第22章 引起侵袭性感染的真菌

null第22章 引起侵袭性感染的真菌 第22章 引起侵袭性感染的真菌 概 论概 论引起侵袭性感染的真菌，又称深部感染真菌，是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等，其中以隐球菌感染较常见。 组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌，只有在一定条件下才引起机体致病。假丝酵母菌属假丝酵母菌属假丝酵母菌（Candida），俗称念珠菌，生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、假丝酵母菌属。 本属菌有150多个种，其中有11种对人有致病性，其中以白假丝酵母菌为最常见的致病菌。 白假丝酵母菌白假丝酵母菌临床意义： 女性的假丝酵母菌性阴道炎、外阴炎； 男性假丝酵母菌龟头炎、包皮炎； 体质虚弱婴儿的鹅口疮； 假丝酵母菌性肠炎、肺炎、膀胱炎、肾孟肾炎和心内膜炎等； 中枢神经系统白色假丝酵母菌病，如脑膜炎、脑膜脑炎、脑脓肿等。 null肾脏白假丝酵母菌感染null白假丝酵母菌的生物学性状特征 形态：菌体圆形或卵圆形 繁殖方式：芽生 组织内：芽生孢子及假菌丝 培养时：厚膜孢子（本菌特征之一） 菌落： 25℃或37℃培养1~4d后，培养基表面可出现奶油色类酵母型菌落 营养：不高 null 白假丝酵母菌的孢子（1000×）null 口腔白假丝酵母菌 （1000×） 外阴白假丝酵母菌 （1000×）null白假丝酵母菌的假菌丝和厚膜孢子 （1000×）null沙氏斜面血平板null白假丝酵母菌菌落白假丝酵母菌微生物检验白假丝酵母菌微生物检验直接检查 直接镜检 圆形或卵形芽生孢子、假菌丝 G试验 抗原检测、抗体检测、核酸检测等 分离培养 沙保弱培养基：乳白色酵母样型菌落 镜下：假菌丝、成群的卵圆芽生孢子 null鉴别和鉴定 芽管形成试验 厚膜孢子形成试验 TZC试验 糖同化和糖发酵试验 显色培养基 动物试验 血清学试验 芽管形成试验芽管形成试验方法：用无菌小试管，加动物（兔、牛、羊）及正常人血清0.2－0.5 ml,接种少量白色念珠菌的沙氏培养物，充分混匀，置37℃水浴箱中孵育，每隔1小时，用接种环或滴管取含菌血清，置于载玻片上，加盖玻片镜检，共检查三次。 注意事项： 芽管形成检查时间不得超过3小时，因3小时以后可生长假菌丝。 芽管形成试验所用菌种应来自沙氏培养物，菌龄为24 - 48小时，接种量约为106 / ml。 芽管形成试验需用已知阳性白色念珠菌作对照，因为血清内可能有芽管形成抑制物质。null牙管形成试验厚膜孢子形成试验厚膜孢子形成试验方法：烧灼灭菌的小刀划取小块米汤培养基，置于灭菌平皿内的载玻片上，并将标本接种其上，加盖玻片，滴加数滴灭菌蒸馏水于滤纸上，以保持平皿内的湿度，25℃培养3－7天，置显微镜下直接观察菌丝、厚膜孢子。 注意事项： 用玉米粉培养基和芋头培养基同样可做本试验。 形成厚膜孢子的温度以25℃最佳。 Tween—80的作用是使假菌丝及厚膜孢子均匀分散生长而不纠缠成团，并促进孢子的形成。nullTZC试验TZC试验方法：将待检菌接种在含0．05g／L氯化三苯基四氮唑(TZC)，白假丝酵母菌不使培养基变色(淡红)，热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，而其他假丝酵母菌使培养基变为红色。 糖同化和糖发酵试验糖同化和糖发酵试验糖同化试验：是测定细菌是否能利用某些糖类物质作为唯一的碳源来生长，因此同化化试验的基础培养基里是没有肉汤或蛋白胨等营养成份的。 方法：1.将1%的各类糖、醇物质浸入4号新华滤纸的小纸片中(园形或方形均可)纸片直径6-10mm。 2.将纸片真空抽干或在超净台内吹干后放-20℃保存备用。 3.制备无营养成份的固体琼脂平板（9CM/12CM均可）。 4.将待检菌0.5浊度均匀涂布于以上平板上，贴上不同的以上含糖纸 片，放于35 ℃ 24-48小时。 5.观察时，若发现某糖纸片四周有明显的细菌生长，则为此糖同化试验阳性null产色培养基动物试验动物试验将假丝酵母菌悬液注射1ml于家兔耳静脉或注射0.2ml于小白鼠尾静脉，白色假丝酵母菌可致动物发病或死亡，肝肾可见多发小脓肿，涂片可见芽生孢子和假菌丝，其他假丝酵母菌对动物无致病性。 血清学试验血清学试验早期诊断可用ELlSA夹心法、免疫酶斑点试验，乳胶凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清中抗白假丝酵母菌抗体。 也可用特异性抗体血清或单克隆抗体进行玻片凝集试验鉴定本菌或分型 热带假丝酵母菌 热带假丝酵母菌 直接显微镜检查 将标本作涂片革兰染色后镜 检，观察革兰阳性的假丝酵母菌。 分离培养与鉴定 标本 沙氏培养基上形成 色暗而干燥的菌落取菌落作TZC反应 取菌 落作糖发酵或同化试验。