当归补血汤表征参数与其补气功效的关系初探

第18卷第12期 2012年6月 中国实验方剂学杂志 ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulae V01．18．No．12 Jun．。2012 当归补血汤征参数与其补气功效的关系初探 李霞1，马家骅2，李楠‘，杨明1，3+ (1．成都中医药大学，成都611137；2．西南科技大学，四川绵阳621010； 3．江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，南昌330004) 【摘要】 目的：研究当归补m汤理化表征参数与其补气功效的关系，探索利用理化参数表征中药汤剂质量的可行性。方 法：采用4种提取工艺(8倍量水提取1次，每次1h；8倍量水提取3次，每次2h；10倍量水提取3次，每次1．5h；12倍量水提 取3次，每次1h)制备当归补血汤，测定其25℃时的表面张力、pH、电导率和渗透压；将224只小鼠随机分为正常组、模型组、 阳性组和当归补血汤1，2，3，4号组，每组32只；模型组、阳性组、当归补血汤组每天上午ig施以100％大黄煎剂0．5mL／只，下 午强制游泳5rain，造模持续8d；于第9天开始给药，当归补血汤各组小鼠ig给予当归补血汤10g-kg～·d～，阳性组给予等量 的复方阿胶浆，正常组与模型组小鼠给予等容量生理盐水，连续给药7d。于束次给药1．5h后测定小鼠的体温，抗疲劳、耐缺 氧、耐寒时间和肝脏、脾脏、胸腺指数；最后，关联理化参数、药效和主要活性组分含量，并对试验数据进行统计和回归分析。 结果：经多项式回归分析，表面张力、pH、电导率、渗透压与组分含量和药效的综合评分之和的相关系数分别为0．8648．0．999 4，0．9738，0．9370．说明当归补血汤的理化表征参数、组分含量和补气药效三者的相关性较为显著。结论：当归补血汤理化参 数与其补气功效相关性较强，初步表明可利用上述特征参数来表征当归补血汤体系的内在质量。 【关键词】 当归补血汤；理化参数；补气；主要活性组分 【中图分类号] R285．5[文献标识码】 A [文章编号】1005-9903(2012)12-0146-05 [D01]CNKI：11．3495／R．20120411．0913．004[网络出版时间]2012-04一119：14 【网络出版地址】http：／／www．cnki．net／kcms／detail／11．3495．R．20120411．0914．004．html PreliminaryStudiesonRelationshipbetweenPhysicalandChemical ParametersandEffectofInvigoratingQibyDangguiBuxueDecoction LIXial，MAJia—hua2，LINanl，YANGMin91-3‘ (1．ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine(化M)，Chengdu611137，China； 2．SouthwestUniversityofScienceandTechnology，Mianyang621010，China； 3．KeyLaboratoryofModernPreparationofTCM，MinistryD，Education， JiangxiUniversityofTCM，Nanchang330004j China) [Abstract]0bjective：Tostudytherelationshipbetweenphysicalandchemicalparametersandeffectof invigoratingQibyDangguiBuxuedecoction，andtoexplorethefeasibilityofcharacterizingthequalityofdecoction byphysicalandchemicalparameters．Method：DangguiBuxuedecoctionwaspreparedbyfourmethods(extracting oncewith8timeswaterfor1h；extractingthreetimeswith8timeswaterfor2h；extractingthreetimeswith10 timeswaterfor1．5h：extractingthreetimeswith12timeswaterfor1h)，thephysicalandchemicalparametersof whichsuchassurfacetension，pHvalue，conductivityandosmoticpressureweredeterminedat25℃．