基因工程IFN_2a和IFN_2b对肿瘤细胞生长的抑制作用

基因工程 IFN�2a和 IFN�2b对肿瘤细胞生长的抑制作用 苏州医学院基因工程研究室 � (苏州市 215007) � 杨吉成 � 李丽娥 � 盛伟华 � 董宁征 � 徐 � 伦� 摘 � 要 � 为了研究不同品牌不同亚型基因工程��干扰素的抗肿瘤效应, 采用 MT T 法将不同浓度的��干扰素分别对 5 种肿瘤 细胞进行生长抑制实验。结果表明不同品牌的 10 000 IU / ml, 1 000 IU / ml, 100 IU / ml 的 IFN�2a或 IFN�2b对人脑胶质瘤细胞 ( SH G�44) ,人骨肉瘤细胞(H OS�8603) , 人白血病细胞( HL�60) ,红白血病细胞( K562)和淋巴瘤细胞( Raji)的 生长均有不同程度的 抑制作用。其抑制率分别为 20% , 10% , 5%左右。进口和国产的不同品牌 IFN�2a和 IFN�2b对上述 5 种肿瘤细胞株均有较明显的 生长抑制效应, 而且抑制的百分率均相近。 关键词 � 不同类型干扰素 � 肿瘤细胞 � 生长抑制率 Inhibition Effect of Recombination Interferon �2a and �2b on Tumor Cells Growth Yang Jicheng , L i L ie , Sheng Weihua, et al( Gene Eng ineering Unit of Suzhou Medical College, Suzhou, 215007) Abstract � To study t he ant i�tumo r effect o f v arious subtypes o f recom binat in IFN� fr om different m anufactor ies, MT T assay w as applied t o investig ate t he tumo r cells g row th inhibition by differ ent conoentr ations of IFN�. The results show ed that the gr ow th of SH G�44, H OS�8603, H L�60, K562 and Raji cells w er e all inhibited by various IFN�2a and IFN�2b at dose 10 000 IU / ml, 1 000 IU / ml, 100 IU / ml w ith the inhibit or y r at e about 20% , 10% , 5% respectiv ely . Both the import ed and domestic IFN�2a and IFN�2b have produced remarkable inhibit ion effect on these f ive kinds o f tumor cells with similar inhibit or y r at es. Key words� T he various subtypes of inter feron � T um or cells� I nhibito ry gr ow th rat e � � 干扰素的生物活性之一是抗肿瘤作用。不仅体外 实验可以观察到干扰素直接抑制肿瘤细胞的生长( 1) , 而且在临床肿瘤疗效研究中已有许多报道。先前常用 天然的人白细胞干扰素( IFN�)和免疫干扰素( IFN� �) ,但很少采用不同品牌、不同亚型的 IFN�行抗肿瘤 作用的实验研究, 为此我们采用 MT T 法将国产和进 口 IFN�2a和 IFN�2b基因工程干扰素分别对 5种肿瘤 细胞进行了生长抑制效应的实验研究,现报告如下。 1 � 材料和方法 1. 1 � 材料 不同品牌 IFN�2a和 IFN�2b的来源: � 干扰能, In� t ronA( IFN�2b) , 1 � 106 IU/支, 美国先灵保雅产品; � 罗扰素, RoferonA ( IFN�2a ) ,瑞士产, 上海罗氏制药公 司分装, 3 � 106 IU /支; � 安达芬( IFN�2b) , 安徽安科 生物高 技术公司产, 1 � 106 IU/支; �万复洛 ( IFN�2a) ,由上海万兴生物制品公司采用酵母发酵纯 化制备而成, 3 � 106 IU/支。 