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CD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究.doc

2017-12-06 5页 doc 44KB 18阅读

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CD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究.docCD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究.doc CD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究 前言 目前,树突状细胞(dendritic cells,DCs)被认为是体内功能最强、唯一能激活初始T 细胞的专职抗原递呈细胞(antigenpresenting cells, APCs),或启动获得性免疫反应、或诱导免疫耐受,是联系先天免疫与获得性免疫的枢纽。DCs 通过模式识别受体参与抗原物质的识别、内化、处理和加工等。皮肤作为人体最大的器官,是最重要的天然免疫屏障,也是联系体内外环境...
CD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究.doc
CD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究.doc CD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究 前言 目前,树突状细胞(dendritic cells,DCs)被认为是体内功能最强、唯一能激活初始T 细胞的专职抗原递呈细胞(antigenpresenting cells, APCs),或启动获得性免疫反应、或诱导免疫耐受,是联系先天免疫与获得性免疫的枢纽。DCs 通过模式识别受体参与抗原物质的识别、内化、处理和加工等。皮肤作为人体最大的器官,是最重要的天然免疫屏障,也是联系体内外环境的枢纽。皮肤树突状细胞包括皮朗格汉斯细胞(Langerhanscells,LCs)和真皮树突状细胞(Dermal dendritic cells,DDCs.)。LC 可特征性地表达CD1a 及独特细胞器-Birbeck 颗粒(BG);DDCs 进一步分为CD1ahigh/CD4+/CD14-/CD16-/CD2O6high/CD207/CD209+ 细胞和CD1a1ow/CD4+/CD14+/CD16-/CD206low/CD207-/CD209+ 细胞。在正常非炎症情况下,定居皮肤的LC 前体细胞主要存在于真皮,且在转化生长因子B(TGF B)和CCL20 共同作用下,LC 前体可通过真表皮屏障。DCs 是皮肤免疫系统的重要组成部分,或诱导免疫应答,或诱导免疫 耐受。本研究采用CD1a、CD209 和MHCII 进行免疫组化染色,着重观察正常新生儿指皮组织DCs的形态、数量以及分布状况。 1 和方法 1.1 材料 5 例尸检新生儿双手无名指组织(小块指尖组织,生后1天死亡,死后24 小时送检)取自陕西省高新医院送检的尸检病例。所取组织发育良好,无炎症、坏死和肿瘤。OCT 冷冻包埋剂包埋指皮组织进行纵(垂直)切片观察。小鼠抗人CD209 单克隆抗体,购自R&D 公司产品(产品号120509,工作浓度为1:200),小鼠抗人CD1a 单克隆抗体购自DAKO 公司(产品号为F7141 ,工作浓度为1:100),小鼠抗人MHC 单克隆抗体购自Antibody Diagnostica 公司(产品号为M--0305 ,工作浓度为1:100),二抗试剂盒(产品号SP9002)和DAB 显色试剂盒(产品号SP9002)均购自北京中衫金桥公司。值得指出的是,本研究已通过西安交通大学医学伦理委员会的审核,所取新生儿手指(无名指指尖)样本均符合伦理原则。 1.2 制片及免疫组化染色 每例新生儿左手无名指组织做冰冻切片(厚度为3 微米),行免疫组化染色,DAB 显色,苏木素复染;空白对照用PBS 代替单抗,其他染色步骤相同;每例新生儿右手无名指组织,常规石蜡切片,HE 染色,光镜观察。先在低倍镜下观察免疫组织化学染色阳性部位,再转到高倍镜下读取阳性细胞数量,每一标本取10 个高倍视野进行阳性细胞计数,比较阳性细胞的表达情况。 1.3 结果判定 以胞膜及胞浆为棕黄色颗粒的细胞作为阳性细胞,以棕黄色颗粒的轴突作为阳性轴突。每张切片随机取10 个高倍镜视野(×400),每个视野阳性细胞计数为每项相加后的总分值,每张切片的阳性细胞计数为10 个视野分值的平均数,计数染色阳性细胞和细胞总数,计算细胞阳性率:细胞阳性率= 阳性细胞数/细胞总数×100%,结果以x±s 表示。 