224mice wererandomlydividedinto7groups，with32ineachgroup．modelgroup，EJiaocompoundgroupandDanggui Buxuedecoctiongroupsweretreatedwith100％Rhubarbdecoctioneverymorningandforcedtoswimfor5 min [收稿日期】20111110(008) [基金项目】 国家自然科学基金项目(30801550) [第一作者】李霞，硕士研究生．从事中药药剂学研究．Tel：15828347476，E-mail：lixial9870306@126．corn [通讯作者】 ’杨明．博士，教授，博士生导师，从事中药新制刺研究，E—mail：yang-mingl6@126．eom ·146· 万方数据 李霞，等：当归补血汤表征参数与其补气功效的关系初探 everyafternoonforeightdays．DangguiBuxuedecoctiongroups，EJiaocompoundgroup，blankgroupandmodel groupweretreatedwithDangguiBuxuedecoction，EJiaocompound，normalsalinerespectivelyfrom9“to15“ day．Temperature，timeforresistancetofatigue，hypoxiatoleranceandthehardy，liver，spleenandthymusindex weredeterminedat1．5h afterthelastadministration．Finally，relationshipsbetweenphysicalandchemical parameters，effectandthecontentofmainactiveingredientsofDangguiBuxuedecoctionwerestudied，and mathematicalstatisticalanalysisandregressionanalysiswereusedtoanalyzethesedata．Result：Through polynomialregressionanalysis，correlationeoeificientsbetweensurfacetension，pHvalue，conductivity，osmotic pressure，andthescoreofcomponentcontentandeffectwererespectively0．8648，0．9994，0．9738，0．9370． Itshowedthatphysicalandchemicalparameterscloselycorrelatedwithcomponentcontentandeffectofinvigorating Qi．Conclusion：Phy’sicalandchemicalparametershaveagoodcorrelationwitheffectofinvigoratingQiofDanggui Buxuedecoction．Theseresultspreliminarilysuggestthatsuchparameterscouldbeusedtocharacterizethequality ofdecoction． [Keywords]DangguiBuxuedecoction；physicalandchemicalparameters；invigoratingQi；main activeingredients 在当归补血汤表征参数与其补血功效的研 究⋯中发现，理化参数值与组分含量和药效的综合 评分之和、药效综合评分的相关系数均大于0．92， 表明当归补血汤的理化表征参数、组分含量和补血 药效三者的相关性显著，初步表明可利用上述特征 参数来表征当归补血汤体系的内在质量，为进一步 研究当归补血汤理化参数与其药效的相关性，本文 开展了当归补血汤理化参数与其补气功效的关系研 究，以期真正反映当归补血汤的“内在，综合”质量， 为中药提取液表征参数体系的建立提供实验依据。 1材料 1．1动物昆明种小鼠。CV级，雌雄兼用，224只， 体重18—22g，由成都中医药大学实验动物研究中 心提供，合格证SCXK(川)2008-24。 1．2药物当归补血汤参照《东垣医集》(人民卫 生出版社1993年版)原方，用量采用其2倍，即黄芪 60g，酒当归12g。提取方法见表1，提取液均经后 续处理，即离心，过滤，减压浓缩至0．5g·mL～。 表1当归补血汤的4种提取方法 1．3试剂与药品复方阿胶浆，批号100144，山东 东阿阿胶股份有限公司；亚硝酸钠；大黄煎液：加10 倍量纯净水，浸泡40min，加热回流提取，每次 20min，共提取3次，用纱布过滤，合并滤液，于 60℃水浴浓缩成1g·mL。