肿瘤细胞株: � 大脑胶质瘤细胞系( SHG�44)由苏 州医学院附二院赠; �人骨肉瘤细胞系( HOS�8603)从 上海长海医院引进; � 人白血病淋巴细胞系( HL�60) 由上海细胞生物所提供; �人红白血病细胞系( K562) 由上海细胞生物所提供; �淋巴瘤细胞系 ( Raji )由本 院免疫室提供。上述细胞均用 10% 小牛血清的 RPM I�1640培养基培养。 MTT : ( Sigma 产)配制成 0. 5%浓度于 4 � 暗藏。 1. 2 � 方法 干扰素效价测定:将不同品牌的 IFN�2a和 IFN�2b 在Wish 细胞�VSV 攻击病毒的同一系统中, 采用微量 细胞病变( CPE )抑制法测定干扰素效价, 并用国家标 准品[ ( 94)卫生标字 0025]统一校正后,换算成国际单 位( IU / m1)。判定各品牌所标定的干扰素效价是否属 实, 然后再稀释至同一效价浓度进行抗肿瘤试验。 IFN�2a和 IFN�2b抗肿瘤试验 ( M T T 改进法) : 在 96孔板中将 5 � 105/ m l细胞浓度的上述 5种肿瘤细胞 均以50 �l/孔接种,实验组各孔均以 50 �l/孔分别加入 10 000 IU / m l, 1 000 IU / m l, 100 IU/ ml的 IFN�2a或 164 � � � � � � � � � � � � � � � � � � � 实 � 用 � 癌 � 症 � 杂 � 志 � � � � � � � � � � � � � 第 14 卷第 3 期 � 上海万兴生物制品有限公司 IFN�2b,阴性对照孔改以 50 �l/孔加入培养基, 每组均 设 4个复孔,于 37 � , 5%CO2 培养 48 h, 每孔中加入 10 �l的 0. 5% MTT ,继续培养 6~ 8 h, 待细胞对照孔 有明显的紫色甲月赞颗粒出现时,立刻用 10% SDS�HCl 终止反应(改进部分) ,并于 37 � 存放 12 h, 待颗粒充 分溶解后,于酶标仪 A570 波长下测定各孔 OD 值,并 按下列公式计算细胞生长抑制率( IR)。 细施生长抑制率( IR) = ( 1- 实验组 OD 值/对照 组 OD值) � 100% 2 � 结果 不同品牌的 IFN�2a和 IFN�2b,分别在 10 000 IU / ml, 1 000 IU / m l, 100 IU / m l浓度下体外作用于 SHG� 44, HOS�8603, HL�60, K562, Raji 5种肿瘤细胞系, 48 h观察对肿瘤细胞的生长抑制作用,其结果见表 1。 表 1 � IFN�2a和 IFN�2b基因工程干扰素对肿瘤细胞生长的抑制效应( n = 4) IFN 类别 IFN 浓度( IU / ml) 5 种肿瘤细胞生长抑制率( % ) SH G�44 H OS�8603 HL�60 K562 Raji 罗扰素( IFN�2a) � � � 10000 � 27. 0 � 1. 3 � 26. 2 � 1. 4 � 22. 9 � 1. 2 � 20. 9� 1. 6 � 30. 1� 1. 2 1000 17. 5 � 1. 5 18. 5 � 0. 8 14. 3 � 1. 4 14. 0� 1. 3 10. 9� 0. 8 100 3. 2 � 0. 8 4. 6 � 0. 8 8. 6 � 1. 1 7. 0� 1. 8 6. 8� 1. 5 干扰能( IFN�2b) 10000 23. 8 � 1. 5 26. 2 � 1. 7 20. 0 � 0. 5 25. 6� 2. 3 28. 8� 1. 6 1000 14. 3 � 1. 4 15. 4 � 1. 8 11. 4 � 1. 2 14. 0� 1. 5 16. 5� 1. 6 100 4. 8 � 0. 5 6. 2 � 2. 1 2. 9 � 0. 8 7. 0� 1. 7 5. 1� 1. 3 安达芬( IFN�2b) 10000 27. 0 � 2. 1 24. 6 � 2. 3 20. 0 � 0. 5 23. 3� 2. 4 30. 1� 1. 3 1000 15. 9 � 2. 1 12. 3 � 1. 2 14. 3 � 1. 2 9. 3� 1. 2 15. 1� 1. 5 100 6. 3 � 1. 5 4. 6 � 1. 7 2. 9 � 1. 1 4. 7� 1. 3 5. 5� 1. 8 万复洛( IFN�2a) 10000 25. 4 � 2. 4 27. 7 � 2. 1 25. 7 � 2. 3 25. 6� 2. 3 28. 8� 1. 6 1000 11. 