天麻首乌片对D-半乳糖致衰老小鼠机体氧自由基的影响

天麻首乌片对D-半乳糖致衰老小鼠机体氧自由基的影响 天麻首乌片对D-半乳糖致衰老小鼠机体氧 自由基的影响 第l2卷第lO期 Vo1.12No.10 ? 方药研究? 中医药导报 Guidingjourna]ofTCM 2006年lO月 0ctober.2006 天麻首乌片对D一半乳糖致衰老小鼠机体氧 自由基的影响 TheEffectsofTianmaShouwuTabletsOntheOxygen—derivedFreeRadicals inBodyofAgingMiceInducedbyD——galactose 邱赛红,蔡颖,孙必强,肖德华 (1.湖南中医药大学,湖南长沙410007;2.湖南省国华制药股份有限公司,湖南长沙410013) [摘要]目的:探讨天麻首乌片治疗脑动脉硬化等衰老性病变的药理作用机制.方法:给小鼠连续40天皮下注射D一 半乳糖制备急性衰老模型,观察药物对动物血和脑组组织SOD活性与MDA含量的影响,以及脑,胸腺及脾脏重量变化.结 果:天麻首乌片能提高衰老模型动物血与脑组织的SOD活性并降低其MDA含量,可抑制衰老模型动物的脑和胸腺重量减轻. 其作用均有随剂量的加大而增强的趋势.结论:天麻首乌片能减轻衰老过程中脂质过氧化反应,有一定的抗氧化作用. [关键词]天麻首乌片;氧自由基;抗衰老 [Abstract]Objective:TostudythemechanismofpharmacologJcalactionsthat~anmaShouwutabletstr eatedthecerebralarteri— osclerosisorotheragingdiseases.Methods:Toestablishtheacuteagingmodelbyhypodermicallyinjecti ngD—galactosesequentially for40days,toobservetheactivityofSODandthecontentsofMDAinbloodandbrain;theweightalternati onofthebrain,andspleen andthymusglandofmiceafterbeingtreatedbyTianmaShouwutablets.Result:TianmaShouwutabletsC anincreasetheactivityof SODanddecreasethecontentsofMDAinbloodandcerebraltissueofmice;italsoinhibitstolightenthewe ightofbrainandthymus. Itsactionspresentedastrongertrendwithdoseincreasing.Conclusion:~anmaShouwutabletscanreliev ethelipidperoxidationinthe courseof8ng,andhasdefiniteanti—oxidation. [Keywords]TianmaShouwutablets,Oxygen—derivedfreeradicals,Anti—aging [中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1672?一951X(2006)10—0061—02 天麻首乌片由天麻,首乌,熟地,丹参,当归,川芎等14 味中药组成,具有滋阴补肾,养血活血的功效.相关临床研 究报道,该药用于治疗与衰老有关的某些病症如头晕,目眩, 耳鸣,脱发,脑动脉硬化,高血压,冠心病等有较好的作 用?.2J.现代研究认为,衰老过程中的氧自由基损伤是许多 老年性疾病产生的重要因素].笔者通过制备急性衰老动 物模型,对天麻首乌片的相关作用进行了实验研究. 1材料与方法 1.1药物天麻首乌片干浸膏粉由湖南省国华制药有限公 司提供,批号:20040701,每g相当于生药量2.85g;维生素E 胶丸由浙江医药股份有限公司新昌制药厂生产.0.1g/丸. 