液泡系的超活染色与观察

实验五液泡系的超活染色与观察 实验目的 一、观察动、植物活细胞内液泡系的形态、数量与分布。 二、学习液泡系的超活染色技术。 实验原理 中性红为弱碱性染料,对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色,细胞核与细胞质完全不着色,这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 实验用品 一、器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘.载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。 二、试剂 1.Ringer溶液: 氯化钠 0.65g;氯化钾 0.25g;氯化钙 0.03g;蒸馏水 100 ml 2. 1%、1/3000中性红溶液 称取0.5g中性红溶于50ml Ringer溶液,稍加热(30~40 oC)使之很快溶解,用滤纸过滤,装入棕色瓶于暗处保存,否则易氧化沉淀,失去染色能力。(即为1%中性红原液) 临用前,取已配置的1%中性红溶液1ml,加入29ml Ringer溶液混匀,装入棕色瓶备用。三、材料 青蛙(或蟾蜍)胸骨剑突软骨、绿豆根尖 实验 一、青蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系中性红染色观察 软骨细胞能分泌软骨粘蛋白和胶原纤维等,因而粗面内质网和高尔基体都发达,用中性红超活染色后,可明显地显示出液泡系。 1.将青蛙处死,剪取胸骨剑突最薄的部分一小块,放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中,染色8~10min。 2.用吸管吸去染液,滴加Ringer液,盖上盖玻片进行观察。 3.在高倍镜下,可见软骨细胞为椭圆形,细胞核及核仁清楚易见,在细胞核的上方胞质中,有许多被染成玫瑰红色大小不一的泡状体,这一特定区域叫“高尔基区”,即液泡系。 二、绿豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察 1.实验前,把绿豆种子培养在培养皿内潮湿的滤纸上,使其发芽,胚根长到1cm以上。 2.用双面刀片把初生的绿豆根尖(约1~2cm长)小心切一纵切面,放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中,染色8~10min。 3.吸去染液,滴一滴Ringer液,盖上盖玻片,并用镊子轻轻地下压盖玻片,使根尖压扁,利于观察。 4.在高倍镜下,先观察根尖部分的生长点的细胞,可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小炮,这是初生的幼小液泡。然后,由生长点向延长区观察,在一些已分化生长的细胞内,液泡的染色较浅,体积增大,数目变少。在成熟区细胞中,一般只有一个淡红色的巨大液泡,占据细胞的绝大部分,将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。 从以上的观察结果,想想植物细胞液泡系的形态演进情况。 作业 1.绘青蛙胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布 2.高等动物和高等植物细胞中的液泡系(高尔基体)分布上有何不同?