21号染色体STR多态与Down's综合征基因诊断的研究道

21号染色体STR多态与Down's综合征基因诊断的研究道 重庆医科大学 硕士学位论文21号染色体STR多态与Downs综合征基因诊断的研究 姓名:景春梅 学位级别:硕士 专业:遗传学 指导教师:王应雄 20070501 重庆医科大学硕士研究生学位论文 符号说明英文缩写 英文名称 中文名称 ,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,, 短串联重复序列 ,,, ,,,,,;,,,, ;,,,, ,,,;,,,, 聚合酶链式反应 ,，, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,, 多态信息量 ,,,, ,,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,;;,,,,,,,;,,, 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, 四甲基乙二胺 ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 三羟甲基氨基甲烷 ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,; ,;,, 乙二胺四乙酸 ,;, ,;,,,,,,,, 丙烯酰胺 ,,, ,,,,,,,,, ,,,,;,,,,,,,, 亚甲双丙烯酰胺 ,, ,,,,,,,,,,,,,,; ,;,, 过硫酸胺 ,, ,？,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, 四溴乙烷 ,,,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 三磷酸脱氧(核糖)核苷 ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, 二溴乙烷 ，,,,,(, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,, 胰岛素样生长因子结合蛋 白(, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,;,, 硝酸银 ,,,,,, ,,, 研究生学位论文独创性声,,,, ;,,,,,,;,, 碳酸钠 重庆医科大学 明 本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果(据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与若有不实之处，本人承担一切相关责任( 学位论文作者签名:盘～鑫控 日期:兰亟:生二〔庄 学位论文版权使用授权书 本入完金了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学(本人保证毕业高校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学(学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅(学校可以公布学位论文的全部或部分(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文( 论文作者签名: 指导教师签名: 日 期: 重庆医科大学硕士研究生学位论文 ,,号染色体,,,多态与,,,,’,综合征 基因诊断的研究 摘要 目的 应用聚合酶链式反应(,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,,，,,,)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色,,,技术对,,号染色体上,,,,,,和,,,,,,,,两个短串联重复序列(,,,,, ,,,,,, ,,,,,,，,,,)基因座多态性进行分析，探讨应用,,,多态性进行,,,,’,综合征诊断的可行性。为临床诊断,,,,’,综合征，提供一简便、准确、快速和费用低廉的方法。同时运用此方法对,,,,’,综合征的双亲进行分析，了解该病的遗传规律。 方法 ,、选择,,号染色体上,,,,,,和,,,,,,,,两个,,,基因座，合成特异性引物。分别对,,,例,,,,’,综合征患儿及,,例患儿父母的基因组进行,,,，扩增特异性片段。 ,、对扩增产物进行变性聚丙烯 酰胺凝胶(,,)电泳，硝酸银染色，凝胶成像分析。 , 重庆医科大学硕士研究生学位论文 结果 ,、正常人在一个,,,基因座上的基因型有两种情况:?两个不同等位基因构成的杂合子，凝胶电泳上表现为粗细一样的两条带。?两个相同等位基因构成的纯合子，凝胶电泳上是两条相同等位基因条带的重叠，其宽度和浓度约为单个等位基因条带的,倍。 ,、,,,,’,综合征患儿的等位基因数目和(或)条带浓度有三种特征性改变:?,个不同的等位基因，电泳图上为浓度相同的,条带。?,个等位基因中的,个相同，电泳图上为两条带，其中一条的浓度是另外一条的,倍。?,个相同的等位基因，电泳图上为一条带，这条带的浓度和宽度约为正常对照条带的,倍。 ,、,,例,,,,’,综合征家系分析显示，,,,,’,综合征患儿电泳条带包含了母亲的全部电泳条带，而与父亲的电泳条带只有部分相同。 结论 ,、利用,,号染色体,,啦点作为遗传标记，采用,,,扩增技术结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色技术，可用于诊断和筛查,,,,’,综合征。 ,、,,,,’,综合征双亲电泳结果表明，,,,,’,综合征发病与父母的核型无关，它是减数分裂时不分离的结果，多余的一条,,号染色体 , 重庆医科大学硕士研究生学位论文一般来自于母亲。 关键词:,,,,’,综合征，短串联重复序列，基因诊断 , 重庆医科大学硕士研究生学位论文,,, ,,, ,,,,,,,,,，,, ,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,, ,，,,,,,，, ,, ,,,,’, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,;,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,, ;,,,,,,,,, ,,，,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,(,,,),,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,,(,,,)，,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,(,, ,,, ,,,, ,,,,，,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,’, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,(，, ,,,, ,,,,,,,,,,,, , ,,,,, ,,, ,;;,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,’, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,; ,,,,,,( ,,,,,,, ,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,’, ,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,),,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,),, ,,, ,,,;,,,; ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,( ,(,,, ,,,,,;,, ,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,;,,, ,, , 重庆医科大学硕士研究生学位论文,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,,, ,,,(,,),,,;,,,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,( ,,,,,,, ,(,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,, , ,,,,,,,:, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, , ,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,,(?,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,, ,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,,,, ,,, ,,,;,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,( ,(，, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,;,,,,;,,,,,,,; ;,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,, ,,, ,,, ,,,,’, ,,,,,,,,:?，, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,，,, ,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,, ,, ,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,;,,,,,,,,,,,(?，,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,。,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,;,,, ,,,,,，,,, ,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,(?,, ,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,。