HPLC法测定何首乌中二苯乙烯苷的含量

HPLC法测定何首乌中二苯乙烯苷的含量 2010年6月第17卷第18期药品鉴定 HPLC法测定何首乌中二苯乙烯苷的含量 粟力杰 (湖南省湘潭市中医院,湖南湘潭411100) 【摘要]目的:建立高效液相色谱法(HPLC)~tJ定何首乌中二苯乙烯苷含量的方法. 方法:采用高效液相色谱法(HPLC), 以十八烷基硅烷键合相硅胶为固定相(4.6mmx250mm,5m),色谱纯乙腈一水 (25:75),检测波长325nm,流速为 1.0ml/min,色谱柱柱温30?,测定何首乌中主要成分二苯乙烯苷的含量.结果:何首 乌中二苯乙烯苷进样量在0.200, 4.000g范围内,与峰面积呈良好的线性关系,其回归方程为 Y=152.92X+45.67(r=0.9997);平均回收率为99.96%. 方便,准确,重复性好,用于测量二苯乙烯苷的含量可信度高. 结论:该方法操作简单, 『关键词】何首乌;二苯乙烯苷;高效液相色谱法;含量测定 【中图分类号】R283[文献标识码】B[文章编号】1674—4721(2010)06(c)一041 —02 HPLCDeterminationofstilbeneglucosideinpolygonummultiflorumcontent determinationofcontentof2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-O-13-D-gluco- sideinradixpolygonimultiflori SULijie (ChineseMedicineHospitalofXiangtanCity,HunanProvince,Xiangtan411100,China) [Abstract]Objective:Toestablishamethodforthedeterminationof2,3,5,4一 tetrahydroxystilbene—O—p—D—glucoside inradixpolygonimuhifloribyHPLC.Methods:TheconditionofHPLCwasKromasiLCcolumn(octadecylsilanreversed bondedphase,4.6mm~250mm,5Ixm),mobilephaseofchromatographicpurityacetonitrile :water(25:75)andUVdectorat 325nm.Theflowratewas1.0ml/minandthecolumntemperaturewas30?.Results:Themet hodprovedtobelinearin therangeat0.200—4.000Ixgwithcorrelationcoefficientof0.9997.ThelinearformulawasY=152.92X+45.67. Theaver- agerecoveryandrecisionwere99.96%.Conclusion:ThemethodissimpLe,accurate,andcan beaeffectivemethodto controlthequality. [Keywords]Radixpolygonimuhiflori;2,3,5,4"-tetrahydroxystilbene-O-13-D—glucoside;HPLC;Assessment 何首乌为蓼科植物何首乌(polygonummultiflorumthunb) 的干燥块根,具有补肝肾,益精血,乌须发,壮筋骨,解毒,消 痛,润肠通便之功效【.何首乌中二苯乙烯苷类成分在抗衰 老,抗老年痴呆,增强机体免疫,造血和改善心血管功能等方 面有许多独到之处圆.本文采用高效液相色谱法,对二苯乙烯 苷类的含量测定进行了方法学方面的考察试验.该方法操作 简单,方便,重复性好,用于测定含量可信度高,效果满意. 1仪器与试剂 1.1仪器 Waters高效液相色谱仪;Empower色谱工作站;KromasiL C18反相柱(4.6mmx250mm,5m);纯水器. 1.2试剂 纯水,溶剂均为分析纯;流动相为色谱纯,2,3,5,4一四羟 基二苯乙烯一2一O—B—D一葡萄糖苷对照品,简称二苯乙烯苷, 购于中国药品生物制品检定所. 1.3试验材料 何首乌药材干粉碎过60目筛,于60.C干燥至恒重后置 干燥器中备用. 1.4高效液相色谱条件 色谱柱:KromasiLC反相柱;流动相色谱纯乙腈一水 (25:75),流速1.0ml/min:色谱柱柱温30?;紫外检测波长 325nm,理论板数按二苯乙烯苷计算应不低于2000t3],与其 二部附录IVA)在200—300nm波长范围内.绘制紫外光谱, 制川乌在231am,(283~1)nm有最大吸收峰. 