1 � 1. 1 16. 9 � 1. 5 11. 4 � 1. 3 14. 0� 1. 5 16. 5� 1. 6 100 3. 2 � 1. 7 7. 7 � 1. 8 5. 7 � 1. 6 7. 0� 1. 7 5. 1� 1. 3 � � 上述结果表明不同品牌的 IFN�2a和 IFN�2b基因 工程干扰素体外对人胶质瘤细胞( SHG�44) ,人骨肉瘤 细胞( HOS�8603) , 人白血病细胞( HL�60) , 人红白血 病细胞( K562)和人淋巴瘤细胞( Raji)均有肿瘤细胞生 长抑制作用,而且随着浓度的增加, 肿瘤细胞生长抑制 率也随之增加。但同一浓度、不同品牌,不同亚型的基 因工程干扰素,其抑制率无明显差异, 10 000 IU / m l浓 度的抑制率在 20%以上, 1 000 IU / m l浓度的抑制率 在 10%以上, 100 IU / ml浓度的抑制率在 5%左右,由 此可见国产的 IFN�2a和 IFN�2b的抑瘤效果与进口产 品无明显差异。 3 � 讨论 干扰素的抗肿瘤作用己受到人们的广泛重视, 其 作用机理有直接和间接作用 2种机制,间接作用的发 挥与促进 NK、LAK 等免疫细胞的杀肿瘤细胞活性及 免疫调节细胞因子分泌, 免疫细胞表面抗原表达 (如 MHC 和 CD抗原等)有关。其直接作用可能与对癌基 因的调控有关, 如可抑制 c�erhB�2 癌基因蛋白产物、 P185 的正常表达, 下调 c�myc mRNA 的转录, 可使 ras癌基因转染的细胞下调 p21蛋白产物表达, 进而可 抑制细胞恶性转化( 2)。也可抑制肿瘤细胞表达核糖体 L23A,由于现已证明核糖体 L23A 是调节肿瘤生长抑 制作用的靶分子之一( 3) , 此外还可能与抑制肿瘤转移 和抑制某些代谢产物有关( 4~ 7)。 检测 IFN�抑制肿瘤细胞生长的方法有多种, 我 们采用 MT T 法既简便、快速、客观, 又无核素污染的 危害,而且此法对贴壁和悬浮培养细胞均通用, 有一定 的参考应用价值。 我们采用 MT T 法证实了不同品牌的 IFN�2a和 IFN�2b不仅对实体瘤细胞系有效, 而且对白血病、淋巴 瘤细胞也有明显抑制生长作用, 有人证实干扰素对 HL�60, K562, Rcji细胞的抑癌效应可能与干扰素能引 起上述细胞凋亡有关( 8)。 我们的研究结果表明国产 IFN�2a和 IFN�2b抑制 肿瘤细胞生长的效果与进口产品无明显差异, 这为国 产干扰素的临床应用提供了实验依据。 � � � � � � � � � � � � 参考文献 1� 刘沪丽, 杜 � 平.人�干扰素与人�干扰素的抗肿瘤细胞增 165 第 14 卷第 3 期 1999年 9月 � � � 实 用 癌 症 杂 志 TH E PRACT ICAL JOURNAL OF CANC ER � � � Vo l. 14, No. 3 Sept ember 1999 殖作用的比较.中国免疫学杂志, 1989; 5(增刊) : 6. 2 � 魏海明,吴惠联. 干扰素对癌基因调控的研究. 中国肿瘤生 物治疗杂志, 1996; 3( 3) : 233. 3 � Jing H, Lin JJ, T ao J, et al. Suppression of human r ibosomae protein L23A expression during cell g row th inhibition by IFN��. Oncogene , 1997; 14( 4) : 473. 4 � Majew ski S, Szmuv lo A , M arczak M , et al. Synerg istic effect o f retinoids and IFN�� on tumor�induced angiogenesis; anti� ang iog enic effect on H PV�harbo ring t umo r�cell line. Int J Cancer , 1994; 57( 1) : 81. 5� Majewski S, M arczak M , Szmurlo A , et al. Retinoids, IFN� �, 1. 25�dihydroxy vitamin D3 and t heir combination inhibit angiogenesis induced by non�H PV�harbo ring tumor cell line. Cancer Lett , 1995; 89( 1) : 117. 