批号:031004. 1.2动物NIH小鼠由湖南中医药大学实验动物中心提 供,合格证号:湖南省医学实验动物管理委员会医动字20— 001号.实验动物环境:清洁级环境,合格证号:医动字 20002号 1.3试荆D一半乳糖系上海化学试剂二厂生产,AR级. 超氧化物岐化酶(SOD)测定试剂盒(黄嘌呤氧化酶法),丙二 醛(MDA)测定试剂盒(硫代巴比妥酸法)均由南京建成生物 研究所生产. 1.4仪器FA1004电子天平,上海天平仪器厂生产.754 型分光光度计,上海第三仪器厂生产. 1.5统计学处理全部计量资料均采用均数?标准差(x4- s)表示,统计学处理在SPSS11.0软件上进行,组间比较用t 检验. 1.6试验方法18,22gNIH小鼠80只,参照文献方 法],除雌雄各留6只作为正常对照组外,其余动物均由颈 背部皮下注射D一半乳糖80mg/kg,每天1次,连续2O天. 第21天将造模动物按性别,体重分层,随机分成5组,每组 12只.分别为模型组,100mg/kg维生索E对照组,天麻首 乌片2,6,12g/组.正常组与模型组给蒸馏水.每日1 次,连续给药20天.给药期间造模动物仍继续按每天1次 61 第12卷第1O期 Vo1.12No.10 中医药导报 GuidingJournalofTCM 2006年IO月 0ctober.2006 注射D一半乳糖80mg/kg.末次给药后1h,全部动物摘眼 球取血,分离血清;迅速取大脑,脾脏和胸腺于电子天平上称 重,分别计算脑,脾,胸腺重量指数.另取右额大脑一块精密 称重,低温下用生理盐水制成10%组织匀浆,4?3000r/min 离心10min取上清液.血清与匀浆液置低温保存.按试剂 盒要求分别测定血清与脑组织的超氧化物岐化酶(SOD)活 性与丙二醛(MDA)含量. 2实验结果 2.1对衰老模型小鼠SOD活性与MDA含量的影响实验 动物造模后,模型组动物逐渐可见毛色灰暗失去光泽,消瘦, 精神欠佳,少动和行动迟缓等衰老的体征.服用VitE和天 麻首乌片的动物上述症状均较模型组减轻.血与脑组织氧 SOD与MDA测定结果表明,与正常对照组比较,模型组动物 血清与脑组织的SOD活性明显降低,而MDA含量则显着增 加.天麻首乌片有提高衰老模型动物血与脑组织的SOD活 性及降低其MDA含量的作用,其作用随剂量的加大而有所 增强,6kg以上剂量天麻首乌片均较模型对照组差异有统 计学意义.当天麻首乌片加大到12剂量时,其作用较 VitE的效果明显.(见表1) 表1天麻首乌片对衰老模型小鼠SOD活性与MDA含量的影响(x?s,n=12) 注:与正常对照组比较:P<0.05,P<0.01;与模型对照组比较:P<0.05,P<0.01,与VitE组 比较:P<0.05;(下表 同) 2.2对衰老模型小鼠脑,脾,胸腺重量指数的影响试验结 束时取动物脑,脾和胸腺组织称重结果,造模动物的脑和胸 腺重量均较正常组减轻.天麻首乌片有抑制衰老动物脑和 胸腺重量减轻的作用,并有随剂量增大其作用增强的趋势. 维生素E对衰老模型动物脑和胸腺重量减轻的作用不明显, 天麻首乌片的作用较维生素E增强,其剂量12kg时两组 比较,差异有统计学意义.此外,本试验中未观察到D一半 乳糖长期注射对动物脾脏重量有明显影响.(见表2) 表2天麻首乌片对衰老模型小鼠脑,脾,胸腺重量 指数的影响(x?s.n=12) 3讨论 衰老作为一种全身退行性生理过程,是生物界不可改变 62 的规律.如何防治伴随着衰老而出现的相关老年性疾病,一 直是人类科学的研究课题.中医药在改善衰老过程中生活 质量的下降及防治被认为与衰老有关的某些病变,如高血 压,冠心病,脑动脉硬化等方面的作用已得到人们的充分肯 定. SOD是体内重要的抗氧化酶,具有保护组织免受自由基 损伤的作用.随着年龄的增加,体内SOD的含量下降,脂质 过氧化物堆积,细胞毒性增强,血管的生物活性降低,易造成 老年机体高血压,动脉硬化以及心脑血管病与脑动脉硬化发 生. D一半乳糖致衰老模型是基于衰老的代谢学说而建立的 一 种与自然衰老所出现的生化改变相近的实验动物模型”]. 