,,,,, ,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,,,;,,,,,,,,,,,(,,,,, ,,, ,,,;,,,,, ,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ;,,,,,,( ,(,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,, ;,,,, ,,,,’, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,’, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,,( , 重庆医科大学硬士研究生学位论文 ,,,;,,,,,,, ,(,, ,,,,,,; ,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,(,,,,,, ,,, ,,,,,,,,),,;,,,,,,,,, ,,，,,,,’, ,,,,,,,, ;,, ,, ,,,,,,,,, ,, ,,,，,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,( ,(,,, ,,,,,,, ,, ,,,,’, ,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,, ,, ,,,,’,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,(，, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,;,,,, ,, ,,,,,,; ,,,,,,,,(,,,,,,,，,,, ,,,,, ;,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,( ,,, ,,,,,:,,,,’, ,,,,,,,,，,,,,, ,,,,,, ,,,,,,，,,,, ,,,,,,,, , 重庆医科大学硕士研究生学位论文 ,,号染色体,,,多态与,,,,’,综合征 基因诊断的研究 刖 罱 ,,,,’,综合征是一种最常见的染色体病，以先天性智力低下和多发性先天畸形为主要症状，其发病率为,,,,,(,,,,,,?。患者核型主要为(,,(,,,,,，，,,)，产生原因是卵子或精子发生时，减数分裂中,,号染色体不分 离，形成异常卵子或精子。,,,,’,综合征的形成与母亲的年龄增高(,,岁以上)和年龄过小(,,岁以下)密切相关。 目前临床上诊断,,,,’,综合征主要采用染色体显带、血清学检查、超声检查和,，,,等技术。但染色体显带技术所需时间较长，尤其在产前诊断中，羊水细胞不易培养，不适于大规模的产前普查;血清学及超声检查方法由于特异性不高，应用受到一定的限制;虽然,，,,技术特异性高，但所需仪器和试剂成本昂贵，不利于推广。 近年来，国外学者广泛利用,,号染色体上的,,,位点作为遗传标志来诊断,,,,’,综合征嘲。,,,广泛分布于真核生物基因组中，约占人基因组的,,,，其核心序列为,,,,,。这类基因序列多位于基因非编码区以及染色体近端粒区，其高度多态性主要来源于串联重复序列的不同，呈盂德尔共显性方式遗传。其变异范围大，杂合性高，重组率低，扩增效率高，扩增条件要求相对低。,,,,’,综合征患者,,号染色体含量比正常人多,,,，所以可以利用,,号染色体上,，,位点，间接观察染色体的数目。,,,,年国外学者【,,报道，利用染色体特异性,，,基因座，通过荧光,,,结合自动分析仪对羊水标本进行,,,,’,综合征的快速诊断，结果经细胞核型分析证实，其准确性和阳性检出率大于,,,。但该方法采用的仪器成本昂贵，很难得以实际应用。,,,,年有研究采用,,,,，，作为遗传标志【,,，同位素标记聚合酶链式反应，对其进行定量分析，由于该方法使用同位素，易造成污染，且仅用一个遗传标志会使分析结果产生误差。 ,,年代初，有学者提出， 重庆医科大学硕士研究用定量,,,方法可对染色体数日畸变做出基因诊断。 , 生学位论文这种方法是以特定染色体靶序列的扩增为基础，即在,,,扩增过程的指数增加阶段，扩增产物的量与最初靶,,,的量成比例关系。这样，选择某一染色体上特定序列作为遗传标记进行,,,扩增，通过扩增产物量就能确认细胞中存在这一特定染色体的数目，而诊断出染色体数目的畸变。 查询美国国立图书馆,,,,年,月更新的,,万种生物已知的,,,序列发现，只有人类基因组,,,,,,,,和,,,,,,位点序列完全与之匹配，这就意味着非人类来源的,,,模板在,,,扩增中不能被扩增，从而提高了,,,,,,,,和,,,,,,基因位点扩增的特异性。 ,,,基因座在一个个体的不同组织的基因型中都具有同一性,,〕，鉴于,,号染色体长臂上,,,,,,和,,,,,,,,这两个多态性位点在人群中的异质性大，杂合度高(杂合度都为,(,,〔,,,,)，,,,检测特异性好，提示可以利用这两个位点诊断,,,,’,综合征，因此，本研究选择这两个位点(,,,,,,,,,,,,,,,)作为遗传标志，采用,,,技术、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色技术，对,,,,’,综合征患几,,号染色体上,,,位点多态性进行分析，探索,,,,’,综合征基因诊断的新途径，为,,,,’,综合征产前诊断、群体筛查及预防，提供简便、准确、快速、费用低廉的有效方法。 , 重庆医科大学硕士研究生学位论文,材料,(,标本来源,(,(, ,,,例,,,,’,综合征患儿 ,,,,年,月至,,,,年,,月在重庆儿童医院经,显带分析确诊的,,,例,,,,’,综合征患儿，其中男,,例、女,,例。,,,例,,,,’,综合征患儿核型均为,,，,, (,,)，，,,。