芽管形成较迟（血清 中6h以上），不形成厚膜孢子、动物试验阴性。 null四种病原性假丝酵母菌的鉴别要点 隐 球 菌 属隐 球 菌 属其中对人致病的最主要是新生隐球菌及其变种（新型隐球菌新型变种、新型隐球菌格特变种和新型隐球菌格鲁比变种）。 新生隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、口腔和肠道中。隐球菌属隐球菌属临床意义 外源性感染, 经呼吸道侵入，由肺经血行播散,可侵犯肺、脑及脑膜、皮肤、骨和关节。 好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。 现已发现新生隐球菌、浅白隐球菌和罗伦隐球菌有致病性。 null形态特征：圆形的酵母样细胞 外周有一层肥厚的胶质样荚膜 繁殖方式：芽生，无假菌丝 菌 落：酵母型菌落，表面粘稠、混浊 荚膜多糖：A、B、C、D四个血清型，归入两个变种组：①新生隐球菌新生变种，有性阶段为新生线黑粉菌，血清型为A、D（临床型）； ②新生隐球菌格特变种，有性阶段为棒杆孢线黑粉菌，血清型为B、C。新生隐球菌生物学性状特征null新生隐球菌菌落null新生隐球菌（墨汁负染色） 隐球菌微生物检验 隐球菌微生物检验 标本采集 通常采集脑脊液、痰、脓汁、尿、活体组织及尸检解剖。 标本直接检查 直接镜检：用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊断 隐球菌脑膜炎最简便、快速之方法。 抗原检测：用免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异 性抗原，以乳胶凝集试验最为常用，此法简便、快速。 核酸检测、药物敏感试验、抗体检测。 null分离培养：将标本接种在沙氏培养基上，病原性隐 球菌在25℃和37℃孵育均可生长，而非病原性隐球菌在37℃时不生长。培养2~5d后观察菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。 其他检查方法 酚氧化酶试验、尿素酶试验、糖同化及发酵试验 新生隐球菌微生物鉴定新生隐球菌微生物鉴定1.酚氧化酶试验 将菌接种L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸 培养基中，培养2~5d，新生隐球菌呈棕黑色菌落。用已 知新生隐球菌和浅白隐球菌分别作阳性和阴性对照。 2.脲酶试验 新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂 培养基的尿素形成NH4和CO2，使培养基pH升高， 培养基由黄色变为粉红色。白假丝酵母菌则为阴性。 3.糖同化及发酵试验 新生隐球菌能同化葡萄糖、半 乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖类、不同化硝酸 盐。非致病性隐球菌则不能同化肌醇。曲 霉 菌 曲 霉 菌 曲霉菌是条件致病菌，人体对其有极强免疫 力，只有在人体免疫功能降低时才能致病。 曲霉可引起呼吸系统曲霉病；全身性曲霉 病；曲霉可产生毒素引起机体食物中毒；致 癌作用 。 最常见的是烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉 null曲霉菌生物学特征 菌丝：有隔，多细胞性，有分枝；足细胞 （接触培养基的部分，厚壁而膨大） 分生孢子梗：从足细胞直立生长 顶囊：孢子梗顶端膨大，半球形或椭圆形 小梗：顶囊上，辐射状，一层或二层杆状 分生孢子：小梗顶端，成串，球形，不同颜色 分生孢子头：菊花样的头状结构 菌落：绒毛状或絮状，菌种不同颜色不同null曲霉结构图null烟曲霉菌落 烟曲霉形态（400×） null黄曲霉菌落 黄曲霉形态（400×） null黑曲霉菌落 黑曲霉形态（400×） null土曲霉菌落 土曲霉形态（400×） null构巢曲霉菌落 构巢曲霉形态（400×） null五种致病性曲霉的比较 曲霉微生物检验 曲霉微生物检验 直接显微镜检查：取痰液等被检材料涂于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢子。 抗原检测（GM、G试验）、抗体检测 分离培养与鉴定：标本接种沙氏琼脂，室温培养后菌落形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特征性的分子孢子头和足细胞。根据不同的曲霉的形态和菌落特征确定菌种。 组织胞浆菌属组织胞浆菌属有两个种：荚膜组织胞浆菌、组织孢浆菌的杜波变种。 本菌传染性极大，主要侵犯网状内皮系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。 