快速病理切片制作
苏州卫生职业技术学院
病理检验教研室
史 恩 溢
第 六 单 元
总目录
? 快速病理切片是指在尽可能短的时间内将小块组
织制成病理切片,以便迅速作出病理诊断的过程
? 是临床外科(包括妇产科、五官科等手术科室)
手术中的一项重要的辅助工作
? 常用的方法主要有快速石切片和冰冻切片等
? 常规的病理检验一般从取材开始需24,48小时完
成诊断
? 快速病理诊断时,病人和医生在手术过程中等待病
理诊断结果进而决定下一步手术措施,这就需要快
速病理切片
? 一般从取材后开始,快速石蜡切片应30,40分钟
出片,快速冰冻切片应15,20分钟出片
? 常规病理切片从取材后需经固定、脱水、透明、
浸蜡、包埋、切片、烤片和染色等步骤
? 一般(至少)补充固定1h、脱水2h、透明15min、浸
蜡30min、包埋30min 、烤片30min
? 组织的大小和厚薄、温度、所用试剂种类和浓度、
处理方法等均可改变制片所需的时间
? 快速石切片主要是通过提高处理的温度、试剂的浓
度,改变试剂的种类、处理方法等,主要缩短了固
定、脱水、透明、浸蜡、包埋和染色的时间,从而
可以较快地制成切片
? 冰冻切片省却了脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤,
切成薄片后再固定使时间大大缩短,冰冻切片组织
材料新鲜,容易着色,故染色时间亦可适当缩短,
制片速度更快
? 快速石蜡制片,在临床病理诊断工作中应用较多,
是一种效果较好的快速切片方法,目前在我国普遍
使用
? 利用此技术能在较短时间内制出切片,及时作出诊
断,是许多医院病理科的重要工作
? 快速石蜡制片要求是“快”、“好”、“安全”
? 快速石蜡制片过程中所应用的试剂,大多为低沸点
易燃药品,如果一旦与火源相遇,则易引起燃烧;
有些试剂毒性较大,在操作过程中要注意防护
? 有毒试剂(气体)应在抽风设备下操作;易燃试剂
操作时应远离火源
? 凡能进行常规石蜡切片的也可制
作快速石蜡切片,只需增加一个
电炉或水浴锅,也可自制加温器
? 使用超声波组织快速处理仪效果
更佳
? 先用20,福尔马林液固定,
1,2min,使组织有一定硬
度,进行修(平)整削薄,
再固定1,2min
? 一般是新鲜标本,大小、厚度 1cm×1cm×,0.2cm
? 固定作用是很重要的关键
? 一般采取加热二重固定法,温度控制在85?左右
? 将丙酮脱水的组织投入已熔化
之石蜡内,加热(85?左右)
? 一般3,4min,即可进行包埋
? 当组织表面气泡消失、下沉即
说明浸蜡过程已完随后
? 将固定好的组织投入纯丙酮(30ml),加热(85?左右)
? 丙酮吸水作用强,对组织收缩变硬较显著
? 一般3,5min或待30ml丙酮挥发尽
? 或当组织在丙酮中轻飘上浮、颜色灰白即可
? 因丙酮可溶解石蜡,故不需再行透明
? 固定、脱水、浸蜡过程的温度一般控
制在80,90?
? 可用超声波组织快速处理仪来处理,
通过超声波来加速组织细胞与试剂的
分子运动,达到固定、脱水、浸蜡的
目的
? 具有切片整体紧密、操作安全方便,
组织收缩度小,细胞结构清洗,着色
效果好
? 蜡块稍冰冻后即可按常规方法进
行切片
? 为防止染色时脱片,附贴前应先
在载玻片上涂胶(蛋白甘油或白
胶水)
? 将事先做好的空蜡块,用镊子加温后将蜡块表面融
化(面积与组织一致,深度约2mm,注意不要让蜡液
流掉),把组织平整地放入蜡块内,待变蜡液稍凝固,
立刻放入冷水中压平
? 快速石蜡切片的H-E染色与常规H-E
染色基本相同
? 为了缩短时间,有些非主要步骤可
省略,增加染液浓度或加温也可缩
短染色时间
? 将附贴好的切片,用吸水纸轻压(吸去水分并使组
织与载玻片贴牢)
? 用酒精灯均匀加热切片,不停得移动切片,注意观
察,待石蜡熔化(由白色变为透明)即离开火焰,
冷却片刻(使水分蒸发)
? 再次烤化石蜡即可入二甲苯脱蜡
快速石蜡切片 常规石蜡切片
取材 1×1×(,)0.2cm 1.5×1.5×0.2,0.3
固定 20%福尔马林,85? 5min 10%福尔马林,45? 1h
脱水 纯丙酮,85? 4min 乙醇(低?纯),45? 2h
透明 不需 — 二甲苯,45? 15min
浸蜡 石蜡,85? 4min 石蜡,65? 30min
包埋 利用空白蜡块 数min 常规、冷却较慢 30min
切片 常规,需涂胶 数min 常规,不需涂胶 数min
烤片 火烤 数min 烤箱或电吹风,60,70? 1h
染色 H-E 数min H-E 数min
合计 30,40min ,5h
? 冰冻切片在组织学技术中应用广泛,对临床病人的
术中快速病理诊断尤其具有重要意义,目前快速病
理诊断的趋势
? 冰冻切片制作时不经各级乙醇的脱水、二甲苯的透
明等过程,故对脂肪和类脂的保存较好,常用于脂
肪染色和神经组织髓鞘的染色
? 组织化学染色等也常用冰冻切片
? 新鲜组织、甲醛固定的组织和低温
冷藏的组织块等用于于冰冻切片
? 大小、厚度以1cm×1cm×0.3,
0.4cm为宜
? 恒冷箱切片机种类较多,常根据实际情况加以选用
? 一般调节温度为-25?左右
? 将带组织并涂有OCT的组织固着器放于到速冻台上
? 冻结后装到机头上,调整组织切面于刀刃平行并贴
近刀刃,将厚度调到适当位置后,进行切片
? 切出的切片直接用载玻片帖附
? 固定、水洗后可直接染色
? 染色方法可按常规H-E染色或快速
石蜡 H-E染色
? 略
? 略
? 略