,(,(, ,,,,，,综合征患儿双亲 ,,例,,,,’,综合征患儿双亲的染色体经,显带分析确认核型均为,,，,,和,,，,,。,,例,,,,’,综合征患儿的母亲年龄在,,岁以上，其中又有,,例患儿为第二胎，而其第 一胎小孩经,显带分析确诊为正常核型。,(,主要仪器与设备 ,,,,,,电泳仪，,,,分析仪(,,,,(,)，凝胶成像仪。,(,主要试剂 细胞裂解液、,,,,，，、,,,(?、氯仿、,,,乙醇、无水乙醇、丙烯酰胺(,;,)、亚甲双丙烯酰胺(,,,)、过硫酸胺溶液、三羟甲基氨基甲烷(,,,,)、硼酸、乙二胺四乙酸(,叽,)、,,,、四甲基乙二胺(,,,,,)、尿素、甲醇、冰乙酸、硝酸银、碳酸钠、甲醛、醋酸。,(,溶液配制,(,(, ,,,丙烯酰胺—匝甲双丙烯酰胺溶液 ,,,,,(,,，,,, ,(,, ,,,,, ,,,,溶解定容至,,,,,。用于变性聚丙烯酰胺凝胶的配制，装入棕色瓶内，,’,避光保存。,(,(, ,,,过硫酸胺溶液 ,,,(,,，去离子水,,,(用时现配)。用于变性聚丙烯酰胺凝胶的配制。过硫酸胺提供驱动丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺聚合所必需的自由基。它常与,,,,,联用，因为,,,,,能够催化过硫酸胺形成自由基而加速丙烯酰胺和亚甲双丙烯 ,, 重庆医科大学硕士研究生学位论文酰胺聚合。,”,,可保存一周，一,,”,可保存一个月。,(,(, ,×,,,溶液(,,,(,) ”，,,, ,,,，硼酸,,(,,，,,,,,(,，，,,，,,,,,数滴，,,,,,定容至,,,,,,。用于变性聚丙烯酰胺凝胶的配制。,(,(, ,,变性聚丙烯酰胺分离胶配制 ,,,,;,,,,, ,,(, ,,，,,,,, ,,(, ,,，,,,,, ,(,, ,,，,,,,, ,(,,,,,，,,,,, ,,(,,,，尿素,,(,,,，总体积,,, ,,。在,,,,,的烧杯中，依次加入,,,丙烯酰胺,亚甲双丙烯酰胺、,,,(,的,,,,,和,,,,,，混匀后再加入,,,,,和,,,,,，震荡混匀，立即使用。,(,(,上样缓冲液配制 ,,,,,酰胺,,,,，,(,,,,,甲苯蓝,,,，,(,,,溴酚蓝,,,。用于上样时,,,变性及电泳结束时间的指示。,(,(, ,(,,硝酸银(,,,,,)配制 ,,,,, ,(,,，去离子水,,,,(用时现配)。用于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的染色。,(,(,显色液配制 ,,,,,,,,，,(,,甲醛。用于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的染色。 ,, 重庆医科大学硕士研究生学位论文,方法,(,提取基因组,,,,(,(, ,,,提取 将全血标本,,, ,,装入,,管中(肝素抗凝)。,, ,,,,,,,,离心,,,,，留取白细胞层，加入蒸馏水清洗，,, ,,,,,,,,,离心,,,,，重复,次，直至上清液中无红细胞。加入细胞裂解液,,,,,，充分振摇。加入,,,(，，液,,,,，室温放置,,,,,，加入,,,(，,,,,,,,混匀，加入氯仿，充分振摇,,,,， ,, ,,,,,,,,,离心,,,,，将上清液取出，加入无水乙醇振荡，产生的沉淀即为提取出的,,,。用,,,乙醇清洗,(,次，在恒温器上将乙醇拷干。加入,,,,, ,,缓冲液溶解,,,，,,,,,冰箱保存。,(,(,琼脂糖凝胶电泳检测提取的,,,样本 制胶 ?称取琼脂糖,(,,，加入,,,,溶解液。?融胶在微波炉中加热到胶产生大量的气泡时，拿出摇匀，继续加热到完全溶解，拿出摇匀，再加热到沸腾。必须使胶完全混匀和溶解，减少可能因此引起的胶中孔径不均匀影响分离效果。?倒胶用水浴的办法使胶冷却至,,?左右，沿着制胶板的一侧，缓缓地一次性倒入。梳子预先放好并固定，梳孔的体积能点下所有的样品。?室温凝胶,,,,,中不要碰到梳子，尽量保持胶的位置不移动。?拔梳子，放入电泳槽。缓缓地将梳子垂直从梳孔拔出，尽可能使梳子是同时从各个胶孔 拔出。暂时不用的胶最好放入电泳槽电泳液中浸泡，电泳液要浸没胶,,,。 上样电泳 ?样品中加入,,,,,,, ,,,,,,使其终浓度为,×，混匀。 ?沿着胶孔的边缘匀速加入样品，避免碰坏胶孔。枪头不要吸过多的气泡，拔起时不要用力过大，以免将样品带出。每点完一个样，要用,,,,,,清洗枪头，避免样品混杂。加样的速度越快越好，点样的量不要太大。 ?接通电源，在电压梯度约,,,,;,，电流强度,,,,,,;,的条件下，电泳约 ,, 重庆医科大学硕士研究生学位论文 ,,,,,，关闭电源。 染色成像 用,(,,,,,,的,,溶液染色,,,,,。在凝胶成像仪上观察实验结果。,(,,,,扩增,(,(,引物合成 所用引物为两对,,号染色体上,个,,,标记的引物,,,,,,和,,,,,,,,〔,？,,。由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 ,,,,,,上游引物:,’,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,， ,,,,,,下游引物:,’,,，兀,口(兀,,,,,,,,,,,,,,,(,， ,,,,,,,,上游引物:,’,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,， ,,,,,,,,下游引物:,’,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,，,(,(, ,,,扩增体系 两个基因座采用同一条件，总体积为,,,,，内含,, ,,,,，,,,,,, ,,,，,,,,,,,,，上下游引物各,,,，,,,聚合酶,,】,，模板,,, ,,,，将各反应物混匀后，加石蜡油,,,。