实验结果表明,天麻首乌片能提高D一半乳糖所致亚急性衰 老小鼠血与脑中的SOD活性;降低血与脑中的过氧化脂质 丙二醛(MDA)含量,显示了较好的抗氧化作用.机体组织器 官重量,特别是脑,脾,胸腺等重要脏器重量的改变,也是反 映机体衰老的重要指标,天麻首乌片能抑制衰老模型小鼠脑 和胸腺重量减轻,显示出较好的抗衰老作用. 中医认为肾虚是衰老的根本原因.天麻首乌片的主要 功效是滋补肝肾,这是该药用于治疗老年(下转第66页) 第l2卷第l0期 Vo1.12No.10 中医药导报 GuidingJournalofTCM 2006年l0月 0ctober.2006 份,按下表所示分别加入不同浓度淫羊藿甙标准品溶液2 fIll,按供试品溶液制备项下方法操作,测定.(见表1) 表1加样回收率试验 29样品含量测定取样品3批,按供试品溶液的制备项 下方法操作,进样测定结果.(见表2) 表2补肾益骨膏中淫羊藿苷的含量测定结果(n=3) 3讨论? 本实验的关键是淫羊藿苷的提取,故在提取条件的优化 实验中,曾尝试用水提,30%乙醇,50%乙醇,70%乙醇,乙醇 和甲醇为提取溶媒进行提取,并对比了回流提取和超声波振 荡提取的差异,实验发现采用不同的提取溶媒,淫羊藿苷的 提取率有较大差异,以纯水和乙醇为提取溶媒,淫羊藿苷含 量均较低,而采用一定浓度的乙醇或甲醇提取,淫羊藿苷含 量明显增高,结果表明,采用甲醇超声振荡提取,每次30 min,提取4次后,样品中淫羊藿苷已基本提取完全. 对流动相系统进行了多种尝试,如甲醇一水,乙腈一水, 四氢呋喃一水等,结果发现乙腈一水系统能使淫羊藿苷得到 较好的分离.实验表明,采用乙腈一水(30:70)为流动相, 柱温25qC时能得到较稳定和符合定量要求的色谱图. 本法简便,快速,结果可靠,可为产品的质量标准提供参 考. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北 京:化学工业出版社,2005:267 (收稿日期:2006—05—15编辑:朱民) (上接第62页) 病有效的重要基础.近年来的大量研究还发现,大多数 慢性病及老年病患者在肾虚的同时,也均存在不同程度的 “血瘀”.”肾虚与血瘀”已构成多种慢性病,老年病及人体衰 老的基础J.天麻首乌片在滋补肝肾的基础上结合了养血 活血,正是更好地针对了衰老过程中”虚”与”瘀”并存的状 态.另有研究也证实,天麻首乌片有改善阴虚血瘀模型血液 流变学状态的作用(另文发表).这些都为天麻首乌片在Il缶 床用于治疗某些老年性疾病的有效性提供了药理实验依据. 参考文献: [1]喻正科,周兵,刘春华,等.天麻首乌片治疗脑动脉硬化症 56例Il缶床观察[J].湖南中医杂志,2002;18(4):57 [2]谭白山.天麻首乌片治疗缺血性中风4JD例[J].湖南中医 杂志,2002;18(4):53 66 [3]吴绍熙,郭宁如.从自由基学说分析中医药的抗衰老作用 [J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2005,4(1):52 [4]李文彬,韦丰,范明,等.D一半乳糖在小鼠上诱导的拟脑 老化效应[J].中国药理与毒理学杂志,1995,9(2):93 [5]赵鹏,杨玉英.半乳糖制备亚急性衰老动物模型的可行性 [J].中国食品卫生杂志,1999,11(1):52 [6]皇甫超申,李明善.猕猴脑动脉硬化自由基损伤机制[J]. 河南大学学报(医学科学版),2001,20(3):10 [7]SongX,BaoM,LiD.AdvanceglycationinD—galactocc inducedmouseagingmode[J].MedchAgingDev,1999, 108(3):239 [8]陈国华,潘光辉.中医药延释衰老的现代研究概况[J].潍 坊医学院学报,2004,26(6):453 (收稿日期:2006一o6—23编辑:朱民)