实验十四血清甘油三酯（TG）的测定

实验十四血清甘油三酯（TG）的测定 实验十二 血清甘油三酯(TG)的测定 血清甘油三酯测定方法较多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，还原及显色等步骤。近年发展的酶学方法测定操作步骤虽然简单，但要许多纯酶制剂，此外还有光散射测定法，亦需要特点器材，故不易推广使用，现介绍两种常用的方法: 一、酶法测定甘油三脂 【原 理】 甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油和ATP在甘油激酶(GK)的作用下生成3,磷酸甘油和ADP，3,磷酸甘油经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。过氧化氢、4,氨基替吡啉和苯酚在过氧化物酶(POD)的微化生成红色的醌类化合物，颜色的深浅与含量成正比。反应过程如下: 、TG 甘油，脂肪酸 1 2、甘油，ATP 3,磷酸甘油，ADP 3、3,磷酸甘油，O 磷酸二羟丙酮，HO 222 4、HO，4,氨基安替吡啉，苯酚 红色醌类化合物 22 【试 剂】 TC酶试剂盒(商品) 【操 作】 取三支试管，按下操作: 管 测定管 空白管 血清(μl) — 20 — TG标准液(μl)(2mg/ml) 20 — — TG酶工作液(ml) 1.0 1.0 1.0 HO(μl) — — 20 2 混匀，37?水浴15分钟，保温结束后，以空白管调零，520nm处比色测定光密度。 【计 算】 TG(mg%) ×2×0.02× 正常值:50,150mg, 【注意事项】 1、清晨空腹血清为好。 2、干粉配成酶工作液后，在2—8?条件下可保存7天。 【临床意义】 血清TG随进食脂肪后即见上升并出现混浊。空腹脂肪餐后2—4小时内，血清混浊度及甘油三酯含量达高峰，8小时后，基本恢复空腹水平。血清TG有随年龄而上升的趋势，体重超过标准者也往往偏高。 家庭性脂质代谢紊乱、糖尿病、肾病综合症、粮原累积病、动脉粥样硬化、酒精中毒、垂体、甲状腺功能低下者、胰腺炎等疾病TG可增高。 原发性β,脂蛋白缺乏、甲状腺机能亢进、肾上腺皮质机能不全等疾病TG均可降低。 二、乙酰丙酮法 【原 理】 血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4，的存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的黄色物质。与同样处理的标准液比色计算，即得血清中甘油三酯的含量，反应式如下: 【试 剂】 1、抽提剂:正庚烷/异丙醇,2/3.5(v/v) 2、0.04MHSO 24 3、异丙醇(A.R) 4、皂化试剂:取6.0gKOH溶于60ml蒸馏水中，然后取异丙醇40ml混合，置棕色瓶中室温保存。 5、氧化试剂:称取65mg过碘酸钠溶于约50ml蒸馏水，然后加入7.7g无水醋酸铵溶解，再加6ml冰醋酸，并加水至100ml。贮棕色瓶内室温保存。 6、乙酰丙酮试剂:0.4ml乙酰丙酮加到100ml异丙醇中，混匀，置棕色瓶内室温保存。 7、三油酸甘油酯标准液: 贮存液(10mg/ml):精确称取三油酸甘油酯1.000g，溶解于抽提剂中，定容至100ml，置冰箱存。 应用液(1mg/ml):贮存液用抽提剂10倍稀释，置冰箱保存。 【操 作】 带塞试管3支，编号，按下表操作: 测定管 标准管 空白管 血清(ml) 0.2 — — 应用标准液(ml) — 0.2 — 蒸馏水(ml) — 0.2 0.2 抽提剂(ml) 2.5 2.3 2.5 0.04MHSO(ml) 0.5 0.5 0.5 24 边加边摇，加好后，剧烈振摇15分钟，静置分成二相后，准确吸取各管上层清液0.3ml，分别加至另外三支试管中。按下表操作: 异丙醇(ml) 1.0 1.0 1.0 皂化试剂(ml) 0.3 0.3 0.3 充分混匀，置65?水浴中3分钟 氧化试剂(ml) 1.0 1.0 1.0 乙酰丙酮试剂(ml) 1.0 1.0 1.0 混匀，置65?水浴中15分钟，取出后冷却，于420nm处，以空白管调零点，读取各管光密度。 【计 算】 甘油三酯mg= ×0.2× = ×100 【注意事项】 1、应空腹采血，否则结果偏高。 2、显色后光密度随时间延长而略增高，故应立即比色。标本多时，可置冷水浴中逐管比色，这样对结果影响不大。