6� Dao T , Iw aki K , Takeuchi M , et al. Natural human IFN� in� hibits the adhesion of human carcinom a cell line to human vascular endothe lium. J Int erferon Cy tokine Res, 1995; 15 ( 10) : 869. 7 � Milano GF , Schel JL , Etienne M C, et al. I nhibition of dihy� dropyr imidine dehydrogenase by IFN�: experimental data on hum an tumo r cell lines. Cancer Chemother Pha rmacol, 1994; 34( 2) : 147. 8� 于 � 亮, 殷忠其综述.干扰素与细胞凋亡. 国外医学�输血及 血液学分册, 1997; 20( 6) : 334. (收稿日期 1998- 10- 20� 修回日期 1999- 02- 24) 软组织肉瘤近距离放射治疗 4例报告 江苏省肿瘤医院放疗科 � (南京市 210009) � 朱 � 军 � 翟振宇 � 顾仲义 � 王德镇 � 顾本惠 � � 选择扩大切除术合并放射治疗的综合治疗,控制局部复发 和转移, 并最大程度保存机体功能, 这是目前软组织肉瘤治疗 的总原则。为达到这一目的, 放射治疗, 特别是高剂量率 ( HDR)近距离放射治疗已被广泛应用。我院 1993 年至 1995 年采用近距离放射治疗技术 (以下简称后装治疗 )治疗 4 例软 组织肉瘤, 现报告如下。 1 � 资料与方法 1. 1 � 一般资料 4 例患者,男性 2例, 女性 2 例。分别诊断为右膝关节外侧 � 低度恶性粘液脂肪肉瘤�(术后)、右上臂� 隆突性皮纤维肉瘤� ( 2次术后)、左大腿� 平滑肌肉瘤� ( 2 次术后)、右眶内�血管内 皮肉瘤� ( 5 次术后)。收入本科后, 均进行常规检查 ,无心肺功 能异常, 1 例外院手术者经本院病理会诊证实, 1 例经免疫组化 确诊。 1. 2 � 后装治疗方法 对 3例肢体软组织肉瘤患者,采用瘢痕处组织插植法, 1例 眶内血管内皮肉瘤患者,采用眶内蜡块填充后于肿块一侧壁放 置施源器。插植范围根据术中、术前肿块大小、位置、与周围浸 润情况确定。插针方向与瘢痕长轴方向垂直, 纵轴方向包括瘢 痕上下端并根据病理类型适当外放 1~ 2 cm ,横轴方向分别距 瘢痕内外侧各 3~ 5 cm (亦根据病理类型确定) , 本院使用的是 核通公司的192I r 高剂量率近距离治疗机, 施源器放置按巴黎系 统布源法执行。 插植时, 常规消毒、局部麻醉后用随机提供的插植针, 针距 为 1. 5 cm ,固定插植针后摄双角度的定位片,用变角投影坐标 重建法输入电脑行等剂量线几何优化处理。 3 例软组织肉瘤治疗时, 参考点设在距源 10 mm 处, 基准 点剂量 20 Gy ,参考剂量 17 Gy ;眶内血管内皮肉瘤患者施源器 放在肿块一侧眶壁, 源轴距眶壁 5 mm, 参考点设在眶壁粘膜下 5 mm 处,参考剂量为 8 Gy。 1. 3 � 外照射 4 例患者中 1 例不愿做外照射治疗,连续做过 2 次后装治 疗, 另 3 例均为 1 次后装治疗后常规外照射, 剂量为常规外照 射量减去后装治疗量。 2 � 结果 眶内血管内皮肉瘤患者, 近距离治疗后出现恶心、呕吐,对 症处理后好转, 结束治疗 2 a, 一直随访至今, 局部及远处皆无 局部复发及远处转移 ,余 3 例软组织肉瘤患者, 插植治疗后 7~ 15 d 内均出现插植针皮肤进出点溃破, 经康复新、庆大霉素外 敷, 2周( 1 例 3 周)后溃破愈合, 再行外照射,均随访 4 a至今无 局部复发和远处转移。 3 � 讨论 软组织肉瘤多发生在肢体,由于其生长特性和特定的解剖 部位, 手术往往不能彻底切除, 容易局部复发, 国内报道单纯手 术局部复发率高达 23. 1% ~ 43. 5% ( 1, 2) , 本组 4 例均为术后或 2 次手术以上术后复发而收入放疗。为达到根治目的, 减少局 部复发, 以前多采用截肢术( 1, 3) , 由于创伤较大、影响功能, 特别 (下转第 173 页) 166 � � � � � � � � � � � � � � � � � � � 实 � 用 � 癌 � 症 � 杂 � 志 � � � � � � � � � � � � � 第 14 卷第 3 期