本文采用了理化鉴别,光谱鉴别,薄层鉴别的方法简单 易行,准确可靠,为药品检验机构提供了较好的检测方法,提 高了药品质量及应用的安全性. 【参考文献】 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M卜一部.北京:化学工业出版, 2000:28. [2]郭晓庄,喇万英,张树峰,等.有毒中药大辞典[M].天津:科技翻译出版公 司,1992:61. [3]张贵君.现代实用中药鉴别技术[M].北京:人民卫生出版社,2000:60. [4】尹靖光.1~Jll产十二批制川草乌质量考察[JJ.中草药,1994,25(2):72. [5]龙沛霞,王玉珍.一阶导数UV分光光度法测定制川I乌,制草乌,附子 中生物碱含量【J】.中草药,1996,27(9):531. [6】刘训红,王玉玺,房克慧.中药材薄层色谱鉴别【M].天津:天津科学技术 出版社.1990:40. f收稿日期:2010—04—271 CHINAM0DERNMEDICINE中国当代医药41 药品鉴定2010年6月第17卷第l8期 他组分均能达到较好的分离.进样体积:10.此条件下,二 苯乙烯苷的保留时间为6.857min(图1). mAU mAU mAU A对照品 B供试品 C阴性干扰 图1高效液相色谱图 1.5溶液的制备 1.5.1对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的二苯乙烯 苷对照品10.O0mg置50ml棕色容量瓶中,加色谱纯甲醇溶 解,定容至刻度,摇匀,制成每1毫升含0.2mg的溶液,即得 浓度为200~g/ml的二苯乙烯苷对照品溶液,冰箱内保存, 备用. 1.5.2供试品溶液的制备称取何首乌细粉0.250g,精密称 定,置50m1棕色具塞三角瓶中,加水2ml使之溶解,准确加 入色谱纯甲醇20m1,超声处理30rnin(功率:120W,超声频 率:40kHz),取出,放冷,滤过,弃去初滤液,减压挥干溶剂, 残渣加甲醇超声溶解,定容至50m1容量瓶,摇匀并将滤液 过0.45m微孔滤膜,即得供试品溶液. 2实验方法和结果 2.1线性关系考察 精密称取二苯乙烯苷对照品溶液1.0,4.0,8.0,10.0,12.0, 16.0,18.0,20.0ml,置10ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻 度,摇匀,分别吸取以上稀释溶液各101,注入液相色谱仪, 记录相应的峰面积积分值,以峰面积的自然对数为纵坐标. 进样量(g)为横坐标,回归计算,绘制标准曲线,得线性方程 为Y=152.92X+45.67,r=0.9997.结果表明:进样量在 0.200,4.000g范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系. 2.2稳定性试验 制备供试液,含量测定项下室温放置,每隔一定时间进 样10l,测定二苯乙烯苷峰面积积分值,RSD为0.51%,结果 说明供试液室温放置.至少在24h内稳定性良好. 2,3重复性试验 分别取何首乌细粉6份,按供试液制备方法制成供试 液,进样10l,按含量测定方法测定何首乌中二苯乙烯苷的 平均含量,RSD为0.43%,说明本实验方法的重复性较好. 2.4加样回收率试验 分别精密称取何首乌细粉20mg3份,10mg3份,0.05g 样品中分别加入二苯乙烯苷对照品0.05nag,10.00g样品中 分别加入二苯乙烯苷对照品0.10g,按供试液制备方法制成 供试液,按含量测定方法测定,计算回收率为99.96%,RSD是 0.16%.准确性较好. 2.5样品的含量测定 取10批何首乌细粉,按供试品制备方法制成供试液,按 含量测定方法测定,以供试品峰面积积分值与对照品峰面积 积分值计算,含量总平均值为2.93mg,RSD是0.49%. 3实验结论 何首乌临床应用极其广泛.实验结果表明:二苯乙烯苷 在0.200,4.000g范围内呈良好的线性关系,样品分离度好, 与阴性无干扰,且样品稳定性好.测量二苯乙烯苷的含量,宜 采用高效液相色谱法作为测量手段,操作简单,结果准确,重 现性好,可信度高. 【参考文献】 『11吴立军,天然药物化学【MJ_5版一E京:人民卫生版社,2003:156. [2】国家药典委员会,中华人民共和国药典[Ml『一部.北京:化学工业}H版 社.2005:430. [3】赵陆华.高效液相色谱法分析中药成分手册【M1.北京:中国医药科技 出版社.1994:637. 『41张纯,杨少麟.高效液相色谱法测定何首乌中二苯乙烯甙的含量及其 稳定性考察fJj.中国中药杂志,1999,24(6):355—357. (收稿日期:2010—05—12) 42中国当代医药CHINAMODERNMEDICINE