1.4 统计学分析 采用SPSS20.0 统计软件进行分析,结果以x±s 表示,多组间率的比较采用卡方检验,P<0.05 表示差异有统计学意义。 2 结果 2.1 病理学观察 光镜下,阳性细胞呈棕褐色,大小不等、形态多样,有数量不等的突起,呈散在或灶带状分布。CD1a 标记的阳性细胞胞膜有棕黄色物质沉着,细胞呈长梭形,有两个长短粗细不等突起,不同细胞间突起可相互连接,形态不规则,胞体较大,呈圆形或卵圆形,树突状突起依稀可见。该阳性细胞主要分布于表皮乳头周围,血管外膜以及真皮疏松结缔组织。CD209 标记的阳性细胞多为位于真皮层内,血管神经分叉处,血管外膜,环层小体被囊结缔组织中,细胞形态各异, 圆形或长梭形。MHCII 标记的阳性细胞多位于真皮乳头周围、血管外膜处,细胞呈圆形或长梭形,伸出长短粗细不等的突起,阴性对照未见阳性细胞,石蜡HE 切片未见异常改变。 2.2 统计学结果 指皮组织中CD1a 标记的DCs 阳性率(23±11.9)%,CD209 标记的DCs 阳性率为(30±7.7)%,MHCII 标记的DCs 阳性率为(8±1.9)%,卡方检验显示三组阳性率不同(X2=299.575),CD1a 组和CD209 组标记的阳性细胞率高于MHCII 标记组(P<0.05)。 3 讨论 DCs 是Steinman和Cohn(1973 年)从小鼠脾脏组织中分离出的一类形态特殊的细胞,因其具有神经细胞样的树突而命名。目前,树突状细胞被认为是体内功能最强的、唯一能激活初始T 细胞、启动适应性免疫应答的专职抗原提呈细胞(Antigenpresenting cells, APCs),是联系先天免疫与获得性免疫的枢纽。皮肤LC(Langerhans cell, LC)表达免疫标记分子Fc R、CR、MHC?和CD207/ Langerin,真皮DCs 缺乏特异标记分子。CD1a 是一种提呈脂类抗原的抗原呈递分子,能将脂质抗原递给T 细胞群和T 细胞群,目前被公认为未成熟DCs(immatureDCs, imDCs)主要特征性标志。表达CD1a 的树突状细胞主要为LC,但Nest le 等报道DDC 中约12 %,40 %表达CD1a。研究发现,CD1a 可能介导肿瘤源性脂质和糖脂抗原向肿瘤特异性的T 细胞递呈,从而促进这些溶细胞性细胞的抗瘤免疫反应的发生,它在各个系统的肿瘤中均有表达,但表达机制不完全相同[1。真皮CD1c+DCs 和LCs 都表达CD1a,人CD1a+DDCs 在表型和功能上都存在异质性。与LC 一样,人CD1a+DDCs 可分泌IL-1,并可激活初始CD8+T 细胞。但与LC 不同的是,人CD1a+DCs 可表达CD11b,分泌IL-8。DC-SIGN ,即CD209,亦称HIV-1 gp120 结合C 型凝集素。皮肤组织中,表皮层内的CD1a+LCs 并不表达CD209,而真皮层内的DCs 表达此标记。 研究表明,CD209 具有正负双向免疫调节功能: 一方面介导外源性抗原提呈、DCs 迁移及T 细胞活化,引发机体免疫应答,在抗感染免疫和抗肿瘤免疫监视中发挥关键作用;另一方面可诱导宿主对多种病原体产生免疫耐并参与肿瘤细胞的免疫逃逸。MHC II 是最能反映DCs免疫功能的主要分子之一,表达于成熟DCs,是DCs 识别、 摄取抗原以及其他免疫细胞信号传递的必要条件。MHCII 分子主要参与识别、提呈外源性抗原。 DCs 群来源多样,分布广泛,功能各异,具有高度的异质性。炎症和稳态下,皮肤DCs 的分类不同,功能各异。不同亚群的更新速度亦不同。皮肤组织作为人体抵御外界感染的第一道防线,具有天然的免疫屏障作用。明确DCs 在指皮组织的形态,分布及数量是很有必要的。目前,皮肤DCs 群的研究对象多来自动物模型。而对于人皮肤DCs 群的体内形态功能研究仍未深入,有关稳态下人皮肤DCs 的分化和功能更知之甚少。本研究采用CD1a、CD209 和MHCII 标记新生儿指尖皮肤及皮下组织DCs,清晰观察到表皮乳头周围、血管外膜、血管神经分叉处周围、真皮疏松结缔组织中以及环层小体被囊结缔组织中,阳性细胞呈棕褐色,大小不等、形态多样,具有数量、长短粗细不等的突起,呈散在或灶带状分布。且CD1a 和CD209 标记的不成熟DCs 数量高于MHCII 标记的成熟DCs。本研究发现,正常条件下,新生儿指尖皮肤及皮下组织中存在一群分布不同,形态、功能各异的DCs 群,且处在不同的生长发育分化阶段,并以表达不成熟DCs 为主,这丰富了皮肤免疫系统的构成,也为全面认识皮肤DCs 的异质性和复杂的生物学行为提供依据。
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