组织胞浆菌是一种双相型真菌，在25℃培养时呈典型菌丝体，在37℃培养时为酵母型，位于细胞内或外。 微生物检验微生物检验1.直接显微镜检查　应涂片染色后检查。 痰液等标本：涂片后先用甲醇固定10min，再用姬 姆萨染色镜检 。 皮损、脓液等标本：用20%KOH涂片后镜检 2.抗原检测、药物敏感试验、抗体检测 3.分离培养与鉴定 ①标本 含抗生素的沙氏培养基 25℃培 养，生长缓慢，有时需4~6周才开始生长，逐渐 形成白色至棕色绒毛状菌落 。 null② 转种于血琼脂培养基上，37℃培养，很快形成酵母型菌落。 ③培养物显微镜特征 ：25℃沙氏培养，可以发现特征性的大分生孢子，但初代培养不典型，继代培养可有典型大分生孢子。 ④鉴定：取可疑菌落涂片染色镜检，并作脲酶 试验和明胶液化试验。 null荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状，镜检可见细长有隔菌丝，菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮直径8～14μm，表面有指状突起，形成对组织胞浆菌有突出诊断意义的特征性齿轮状大分生孢子。血液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞中有卵圆形或圆形的酵母细胞。卡氏肺孢菌卡氏肺孢菌卡氏肺孢菌（pneumocycsis carinii,PC），曾称为卡氏肺孢子虫。 卡氏肺孢菌可寄生于多种动物，也可寄生于健康人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏肺孢菌病的传播途径主要是空气传播，在健康人体内，多为无症状的隐性感染。当宿主免疫力下降，如长期使用免疫抑制剂、器官移植、肿瘤、艾滋病等，潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁殖扩散，使肺泡上皮细胞受损，导致间质性浆细胞肺炎，又称卡氏肺孢菌性肺炎（PCP）。 卡氏肺孢菌微生物检验 卡氏肺孢菌微生物检验 直接显微镜检查　 从患者痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中检查PC是确诊本病的重要依据。常用的染色方法有吉姆萨染色、果氏环六亚甲基四胺银染色(GMS)和亚甲胺蓝染色。可以检出包囊和滋养体两种形态。 抗原检测，核酸检测，抗体检测等。null卡氏包囊和滋养体null毛霉目真菌 毛霉目真菌 毛霉目真菌属于接合菌门、接合菌纲，有7个科，主要是毛霉科 。 本病是一种发病急，进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。 毛霉目真菌有无隔菌丝，在一些陈旧培养基中偶见有隔菌丝 。毛霉目真菌微生物检验 毛霉目真菌微生物检验 直接镜检　临床标本 ＋ 20%KOH 湿片，直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，偶见孢子囊及孢子囊梗。 分离培养 临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养基、马铃薯培养基及沙氏琼脂培养基，25℃或37℃培养。 药物敏感试验，抗体检测。 鉴定 根据毛霉、根霉与梨头霉的形态特点。null毛霉 根霉 梨头霉 马尔尼菲青霉 马尔尼菲青霉 双相性，在自然界中以菌丝形式存在，在 组织中则可形成小圆形到椭圆形细胞。 马尔尼菲青霉可引起马尔尼菲青霉病，引起广泛性播散性感染，主要侵犯人的网状内皮系统。 马尼尔菲青霉微生物检验 马尼尔菲青霉微生物检验 标本直接检查：取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结活体组织瑞氏染色后镜检，可见到典型圆形或卵圆形有明显横隔的细胞，常在巨噬细胞内。 分离培养与鉴定：标本接种沙氏培养基上，在25℃培养为青霉相；37℃酵母相。 抗原检测 鉴别要点：马尼尔菲青霉的孢子易与荚膜组织胞浆菌孢子相混淆，但前者孢子常有横隔，从不出芽。 null马尼尔菲青霉 菌丝相null马尼尔菲青霉 酵母相镰 刀 菌 镰 刀 菌 镰刀菌生态适应性强，广泛分布于自然界土壤、植物的地上及地下部分或植物碎片，甚至可存在于沙漠及北极地区。 镰刀菌引起人类感染尤其是在免疫缺陷病人正逐年增多，其发病率和病死率仅次于白色假丝酵母菌和曲霉感染。 镰刀菌微生物检验镰刀菌微生物检验标本直接检验：可见分支、分隔的菌丝，与曲霉的镜下特征相似。 培养鉴定：常有培养基有燕麦培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、石竹叶琼脂、合成琼脂、KCl培养基和土壤琼脂。OA和PDA可用以观察菌落形态和色泽，产孢有时较少。KCl培养基可用以观察分生孢子链的形成。土壤培养基有利于快速形成厚壁孢子。