤: 1、制备稀释唾液:收集唾液于小烧杯内，吸取下层唾液0.5ml(要求无气 泡)加入量筒内，用蒸馏水稀释至25ml，混匀备用。 2、取中试管8支，标号0—7，0号为空白对照，1-3号为测定温度对酶活 性的影响，4-5号为pH对酶活性的影响，6-7号为激活剂和抑制剂对酶活性的影 响 按下表操作。加入试剂及唾液后各管充分混匀。 2 影响因素 管号 淀粉 NaCl 缓冲溶液 HO 温度 稀释 温度 2 (ml) (ml) pH ml ml 时间 唾液 时间 空白 0 4.0 2.0 6.6 2.0 3.0 37? 10ˊ -- 37?20ˊ 温度的 1 4.0 2.0 6.6 2.0 2.5 37? 10ˊ 0.5 37?20ˊ 影响 2 4.0 2.0 6.6 2.0 2.5 10? 10ˊ 0.5 10 ?20ˊ 3 4.0 2.0 6.6 2.0 2.5 80 ?10ˊ 0.5 80?20ˊ pH值的 4 4.0 2.0 4.5 2.0 2.5 37? 10ˊ 0.5 37?20ˊ 影响 5 4.0 2.0 8.5 2.0 2.5 37? 10ˊ 0.5 37?20ˊ 激活剂 6 4.0 — 6 .6 2.0 4.5 37 ?10ˊ 0.5 37?20ˊ 抑制剂 7 4.0 HgCL 6 .6 2.0 2.5 37 ?10ˊ 0.5 37?20ˊ 2 的影响 (2ml) 3、充分混匀后开始保温，保温后立即由各管吸取2ml分别加入已预先加入2ml S、H、S试剂相应号码的试管中，并充分混匀。 4、各管放入沸水中加热8分钟。 5、向各管加入1N HSO 2ml，轻轻摇动至不产生气泡为止。 24 6、以0.005N NaSO滴定各管，至蓝色消退为止。并结果。 223 7、由零号试管消耗NaSOml数分别减去其余各管所消耗ml数，以此结果223 判定各种因素对酶活性的影响。 五、实验结果与分析(略) 管号 0 1 2 3 4 5 6 7 消耗ml数 差值 -- 思考题: 1.本实验判定酶活性大小的化学反应过程是什么,为什么酶的活性越大，消耗NaSO越少, 223 3.加入HSO 的作用是什么, 24 3.根据实验结果分析温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响。 生物技术实验教学中心 3