1的大黄煎液，于4℃冷藏 备用。 1．4仪器DCAT21表面／界面张力测量仪(德国 dataphysics公司)，pHS-3C精密pH计(上海精科)， 雷磁DDS-307A电导率仪(上海精科)，FM．8P全自 动冰点渗透压计(上海医大仪器厂)，内标式玻璃体 温计(东阿阿胶阿华医疗器械有限公司)，SZ-93自 动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。 2方法 2．1 当归补血汤主要活性组分的含量测定 本研 究选用黄芪甲苷、阿魏酸、总皂苷、总多糖、出膏率作 为水煎煮提取工艺的评价指标，具体测定方法与正 交试验结果另文发表。 2．2 当归补血汤的理化参数测定 测定当归补血 汤的表面张力、pH、电导率和渗透压。 2．3 当归补血汤对复合凶素所致气虚小鼠的影响 2．3．1分组将小鼠雌雄分笼饲养，适应性喂养3 d后开始分组。小鼠雌雄各半随机分为7组：正常 组、模型组、阳性组、当归补血汤l，2，3，4号组(当归 补血汤1，2，3，4号组分别对应1．2表1中1—4号 提取工艺及其后续处理所制备出的当归补血汤)， 每组32只。 2．3．2造模模型组、阳性组、当归补血汤组每天 上午以100％大黄煎剂0．5mL／只ig，下午强制游泳 5min，正常组施以等容量的生理盐水堙，各组均自 由进食和饮水，造模持续8d。每天记录小鼠的大 便、活跃度，观察其体征变化。 2．3．3给药于第9天开始给药，当归补血汤各组 小鼠每日ig给予当归补血汤10g·kg一，正常组与模 -147· 万方数据 第18卷第12期 2012年6月 中国实验方剂学杂志 ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulae V01．18．No．12 Jun．．2012 型组小鼠给予等容量生理盐水，阳性组给予等量复 方阿胶浆。连续给药7d。每天记录小鼠的大便、活 跃度等，观察其体征变化。末次给药后1．5h，随机 抽取各组10只小鼠，用体温计测定其肛温，待度数 lOs内不变即记录体温值，而后测定下述的各项 指标。 2．3．4抗疲劳实验采用小鼠游泳存活实验法。 玻璃缸内加水，水深30CE，水面积0．6m2、水温保 持在(254-1)℃。随机抽取各组6只小鼠分别于末 次ig后1h，用胶泥粘于鼠尾，使小鼠负重10％，将 小鼠单只分别放人玻璃缸内游泳，立即开始记时。 当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面时，即为体 力耗竭，停止计时，记录游泳时间。 2．3．S耐亚硝酸钠所致组织缺氧能力的测定 随 机抽取各组6只小鼠末次给药后30rain，经ip200 mg·kg“亚硝酸钠，立即计时至小鼠呼吸停止时为 小鼠耐组织缺氧时间。 2．3．6小鼠耐寒实验随机抽取各组6只小鼠末 次给药后30rain，将每只小鼠隔离放入水深30em， 水面积0。61112，水温保持在(0±1)℃的冰水内游 泳，当小鼠头部沉入水中108不能浮出水面时，即 为体力耗竭，记录小鼠耐寒游泳时间。 2．3．7脏器指数随机抽取各组小鼠6只，剖取肝 脏、脾脏、胸腺称重，换算成脏器指数。 2．3．8统计分析实验数据经SPSS13．0软件处 理，进行单因素方差分析，以孟±s表示，P<0．05为 有统计学差异。参考相关文献⋯，采用综合评分方 式，以复合因素所致气虚小鼠的给药后体重日、体温 r、抗疲劳时间t(t=耐缺氧时间+负荷游泳时间+ 耐寒时间)、脏器指数Z(Z=肝脏指数+脾脏指 数+胸腺指数)为指标，对4种提取工艺所得的当 归补血汤进行分析。 3 结果 ． 3．1 对复合因素所致气虚小鼠的影响 3．1．1造模后动物的一般体征造模小鼠于第2、 3天开始泄泻，多为便溏；造模结束后，出现明显的 精神倦怠，嗜卧，懒动，拱背，成群蜷缩，扎堆，眯眼， 反应迟钝，行动缓慢，拉尾排便次数增多，受激排便 率增高，同时毛色枯黄，甚至稀少，耳尾色白。明显消 瘦。严重时出现受惊动时无神，抓取时挣扎无力，腹 面被毛憔悴。 3．1．2对体重的影响与正常组小鼠体重一直呈 上升趋势不同，相对于造模前，模型组、阳性组和当 归补血汤1。2，3，4号组小鼠在造模后体重均有明显 ·148． 下降，模型组小鼠造模后体重与正常组相比有明显 差异(P<0．01)，说明试验造模成功。与模型组比 较，当归补血汤l，2，3，4号组对恢复气虚小鼠体重 均有一定作用，其中当归补血汤4号组体重恢复最 明显(P<0．01)。见表2。 寰2 4种提取工艺当归补血汤对小■ 体重的髟响(；±‘，n=32) g 注：与模型组比较”_P(0．05，2’P<0．Ol；与当归补血汤4号比 较3’P设计

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