关于绞股蓝总甙片质量标准的研究

关于绞股蓝总甙片质量标准的研究 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 关于绞股蓝总甙片质量标准的研究 关于绞股蓝总甙片质量标准的研究 摘要: (1)对绞股蓝总甙片现有的注册标准进行分析，验证其合理的鉴别与含量检验，修改检验标准(2)为了能有效地控制绞股蓝总甙片药品质量，将其处方中绞股蓝总甙的含量测定的紫外吸收测定法修改为采用高效液相色谱法测定含绞股蓝皂苷-A(C53H90O21)的含量。本方法操作简便，结果准确可靠。(3)根据新修订的绞股蓝总甙片质量标准草案，将三批中试产品进行了质量研究和稳定性考察，结果证明其可行性。 关键词:绞股蓝皂苷-A(C53H90O21);含量;质量标准 一、概述 绞股蓝总甙是从葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Mak. 全草中提取得到的总皂苷经精制而成。主要功能是;养心健脾，益气和血，除痰化瘀，降血脂。其制备方法为:绞股蓝加水煎煮，煎液过滤，滤液经大孔树脂吸附，水洗去杂质，甲醇洗脱，洗脱液过滤，回收甲醇，浓缩，干燥，粉碎，再将绞股蓝总甙粉与辅料按比例混匀，制粒，干燥，压片，即得。 二、质量标准修改说明 绞股蓝总甙片收载于《部颁标准》新药转正标准第四册P33页 [WS3-Z-007-93(z)]，笔者参考药典方法对鉴别项方法修改，采用高效液相色谱(HPLC)法对绞股蓝总甙中的有效成分绞股蓝皂苷-A(C53H90O21)进行含量测定，旨在为该产品的质量控制提供客观的定性定量评价方法。 1.仪器与试药 LC-15C型高效液相色谱仪(日本岛津)。绞股蓝皂苷A对照品(中国药品生物制品检定所);20mg绞股蓝总甙片(正大制药有限公司，批号120203，120411,120412) 2.性状 本品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后显淡黄色。三批样品的结果均符合规定 3.定性鉴别 取本品10片，除去糖衣，研细，加甲醇溶解，滤过，制成每1ml含10mg的溶液，作为供试品溶液。另取绞股蓝皂苷-A对照品，加甲醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。阴性样品溶液的制备:分别按比例称取糖衣片、薄膜衣片辅料，按供试品溶液制备方法制备糖衣片、薄 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 膜衣片阴性样品溶液。 照《中国药典》现行版一部附录? B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10?以下放置的下层溶液为展开剂，展开，展距12cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点及荧光斑点。 依照次检验方法对三批样品进行测定，仅对其显色方法进行了修订。原显色方法为“热风吹至斑点显色清晰”，因其可操作性差，日光下斑点轮廓不清晰，将其修订为“在80-100?加热至斑点显色清晰”。三批样品TLC结果表明，该方法显色效果良好。如图所示:且阴性无干扰，结果见图1: 图1 绞股蓝总苷片TLC鉴别图谱 1:糖衣片阴性 2、3、4:糖衣片(批号分别为: 120203、120411、120412) 5:绞股蓝皂苷-A 6:薄膜衣片(批号:120502) 7:薄膜衣片阴性 4.含量测定 本质量标准拟将其改为高效液相色谱法，原因如下:一是高效液相色谱仪具有专属性好的特点，可以克服辅料和其它组分的干扰，使测定结果更为精确、可靠。二是符合目前药品质量控制的发展趋势，有利于中药现代化的实现。 (1)色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18柱(4.6×250mm，5μm); 流动相:乙腈-水(30:70);流速:1.0ml/min;柱温:28?;检测波长:203nm (2)样品溶液的配制与测定 对照品溶液的制备取减压干燥3小时的绞股蓝皂苷-A对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于绞股蓝总皂苷100mg的细粉，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率250w，频率33kHz)，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。 (3)系统适用性试验 精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，色谱图(见附图1~4)。供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液主峰保留时间相同处，有相同的色谱峰出现。表明色谱系统适用性良好。 溶剂色谱图 对照图谱 糖衣片样品 阴性对照图谱 (4) 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 专属性试验 按处方比例称取除绞股蓝总苷以外的其余辅料，按方法制备阴性对照溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图。结果表明，阴性对照品溶液对测定结果无干扰。 (5)精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，连续5次注入液相色谱仪，记录色谱图，结果绞股蓝皂甙A含量的RSD为1.4，由此表明:仪器精密度良好。 分别精密吸取对照品溶液5μl、8μl、10μl、(6)线性关系考察 15μl、20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对进样量绘制线性图，结果表明绞股蓝皂甙A进样量在0.5120~2.0480μg范围内与峰面积积分值有良好的线性关系。 (7)重复性试验 取批号为120411的样品，按供试品溶液制备方法制备，平行6份，分别精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果的RSD为1.3%(n=6)，表明:本方法的重复性较好。 (8)稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(室温放置)10μl，分别于0、2、4、8、12、16小时注入高效液相色谱仪，记录色谱图结果表明绞股蓝皂苷A的峰面积无显著变化，RSD为1.3%(n=6)，表明，该样品供试品溶液至少16h内稳定性良好 (9)加样回收率试验 精密称取同批号已知含量的样品6份，每份约40mg，精密称定，置10ml量瓶中，再分别精密加入浓度为0.5688mg/ml的绞股蓝总苷-A对照品溶液1ml，加入甲醇适量，超声处理(功率250w，频率33kHz)，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得。按含量测定方法测定，结果见附图10及表3: 回收率(%) = 表3回收率测定结果 编号 称样量 (mg) 样品中含 量(mg) 对照品加 入量(mg) 测得量 (mg) 回收率 (%) 平均回收 率(%) RSD (%) 1 41.32 0.5206 0.5688 1.0940 100.9 99.6 1.0 2 43.73 0.5510 0.5688 1.1133 98.8 3 39.26 0.4947 0.5688 1.0663 100.6 4 40.04 0.5045 0.5688 1.0703 99.4 5 42.72 0.5383 0.5688 1.1048 99.6 6 41.55 0.5235 0.5688 1.0893 98.4 结果表明:6份样的平均回收率为99.6%，RSD为1.0%，本方法的准确性较高。 (10)样品的含量测定 取本品(批号120203，120411,120412)，分别按供试品溶液制备方法制备，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 入液相色谱仪，记录色谱图按外标法以峰面积计算绞股蓝皂苷A含量分别为:2.5,2.7,3.0 mg/片 三、结果与讨论 对本品的薄层鉴别进行了阴性对照试验，结果表明阴性对照无干扰。修改显色方法后斑点清晰，重现性良好。 上样品测定结果表明，三批样品每片含股蓝皂苷-A在2.5~3.0mg之间，因此拟定本品含绞股蓝皂苷-A不得低于2.0mg/片。含量的测定方法由原有的紫外方法修改为液相测定，克服了紫外测定法中测定结果的稳定性，能够更加客观有效的控制药品质量。适应药品质量控制的发展趋势。 参考文献: [1]中国人民共和国药典(一部)。 北京:中国医药科技出版社，2010.1:附录34,36. [2][WS3-Z-007-93(z)]国家中成药标准汇编