,(,(, ,,,扩增热循环参数 ,,”,预变性, ,,,，,,”, ,,,，,,”, ,,,,，进行,,个,,,，然后,,”, 循环，最后,,?延伸,,,,。,(,(,琼脂糖凝胶电泳检测,,,扩增产物 配制,(,,的琼脂糖溶液，将,,,扩增产物与,,,,,,,,, ,:,混匀上样。标本放负极，,,,,,电压电泳,,,,,，放入,,染液中，染色,,,,,，在凝胶成像仪上观测结果。,(,变性,,,,电泳结合硝酸银染色技术分离扩增的,,,,(,(,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 变性聚丙烯酰胺凝胶制各 ?参照前面液体配制的方法，根据本研究所需分离的,,,片段大小，配制 重庆医科大学硕士研究生学位论文,,变性聚丙烯酰胺分离胶,,,,。 ?按要求安装好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用,,的琼脂糖封边，防止封闭不严而使变性聚丙烯酰胺分离胶漏出。 ?将安装好的玻璃电泳板倾斜成,,(,,”,角。 ?立即插入梳子，防止梳齿下产生气泡，用一有力的夹将梳子固定在一边的玻璃板上，然后将玻璃板斜靠在物体上，使成,,”,角，减少液体泄漏。 ?室温聚合,,后，将玻璃板插入电泳槽中，上紧，倒入,×,,,缓冲液。 ?小心取出梳子，立即用缓冲液冲洗加样孔，因为梳子取出后，梳子上吸附的凝胶顶部未聚合的丙烯酰胺会流入加样孔内聚合，产生不规则的表面，将导致,,,电泳带型不规则。 上样与电泳 ?将待测样品与上样缓冲液按,:,混匀后于,,,,,煮沸,,,,,，使,,,充分变性，立即放入冰浴中骤冷，,,,,,后在冰浴状态下上样。 ?用微量加样器加入,, ,,,样品于凝胶孔中，加样时不要产生气泡。 ?在电泳槽中加满电泳缓冲液，并将电泳槽与电源相接，,,,,预电泳,,,,，再将电压调至,,,,继续电泳，直至溴酚蓝到达凝胶底部时结束电泳，电泳时间大约为,,,( ?电泳完毕，切断电源，取出胶板，小心移去一块玻璃板，让凝胶吸附在另一块玻璃板上。 ?染色。,(,(,硝酸银染色 ,,,甲醇与,,,冰乙酸混合溶液固定,,,,,，漂洗,次，每次,(,, ,,,,。,(,,硝酸银染色,, ,,,，漂洗,次，每次,,,,。,,,,, ,,,,,与,,,显色液的混合溶液快速漂洗,次，然后在显色液中显色至电泳条带清晰而背景颜色适当。,,冰乙酸终止反应,,,,。 ,, 重庆医科大学硬士研究生学位论文,结果,(,提取的,,,琼脂糖凝胶电泳结果(图,)。 图, ,,,琼脂糖凝胶电泳结果 ,,,(, ,,,,,?,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, 凝胶成相仪上各个样本的,,,电泳条带均出现一条强带，说明提取的,,,质量较高。 重庆医科大学硕士研究生学位论文,(, ,,,,’,综合征患儿,,,扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果(图,)。 图, ,,,,’,综合征患儿,,,扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果 ,,,?, ,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,;,,,, ,, ,,,,’, ,,,,,,,, 条带,,,为,,,,,,,,扩增片段，扩增后的片段长度约为,,,,,,,,,。条带,,,,为,,,,,,扩增片段，扩增后的片段长度约为,,,(,,,,,。由图,可见两个多态性位点均为两条带，且亮度较高，说明扩增出的目的片段含量高。 ,, 重庆医科大学硕士研究生学位论文,(, ,,,,，,综合征患儿及正常对照的变性,,,,电泳及硝酸银染色结果(图,)。 ,,:,,,,’,综合征患儿及正常对照的变性,,,,电泳及银染结果 丘酗,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,’, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,, , ,,,,,, ;,,,,,, 条带,?,为,,,,,,,,的扩增片段，条带,(,,为,,,,, ,的扩增片段。 正常人在一个,,,基因座上的基因型有两种情况:一种是两个不同等位基因构成的杂合子，两个等位基因的拷贝数是相同的，因此，凝胶电泳上表现为粗细一样的两条带(见图,的泳道,和,所示);另一种是两个相同等位基因构成的纯合子，凝胶电泳上是两条相同等位基因条带的重叠，其宽度和浓度约为单个等位基因带的,倍(见图,镜溃埠停顾 荆 ?检测,,,例,,,,’,综合征患儿全血样本，计数每例样本的等位基因数目，比较它们的浓度和宽度的差别，并与正常对照样本进行比较，结果发现,,,,，,综合 ,, 重庆医科大学硕士研究生学位论文征患儿的等位基因数目和(或)条带浓度有三种特征性的改变。第—种:,个不同的等位基因，电泳图上为浓度相同的,条带(见图,泳道,和,,;,和,,所示)。第二种:,个等位基因中的,个相同，电泳图上为两条带，其中一条的浓度是另外一条的,倍(见图,泳道,和“;,和,,所示)。第三种:,个相同的等位基因，电泳图上为一条带，这条带的浓度和宽度约为正常对照条带的,倍(见图,泳道,和,,所示)。 ,,.